本发明专利技术属于湖羊分子标记辅助育种技术领域，具体涉及一种与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关的SNPs分子标记g.474011A＞G、引物对、试剂盒及其在湖羊分子标记辅助育种中的应用。一种与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关的SNPs分子标记，该分子标记定位为g.474011A＞G；其中，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA、AG基因型个体，AA与AG基因型个体相比差异不显著。通过本发明专利技术提供的分子标记及其引物对和试剂盒，采用相关检测方法，能够筛选出湖羊的断奶到六月龄日增重性状，起到辅助育种作用。作用。作用。
【技术实现步骤摘要】
SNPs分子标记g.474011A＞G及其在湖羊分子标记辅助育种中的应用
[0001]本专利技术属于湖羊分子标记辅助育种
，具体涉及一种与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关的SNPs分子标记g.474011A＞G、引物对、试剂盒及其在湖羊分子标记辅助育种中的应用。
技术介绍
[0002]湖羊是我国珍稀的绵羊品种，原产于太湖流，所产羔皮花纹美观而著称，是我国特有的羔皮用绵羊品种，也是目前世界上少有的白色羔皮品种，在国际市场上享有很高的声誉，有“软宝石”之称。湖羊肉质鲜美湖羊体型大产肉量高，且肉质鲜美，营养丰富。湖羊肉与其他肉类相比,具有高蛋白、低脂肪、低胆固醇的优点,多汁、膻味小。但湖羊产在肉性能方面与杜泊羊、德国美利奴羊等国外肉用绵羊品种还存在较大差异。因此，非常有必要对湖羊生长性能进行选育，提高湖羊的产肉性能。
[0003]本申请人已有授权中国专利技术专利(公开号：CN109251986A、CN109182553A、CN109251987A、CN109251985A、CN109182554A和CN109055579A)公开了利用GWAS技术筛选的湖羊体尺性状候选功能基因及SNPs，并通过SNPs的群体验证，获得了可用于分子标记辅助育种的SNPs，可用于湖羊肉用性状分子标记辅助育种和湖羊肉用系核心群个体的早期选育。
[0004]ARHGAP24基因(也称为p73
‑
RHOGAP或FilGAP)是Rho GTP酶激活蛋白家族的成员，可作为Rho GTP酶的负调节剂，并影响肌动蛋白重塑、细胞极性、细胞迁移、分化和发育，位于细胞质和细胞连接处，在血管生成过程中发挥重要的调节作用。
[0005]在哺乳动物中Rho GTP家族与多种细胞功能有关，包括肌动蛋白细胞骨架的重组，细胞生长控制，转录调控和膜运输，在动物生长发育过程中还与肺发育，呼吸系统发育，血管形态发生，心脏发育和转录调控有关。通过GWAS分析在杜洛克猪上发现ARHGAP24与其生长性状显著相关结合此前的研究，ARHGAP24中的突变可能与细胞生长调控中的某些功能有关，从而从一些未知的通路调控进一步影响了湖羊的生长特性，以期为湖羊的选育提供有效的分子标记，为今后绵羊育种提供理论依据。
[0006]前期，本申请人还申请了中国专利技术专利申请(CN114381531A、CN114438232A、CN114574596A、CN114480676A)公开了在ARHGAP24基因内含子1部分区内有15个SNPs,其中与湖羊体重、体尺性状显著相关的SNPs位点有4个：1.g.43756G＞A与湖羊体长显著相关，AA型个体的体长显著高于GA型个体(P＜0.05)，GG型个体与GA，AA型个体相比差异不显著(P＞0.05)。2.g.43815G＞A与湖羊体高显著相关，AA型个体的体高显著高于GG型个体(P＜0.05)，GA型个体与GG，AA型个体相比差异不显著(P＞0.05)。3.g.43851G＞A与湖羊体长显著相关，AA型个体的体长显著高于GA型个体(P＜0.05)，GG型个体与GA，AA型个体相比差异不显著(P＞0.05)。4.g.43917A＞G与湖羊体长和日增重显著相关，AA与GG型个体的体长显著高于AG型个体(P＜0.05)，AA与GG相比差异不显著(P＞0.05)，GG型个体断奶到六月龄日
增重显著高于AA型个体，AG型个体与AA，GG相比差异不显著。
技术实现思路
[0007]为了解决分子标记育种中现有技术的欠缺和现实需要求，本专利技术的目的是提供一种湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关的SNPs分子标记及其检测引物对和试剂盒，并提供所述分子标记的筛选方法和在湖羊分子标记育种中的应用。
[0008]为了实现上述的专利技术目的，本申请采用了以下的技术方案：
