一种抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法技术

本发明专利技术提供了一种通过芸薹属材料抗根种病菜心和芸薹属材料抗根种病芥蓝配制杂交组合，后代通过胚挽救技术、组织培育技术、染色体加倍技术，能够快速获得染色体纯合的抗根种病薹用蔬菜育种材料。其优点在于一年四季均可栽培，腋芽萌发力强，主薹采收后，也能陆续萌发多级侧薹，通过二者种间杂交，可创制出早熟、商品性优异且抗根肿病的薹用蔬菜的抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法。蔬菜育种材料的快速选育方法。蔬菜育种材料的快速选育方法。

【技术实现步骤摘要】
一种抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法


[0001]本专利技术涉及抗根肿病薹用蔬菜育种材料人工合成技术
，具体是一种人工合成抗根肿病薹用蔬菜育种材料的新方法。

技术介绍

[0002]根肿病是由芸薹属根肿菌(PlasmodiophorabrassicaeWoron.)侵染引起的一种土壤传播性的病害，目前已经成为十字花科蔬菜最严重的病害之一。根肿病病原菌侵染植物根系后，会出现植株生长缓慢，植株矮小，晴天中午叶片出现萎焉现象，侵染40～60天后，引起根部变形肿大形成肿瘤，阻碍植株的正常水分和养分的吸收，甚至导致根部腐烂。且田间一旦出现根肿病病害，土壤将会长期带菌，不再适宜种植任何十字花科作物。因此，培育抗根肿病蔬菜材料是保证蔬菜产业健康发展的关键步骤。传统培育抗根肿病薹用蔬菜的育种方法通过配制杂交组合后，后代需要通过5～6代与轮回亲本的回交，加以自交、选择，并经过品比实验、区域实验、生产示范等一系列鉴定过程，才能选与出一个抗根肿病薹用蔬菜的新品种，大约需要7～8年的时间。因此，传统抗根肿病薹用蔬菜选育方法中存在的选育过程繁琐、成本过高、周期本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法，其特征在于：具体步骤如下：Sp1：以抗根肿病菜心为母本与抗根肿病芥蓝为父本配制杂交组合，进行常规杂交，授粉12天后，挑选饱满且呈绿色的胚珠进行胚挽救，利用(MS+6
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BA0.5mg
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L
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1+NAA0.5mg
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L
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1+KT1.0mg
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L
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1+AC1.0g
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L
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1)培养基对胚珠进行胚珠分化培养；Sp2：将分化的胚珠后转移至(MS+6
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BA0.9mg
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L
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1+NAA0.1mg
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L
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1)培养基进行增殖分化，增殖分化至具有完整植株形态后，转移至1/2MS培养基上继续生长幼苗具3对真叶后，转移至(1/2MS+IBA0.5mg
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L
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1)培养基进行生根培养，培养环境为温度(25
±
2)℃、光照12h/d、光照强度1500lx；Sp3：主根根长达3
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4cm时，将育苗基质用水拌湿至手捏成团不散开的程度，将幼苗用育苗基质定植于苗钵内，置于人工气候箱，在温度20
‑
25℃，湿度80％条件下进行炼苗；炼苗前3天，保持基质和幼苗叶片微微湿润，之后保持充足的水分让幼苗继续生长；炼苗15天后，幼苗生长情况稳定，移栽至红土：过筛腐殖土＝1:1比例混合土内，使用常规肥水管理；Sp4：增殖扩繁后，对得到的杂种二倍体植株进行染色体加倍处理，于抽薹前用滴管将0.2％秋水仙碱溶液滴于植株顶芽和叶腋之间，连续5日，每日进行一次处理，处理后的幼苗，定植于田间常规管理；Sp5：对定植于田间的植株进行形态学鉴定，选择叶片形状、叶色、主薹形状、主薹颜色、花色等性状介于父母本之间的真杂种，经SSR分子标记对鉴定结果进行检验，筛选出一对引物ccr19f(5
’‑3’
:AGAACGCAGAAGGTAAGTGA)、ccr19r(5
’‑3’
:AAGAATCAACCTCCCTCACA)，该引物能够区分父母本，真杂种扩增出的条带在父母本间具有明显差异，从而选出真杂种植株；Sp6：对真杂种植株进行花粉育性的检测，统计花粉着色情况及可育花粉粒个数占统计花粉粒个数的比率；Sp7：真杂种植株开花后，观察花器官和角果，选择花器官和花瓣均较大，雄蕊饱满，角果较长，表面有明显膨大，内部有饱满胚珠的植株，进行花药染色观察和雌蕊染色体分析，选择花粉壁呈绿色，原生质呈红色，花粉粒整体表现为饱满圆润，花粉粒可染率大于95％并且染雌蕊染色体分析中染色体数目为38条，花药染色体数目为19条的可育植株；Sp8：选取杂种可育植株，以菜心、芥蓝和甘蓝型油菜为参照样本，使用流式细胞仪对种间杂种F1进行倍性分析，观察在使用菜心、芥蓝、甘蓝型油菜作参照条件下，杂种植株的荧光强度最高峰位置，判断其倍性及育性是否恢复；Sp9：经过上述步骤的杂种真实性及育性恢复鉴定后，对杂种进行抗根肿病鉴定，在其长至两叶一心时，采用注射法利用制备好的根肿病4号生理小种接种，同感病的材料作为对照，同时接种，45天后将整个植株从穴盘中带土取出，将根部洗净并根据病害指数测定观察发病情况。2.根据权利要求1所述的一种抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法，其特征在于：所述菜心为十字花科芸薹属芸薹种白菜亚种的一个变种，芥蓝为十字花科芸薹属野甘蓝种的一二年生草本植物，均以幼嫩肉质花薹及其嫩叶供食。3.根据权利要求1所述的一种抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法，其特征在于：所述的SSR分子标记鉴定方法中DNA提取方法为改良的CTAB法，PCR扩增反应体系为25.0μL，检测步骤聚丙烯酰胺凝胶配制、电泳、银染及显影部分采用常规操作，最后观察条带差异性，判断植株杂种的真实性。
4.根据权利要求1所述的一种抗根肿病薹用蔬菜育种材料的快速选育方法，其特征在于：所述花粉育性检测通过亚历山大染色检测，具体步骤为，取真杂种植株完全开放但花粉未散落的新鲜花朵，去除花瓣和雌蕊，将花粉物质置于干净载...

【专利技术属性】
技术研发人员：和江明，侬宇璇，胡靖锋，徐学忠，杨红丽，兰梅，张丽琴，杨鼎，李崇娟，赵雅兰，吕凤仙，
申请(专利权)人：云南省农业科学院园艺作物研究所，
类型：发明
国别省市：