与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记及应用，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示。该分子标记引物不仅在分离群体中与结果部位和果实大小性状共分离，在不同育种材料中，其扩增带型也与结果部位和果实大小表型一致，因此可直接用于甜瓜分子标记辅助育种，对于甜瓜新品种培育中具有较好的应用价值。品种培育中具有较好的应用价值。品种培育中具有较好的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记及应用


[0001]本专利技术属于分子育种
，具体涉及与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记及应用。

技术介绍

[0002]甜瓜(Cucumismelo L.)是主要的葫芦科蔬菜作物之一，栽培面积广泛，具有重要的经济价值。中国是甜瓜生产大国，甜瓜在果蔬生产中占有重要地位。
[0003]近年来，分子辅助选择育种技术得到了广泛的开发及应用，能够在分子水平上快速筛选所需要的个体，极大的缩短了育种时间，对育种工作有着极大的推动。能否找到与性状紧密连锁的标记，能否在不同材料中使用，是分子标记辅助选择育种成功与否的标志。
[0004]甜瓜的结果部位和果实大小是甜瓜重要的农艺性状，直接决定甜瓜的株型与产量。果实的结果部位是非常重要的农艺性状，也是株型的重要组成部分，直接决定植物的结构；果实大小是果实完全成熟后的农艺性状，且易受环境影响，是性状改良中的难点。常规育种需要在果实成熟后对果实大小进行鉴定，耗时长、成本高。通过构建遗传群体，BSA
‑
seq初定位，进一步利用大群体对标记进行加密，进行精细定位并获得与果实大小共分离的分子标记，通过标记辅助选择技术可以定向的改良甜瓜的株型，同时显著提高果实大小的选择效率、在苗期即可对果实大小进行选择，加快育种进程。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的之一在于提供一种与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记记。
[0006]本专利技术目的之二在于提供一种上述分子标记在甜瓜分子育种的应用。
[0007]本专利技术的另一目的在于提供一种甜瓜结果部位和果实大小的判定方法。
[0008]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0009]与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记，扩增所述InDel分子标记的引物对的上游引物和下游引物的核苷酸序列分别如下：
[0010]FpFs
‑
F：5
’‑
TGCCAAATGGAATACAAACG(SEQ ID NO.1所示)；
[0011]FpFs
‑
R：5
’‑
AATGGGACATGCCTGGAATA(SEQ ID NO.2所示)。
[0012]本专利技术还公开了与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记在甜瓜分子育种中的应用。主要是用于鉴定或辅助鉴定甜瓜结果部位和果实大小表型。利用所述InDel分子标记引物，能准确、快速、有效的鉴定甜瓜结果部位和果实大小。本领域技术人员可以理解，比如通过检测是否存在本专利技术的分子标记来判定甜瓜结果部位和果实大小品种。具体地，可以使用上述的本专利技术的分子标记的引物对，所述检测还可以通过测序方法进行。
[0013]本专利技术还公开了一种甜瓜结果部位和果实大小性状的判定方法，所述判定方法包括如下步骤：
[0014](4)提取待测甜瓜基因组DNA；
[0015](5)以步骤(1)中所提取基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的分子标记引物对对模板进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测和/或测序；
[0016](6)根据步骤(2)的电泳条带和/或测序结果进行判定，具体标准为：
[0017]如果PCR扩增产物仅有一条如SEQ.ID.NO.3所示的长度为195bp的特征条带，则该待测品种为纯和的主蔓结瓜小果型性状；如果PCR扩增产物仅有一条如SEQ.ID.NO.4所示的长度为202bp的特征条带，则该待测品种为纯合侧蔓结瓜大果型性状；如果PCR扩增产物中既有一条如SEQ.ID.NO.3所示的长度为195bp的特征条带，又有一条如SEQ.ID.NO.4所示的长度为202bp的特征条带，则该待测品种为杂合侧蔓结瓜大果型性状。
[0018]另外，包含上述引物对的试剂盒，可以用来鉴定甜瓜结果部位和果实大小性状，具体应用时，可以选择含有上述分子标记引物对的试剂做成试剂盒。
[0019]另外，用于检测InDel分子标记是否存在的试剂在控制甜瓜结果部位和果实大小的基因定位中的应用，利用本专利技术的分子标记，可以对控制甜瓜结果部位和果实大小的基因进行定位，上述这些应用均可以按照常规的方法进行。
[0020]本专利技术还保护含有上述分子标记的载体。所述重组载体可以是插入有本专利技术的分子标记的表达载体或者克隆载体。获得上述重组载体后，本领域技术人员可以根据不同的需要，将重组载体转化到合适的细胞中，得到含有该重组载体的重组细胞。因此，本专利技术还保护含有所述重组载体的重组细胞。
[0021]本专利技术的优点：
[0022]本专利技术以主蔓结瓜小果型甜瓜470B与侧蔓结瓜大果型甜瓜HNA24为亲本配制杂交组合，用以对甜瓜结果部位和果实大小进行研究。通过F2群体中的极端单株构建基因池，进行BSA
‑
seq，将结果部位和果实大小基因初步定位于甜瓜第5号染色体上。进一步构建包含513个单株的F2群体进行标记加密，将结果部位和果实大小基因定位到第5号染色体101.232kb(995，848
‑
1,097,080)的区间内。在区间内获得了一个InDel分子标记引物，该分子标记引物不仅在分离群体中与结果部位和果实大小性状共分离，在不同育种材料中，其扩增带型也结果部位和果实大小表型一致，因此可直接用于甜瓜分子标记辅助育种，对于甜瓜新品种培育中具有较好的应用价值。另外，利用该分子标记能够在出芽期或苗期即可准确快速的鉴定出甜瓜结果部位和果实大小性状，具有检测方便、扩增产物稳定的优点。
[0023]利用该分子标记引物可以在苗期开展甜瓜结果部位和果实大小基因筛选，能够缩小育种群体，加速育种进程，提高育种效率，具有重要的应用价值。
[0024]在甜瓜选择育种过程中，往往要产生大量的分离群体，采用该分子标记，可以在苗期中鉴定出所需要的植株，不仅减少了育种过程中的占地面积，同时也减少植株长大后鉴定所需的人力物力，大大提高育种的效率、缩短选择年限。
附图说明
[0025]图1为甜瓜结果部位和果实大小基因InDel标记的PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱；
[0026]图2是在自然群体中，对果实结果部位和果实大小共分离标记的验证。
具体实施方式
[0027]以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0028]若未特别指明，实施例中所用技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。下述实施例中的试验方法，如无特别说明，均为常规方法。如无特殊说明，所采用的试剂及材料，均可以通过商业途径获得。
[0029]除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本专利技术中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
[0030]本专利技术采用的生物材料：
[0031]甜瓜材料470B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记，其特征在于，扩增所述分子标记的引物对的上游引物序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物序列如SEQ ID NO.2所示。2.权利要求1所述与甜瓜结果部位和果实大小共分离的InDel分子标记在甜瓜分子育种中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述InDel分子标记用于鉴定或辅助鉴定甜瓜结果部位和果实大小表型。4.一种甜瓜结果部位和果实大小性状的判定方法，其特征在于，所述判定方法包括如下步骤：(1)提取待测甜瓜基因组DNA；(2)以步骤(1)中所提取基因组DNA为模板，利用权利要求1所述的分子标记引物对对模板进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行电泳检测和/或测序；(3)根据步骤(2)的电泳条带和/或测序结果进行判定，具体标准为：如果PCR扩增产物仅有一...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡建斌，杜烜宇，梁晓雪，李琼，王盼乔，李翔，侯娟，毛文文，杨路明，孙守如，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：