检测β-半乳糖苷酶的红光发射探针及其制备方法、使用方法和应用技术

本申请提供一种检测β

【技术实现步骤摘要】
检测
β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针及其制备方法、使用方法和应用


[0001]本申请涉及分析化学
，尤其涉及一种检测β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针及其制备方法、使用方法和应用。

技术介绍

[0002]作为一种溶酶体外糖苷酶，β
‑
半乳糖苷酶(β
‑
Gal)在人体内起着至关重要的作用，可以清除各种底物中的半乳糖残基，如神经节苷脂、鞘脂、糖蛋白和硫酸角蛋白(RSC.Adv.2016,6,97216
‑
97225；Nat.Commun.2017,8,987)。此外，β
‑
半乳糖苷酶可以抑制细胞增殖，降低菌落形成，诱导细胞周期停滞，并促进培养的结肠癌细胞凋亡，并阻止结肠癌异种移植的生长(Gastroenterolog.2021,160,1179
‑
1193.e1114)。因此，监测活细胞或组织内的β
‑
半乳糖苷酶活性从而监测肿瘤的发生引起了人们极大的兴趣。
[0003]已经探索了一些检测β
‑
半乳糖苷酶的方法，如磁共振、正电子发射断层扫描和单光子发射计算机断层扫描等(Chem.Coummun.2017,53,4505
‑
4508；J.Am.Chem.Soc.2018,140(28),8671
–
8674)。然而，这些方法由于成本高、操作费力、灵敏度适中以及对活细胞中β
‑
半乳糖苷酶的监测无效而受到阻碍(J.Microbiol.Biotechnol.2011,21,236
‑
242)。由于荧光探针的优点，如先进的灵敏度、方便的操作程序、便宜的仪器和强大的生物成像能力，荧光探针在监测活细胞中的β
‑
半乳糖苷酶活性方面受到了广泛关注(Proc NatlAcad Sci U SA.1995,92,160
‑
164)。
[0004]目前开发出一种大斯托克斯位移、高荧光量子产率的红光发射荧光探针用于细胞中β
‑
半乳糖苷酶的检测和辅助早期诊断结肠肿瘤的成像仍然具有一定的挑战。

技术实现思路

[0005]本申请的目的在于提供一种检测β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针及其制备方法、使用方法和应用，以解决上述问题。
[0006]为实现以上目的，本申请采用以下技术方案：
[0007]一种检测β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针，其结构式如下所示：
[0008][0009]本申请还提供一种所述的检测β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针的制备方法，包括：
[0010]将5
‑
乙基
‑8‑
羟基
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
甲醛加入丙酮中，再加入2
‑
(乙酰氧基甲基)
‑6‑
溴四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三乙酸三酯和氢氧化钠，搅拌进行第一步反应后将体系蒸发旋干，进行第一分离纯化得到2
‑
(乙酰氧基甲基)
‑6‑
((5
‑
乙基
‑
7
‑
甲酰基
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑8‑
基)氧基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三酰基三乙酸盐；
[0011]将2
‑
(乙酰氧基甲基)
‑6‑
((5
‑
乙基
‑7‑
甲酰基
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑8‑
基)氧基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三酰基三乙酸盐加入甲醇中，再加入甲醇钠，进行第二步反应后过滤，将固体进行第二分离纯化得5
‑
乙基
‑8‑
((3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
基)氧基)
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
甲醛；
[0012]将5
‑
乙基
‑8‑
((3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
基)氧基)
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
甲醛加入无水乙醇中，再加入2
‑
(苯并[d]噻唑
‑2‑
基)乙腈，搅拌进行第三步反应，反应完毕后过滤，将固体进行第三分离纯化得(E)
‑2‑
(苯并[d]噻唑
‑2‑
基)
‑3‑
(5
‑
乙基
‑8‑
((3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
基基)氧)
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
基)丙烯腈。
[0013]优选地，所述5
‑
乙基
‑8‑
((3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
基)氧基)
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
甲醛和所述2
‑
(苯并[d]噻唑
‑2‑
基)乙腈的摩尔比为1:1。
[0014]优选地，所述第一反应、所述第二反应和所述第三反应均在常温下进行。
[0015]优选地，所述第一分离纯化、所述第二分离纯化和所述第三分离纯化各自独立的使用柱层析进行。
[0016]本申请还提供一种所述的检测β
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针，其特征在于，其结构式如下所示：2.一种权利要求1所述的检测β
‑
半乳糖苷酶的红光发射探针的制备方法，其特征在于，包括：将5
‑
乙基
‑8‑
羟基
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
甲醛加入丙酮中，再加入2
‑
(乙酰氧基甲基)
‑6‑
溴四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三乙酸三酯和氢氧化钠，搅拌进行第一步反应后将体系蒸发旋干，进行第一分离纯化得到2
‑
(乙酰氧基甲基)
‑6‑
((5
‑
乙基
‑7‑
甲酰基
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑8‑
基)氧基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三酰基三乙酸盐；将2
‑
(乙酰氧基甲基)
‑6‑
((5
‑
乙基
‑7‑
甲酰基
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑8‑
基)氧基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑
3,4,5
‑
三酰基三乙酸盐加入甲醇中，再加入甲醇钠，进行第二步反应后过滤，将固体进行第二分离纯化得5
‑
乙基
‑8‑
((3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
基)氧基)
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2
‑
a]喹喔啉
‑7‑
甲醛；将5
‑
乙基
‑8‑
((3,4,5
‑
三羟基
‑6‑
(羟甲基)四氢
‑
2H
‑
吡喃
‑2‑
基)氧基)
‑
1,2,3,3a,4,5
‑
六氢吡咯并[1,2

【专利技术属性】
技术研发人员：周慧俊，甘亚兵，陈攀，刘振洋，尹鹏，李婷，
申请(专利权)人：湖南师范大学，
类型：发明
国别省市：