[0009]一种与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关的SNPs分子标记，该分子标记定位为g.474011A＞G；其中，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA、AG基因型个体，AA与AG基因型个体相比差异不显著。
[0010]进一步，本申请提供了一种用于检测所述SNPs分子标记的引物对。
[0011]进一步，本申请提供了所述的引物对扩增获得的扩增产物，该扩增产物的序列如SEQ ID NO:1所示。
[0012]进一步，本申请提供了一种用于扩增所述的扩增产物的引物对。
[0013]作为优选，所述引物对的序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
[0014]进一步，本申请提供了一种包含所述引物对的试剂盒。
[0015]进一步，本申请提供了所述的SNPs分子标记、引物对和试剂盒在筛选湖羊断奶到六月龄日增重性状和湖羊分子标记育种中的应用；其中，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA、AG基因型个体，AA与AG基因型个体相比差异不显著。
[0016]进一步，本申请还提供了一种筛选湖羊断奶到六月龄日增重性状的方法，该方法包括以下步骤：提取湖羊外周血基因组DNA，采用所述的引物对进行PCR扩增，对扩增产物中所述的SNPs分子标记进行检测，从而筛选出湖羊的断奶到六月龄日增重性状；其中，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA、AG基因型个体，AA与AG基因型个体相比差异不显著。
[0017]作为优选，PCR反应体系为25μL，KOD OneTM PCR Master Mix(TOYOBO,日本)12.5μL，上下游引物各0.2μL，ddH2O 11.1μL；反应程序为：98℃变性10s，退火30s，68℃延伸30s，进行34个循环，PCR结束后4℃保存。
[0018]作为优选，采用血液基因组DNA提取试剂盒，提取血液DNA，DNA浓度大于50ng/μL，OD
260
/OD
280
处于1.8～2.0。
[0019]本专利技术以213只湖羊为试验材料以ARHGAP24基因为候选基因，采用PCR扩增，产物直接测序以及序列分析技术筛选SNPs，并通过关联分析筛选出显著影响湖羊生长性状的SNPs位点。
[0020]本专利技术发现，在ARHGAP24基因部分区内有12个SNPs,其中与湖羊体重、体尺性状显著相关的SNPs位点有3个：g.474011A＞G与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA,AG基因型个体(P＜0.05)，AA与AG基因型个体相比差异不显著(P＞0.05)。g.474459G＞A与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关，GA基因型个体的体高显著高于GG基因型个体(P＜0.05)，AA基因型个体与GG,GA基因型个体相比差异不显著(P＞0.05)。g.474543G＞A与湖羊的六月龄到周岁日增重，周岁重显著相关，AA基因型个体的周岁日增重，周岁重显著高于GG,GA基因型个体(P＜0.05)，GG,GA基因型个体差异不显著(P＜0.05)。
附图说明
[0021]图1：湖羊ARHGAP24基因SNPs检测引本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种与湖羊的断奶到六月龄日增重显著相关的SNPs分子标记，其特征在于，该分子标记定位为g.474011A＞G；其中，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA、AG基因型个体，AA与AG基因型个体相比差异不显著。2.一种用于检测权利要求1中所述SNPs分子标记的引物对。3.权利要求2所述的引物对扩增获得的扩增产物，该扩增产物的序列如SEQ ID NO:1所示。4.一种用于扩增权利要求3所述的扩增产物的引物对。5.根据权利要求4所述的引物对，其特征在于，所述引物对的序列如SEQ ID NO:2 和SEQ ID NO:3所示。6.一种包含权利要求2或4或5所述引物对的试剂盒。7.权利要求1所述的SNPs分子标记、权利要求2或4或5所述的引物对和权利要求6所述的试剂盒在筛选湖羊断奶到六月龄日增重性状和湖羊分子标记育种中的应用；其中，GG基因型的断奶到六月龄日增重显著高于AA、AG基因型个体，AA与AG基因型个体相比差异不显著。8...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜俊芳，单慧丽，曹阳，郑开之，黄新，蒋永清，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：
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