驼背鲈C-型凝集素CaCTL4E基因、蛋白、载体、重组细胞及其应用制造技术

本发明专利技术涉及驼背鲈C

【技术实现步骤摘要】
驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E基因、蛋白、载体、重组细胞及其应用


[0001]本申请属于分子生物学领域，具体涉及驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E基因、蛋白、载体、重组细胞及其应用。

技术介绍

[0002]驼背鲈(Cromileptes altivelis)，俗称老鼠斑，味道鲜美，极具观赏价值和经济价值，是世界上最名贵的海水鱼种类之一，市场需求巨大。然而，随着驼背鲈养殖规模扩大和养殖时间延长，病害问题已日趋严重。为了有效防控病害对驼背鲈养殖造成的严重影响，保障驼背鲈人工养殖的健康持续发展，深入开展驼背鲈免疫生物学特征和抗病机制等研究已十分必要。
[0003]研究表明，鱼类C
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型凝集素通过其糖识别结构域识别与结合微生物表面的脂多糖、肽聚糖、甘露糖及葡聚糖等糖类结构的病原相关分子模式，引发凝集微生物、诱导吞噬、激活补体等过程，并随着特异性免疫的出现而参与调节特异性免疫。不同鱼类的C
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型凝集素具有不同的识别机制，因此有必要对驼背鲈的C
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型凝集素结合和识别病原相关分子模式的分子机制进行深入研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题在于提供驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E基因、蛋白、载体、重组细胞及其应用。
[0005]本专利技术是通过如下技术方案来实现的：
[0006]一种驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E的基因，所述基因的cDNA核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示：
[0007]atggatagagacaactacaccggcctgcaggagttcacagaagagccaacaggagggaacaatctcattcacgagaacagcaacggctcccagggactgaagcagggcattgagtgtttgaggagtcggactgctctcctgttgcttattggcttcttggcctccatctgtgccaacatactgggttttaaactgaactcggtgcagaagcgttacatccagctgtgtgaggactacaccgctctgggacagagctgttcaaagacagtgaagcagtgcagggcgtgtcctgaacgatggattcagatcggggatcagtgctacttcttcagcagtaacaagctggactggcttcagagcagagatagctgcgcagagatgggcagccatcttaccatactgcacaccatggaacaacatgacgctctggaaaaagaagccaagaaaatcggcggattcgattaccacttctggattggcttgtctgatatagagaccgaaggagactggagatgggtggacaacacaacactgcaacacaattactgggatcagtggagctcagagccaaataaccaccagtcaggaggggaacatggagaggactgcgccaccttagacagccacgcaaagacatggtttgatgttccttgtaatcacatttataaacggatctgccagatggatgccattcagctcaactga.
[0008]所述驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E的cDNA核苷酸编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：
[0009]MDRDNYTGLQEFTEEPTGGNNLIHENSNGSQGLKQGIECLRSRTALLLLIGFLASICANIALTVLLIGR
PVPGAPLDSSSLGFKLNSVQKRYIQLCEDYTALGQSCSKTVKQCRACPERWIQIGDQCYFFSSNKLDWLQSRDSCAEMGSHLTILHTMEQHDALEKEAKKIGGFDYHFWIGLSDIETEGDWRWVDNTTLQHNYWDQWSSEPNNHQSGGEHGEDCATLDSHAKTWFDVPCNHIYKRICQMDAIQLN
[0010]本申请还提供了一种驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E的结构域的核苷酸序列，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示：
[0011]tgtcctgaacgatggattcagatcggggatcagtgctacttcttcagcagtaacaagctggactggcttcagagcagagatagctgcgcagagatgggcagccatcttaccatactgcacaccatggaacaacatgacgctctggaaaaagaagccaagaaaatcggcggattcgattaccacttctggattggcttgtctgatatagagaccgaaggagactggagatgggtggacaacacaacactgcaacacaattactgggatcagtggagctcagagccaaataaccaccagtcaggaggggaacatggagaggactgcgccaccttagacagccacgcaaagacatggtttgatgttccttgtaatcacatttataaacggatctgccag.
[0012]所述驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E的结构域对应的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示：
[0013]CPERWIQIGDQCYFFSSNKLDWLQSRDSCAEMGSHLTILHTMEQHDALEKEAKKIGGFDYHFWIGLSDIETEGDWRWVDNTTLQHNYWDQWSSEPNNHQSGGEHGEDCATLDSHAKTWFDVPCNHIYKRICQ.
[0014]本申请还提供了驼背鲈C
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型凝集素结构域的重组蛋白表达方法，包括以下步骤：
[0015]S1.构建载有所述驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E基因的重组表达载体；
[0016]S2.将步骤S1制备的重组表达载体转化宿主细胞；
[0017]S3.对步骤S2制备的转化后的宿主细胞进行培养；
[0018]S4.对步骤S3培养后的宿主细胞进行蛋白的提取和纯化。
[0019]在一些实施方案中，所述步骤S1包括以下步骤：
[0020]S1.1根据驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E基因的核苷酸序列设计引物Ca
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CTL4E
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F和Ca
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CTL4E
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R；
[0021]S1.2提取驼背鲈的RNA，将RNA反转录为cDNA；
[0022]S1.3以S1.2的cDNA为模板，以S1.1的引物进行PCR扩增；
[0023]S1.4将步骤S1.3的PCR扩增产物连接到表达载体上，得到重组表达载体。
[0024]在一些实施方案中，所述引物Ca
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述基因编码的驼背鲈C
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型凝集素CaCTL4E蛋白，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.权利要求1所述基因的结构域，其特征在于，所述结构域的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。4.根据权利要求3所述结构域，其特征在于，所述结构域对应的氨基酸序列如SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙云，曹贞洁，周永灿，刘志如，吴莹，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：