柠檬酸合酶启动子突变体及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学领域，具体涉及柠檬酸合酶基因启动子的突变体，包含启动子突变体的转录表达盒、重组表达载体、重组微生物宿主细胞，以及利用该启动子增强目标基因的表达、制备蛋白以及生产目标化合物的方法。本发明专利技术提供的具有增强的启动子活性的核酸分子表现出比野生型更高的启动子活性，可用于增强目的基因的表达，例如与gltA基因可操作地连接，可以增强柠檬酸合酶的表达强度，由此提高了重组菌株的氨基酸例如谷氨酸生产效率，具有较高的应用价值。用价值。

【技术实现步骤摘要】
柠檬酸合酶启动子突变体及其应用


[0001]本专利技术属于分子生物学领域，具体涉及柠檬酸合酶基因启动子的突变体，包含启动子突变体的转录表达盒、重组表达载体、重组微生物宿主细胞，以及利用该启动子增强目标基因的表达、制备蛋白以及生产目标化合物的方法。

技术介绍

[0002]谷氨酸是全球产量最大的氨基酸品种，作为构成蛋白的20种常见氨基酸之一，是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，被广泛应用于医药、健康、食品、动物饲料和化妆品等行业中，主要由谷氨酸棒杆菌发酵生产。随着生物技术的不断发展，对棒杆菌进行代谢工程改造提高其谷氨酸产量的报道逐渐增多，如增强丙酮酸脱氢酶的活性，增强谷氨酸运输蛋白的活性，引入磷酸转酮酶活性等。
[0003]柠檬酸合酶，由gltA基因编码，可催化草酰乙酸和乙酰辅酶A生成柠檬酸和辅酶A。据CN1261627A报道，在大肠杆菌中引入来自乳发酵短杆菌的柠檬酸合酶，可以提高大肠杆菌的谷氨酸产量。CN105695383B报道了在谷氨酸棒杆菌中利用内源强组成型启动子P
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过表达柠檬酸合酶，可以有效提高谷氨酸的产量。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有启动子活性的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.包含如权利要求1所述核酸分子的表达盒、重组载体。3.含有如权利要求1所述核酸分子的重组微生物宿主细胞；优选地，微生物宿主细胞是谷氨酸棒杆菌，包括但不限于谷氨酸棒杆菌ATCC 13869、谷氨酸棒杆菌ATCC 13032、谷氨酸棒杆菌B253、谷氨酸棒杆菌ATCC 14067，以及由上述菌株制备的产生L
‑
氨基酸的菌株。4.如权利要求3所述的重组微生物宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是在谷氨酸棒杆菌ATCC 13869基础上，选自以下的一个或多个基因被弱化或表达降低：a. 编码α
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酮戊二酸脱氢酶的odhA基因；编码琥珀酸脱氢酶的sucA基因；更优选地，所述宿主细胞中选自以下的一个或多个基因被增强或过表达：a. 编码丙酮酸羧化酶的pyc基因；b. 编码谷氨酸脱氢酶的gdh基因；c. 编码柠檬酸合酶的gltA基因；d. 编码天磷酸转酮酶的fxpk基因；e.编码磷酸烯醇丙酮酸羧化酶的ppc基因；f. 编码磷酸盐转运蛋白的pitA基因；g.编码机械敏感通道蛋白的yggB基因。5.如权利要求3或4所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞是将谷氨酸棒杆菌ATCC 13869中的NCgl1221基因...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑平，周文娟，李广玉，孙际宾，蔡柠匀，陈久洲，王小平，刘世周，赵兰坤，
申请(专利权)人：呼伦贝尔东北阜丰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：