用于分析来自生物反应器的样品的自动化系统和方法技术方案

一方面，本文提供了一种用于自动分析来自生物反应器的样品的方法，所述方法包括：从生物反应器中抽取至少一个样品；将抽取的至少一个样品加压到样品流中；使用第一液相色谱装置纯化样品流中的至少一种靶蛋白以产生纯化的样品流；将纯化的样品流分成纯化的样品级分流和流出物流；以及使用第二液相色谱装置分析纯化的样品级分流中的至少一种靶蛋白。有利地，本发明专利技术提供了一种自动化的两步液相色谱过程，所述过程利用第一维液相色谱来进行纯化并且利用第二维液相色谱来进行分析。利用第二维液相色谱来进行分析。利用第二维液相色谱来进行分析。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于分析来自生物反应器的样品的自动化系统和方法

技术介绍

[0001]使用第一维液相色谱来进行纯化和第二维液相色谱来鉴定靶蛋白从而分析来自生物反应器的样品在现有技术中是已知的。然而，由于各种限制和灵敏度，第二维液相色谱可能仅利用一小部分第一维色谱洗脱液来消除与进入第二维液相色谱装置的大蛋白质峰体积相关联的峰分辨率的缺乏。在一种方法中，将纯化的样品减少为部分样品(通常为10％)，用于第二维液相色谱中。与传统方法相比，这种创新方法将分析时间缩短了十倍。基于传统方法，纯化的样品可被自动分离以利用高分辨率削峰(high
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resolution peak
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cutting)，其中纯化样品的一部分被收集在样品环中，以在第二维液相色谱中被单独地分析，其中所得数据被结合以得出最终结果。图2是由高分辨率削峰产生的单独的第一维蛋白A峰的代表性第二维离子交换色谱(IEX)。虽然这种方法有效，但分析时间比分流策略的创新方法高十倍。

技术实现思路

[0002]一方面，本文提供了一种用于分析来自生物反应器的至少一个样品的自动化系统，所述系统包括：探针，其用于从所述生物反应器中抽取所述至少一个样品；泵，其用于将所述抽取的至少一个样品加压到样品流中；第一导管，其连接到所述泵以用于输送所述样品流；第一液相色谱装置，其具有主入口和主出口，所述主入口连接到所述第一导管以接收所述样品流，所述第一液相色谱装置被配置为纯化所述样品流中的至少一种靶蛋白以产生纯化的样品流，所述纯化的样品流从所述主出口排出；第二导管，其连接到所述主出口以用于输送所述纯化的样品流；分流器，其具有分流器入口、分支出口和分流器出口，所述分流器入口连接到所述第二导管以接收所述纯化的样品流，其中，限流器与所述分支出口相关联以允许所述纯化的样品流的一部分从所述分支出口排出为纯化样品级分流，并且其中，未从所述分支出口排出的所述纯化样品流从所述分流器出口排出为流出物流；第三导管，其连接到所述分支出口以用于输送所述纯化的样品级分流；以及第二液相色谱装置，其具有连接到所述第三导管以接收所述纯化的样品级分流的次入口，所述第二液相色谱装置被配置为分析所述纯化的样品级分流中的所述至少一种靶蛋白。有利地，本专利技术提供了一种自动化的两步液相色谱过程，所述过程利用第一维液相色谱来进行纯化并且利用第二维液相色谱来进行分析。
[0003]另一方面，本文提供了一种用于自动分析来自生物反应器的至少一个样品的方法，所述方法包括：从生物反应器中抽取至少一个样品；将所述抽取的至少一个样品加压到样品流中；使用第一液相色谱装置纯化所述样品流中的至少一种靶蛋白以产生纯化的样品流；将所述纯化的样品流分成纯化的样品级分流和流出物流；以及使用第二液相色谱装置分析所述纯化的样品级分流中的所述至少一种靶蛋白。
[0004]通过研究以下具体实施方式和附图将更好地理解本专利技术的这些和其他特征。
附图说明
[0005]图1是根据本专利技术形成的系统的示意图。
[0006]图2是由高分辨率削峰产生的单独的第一维蛋白A峰的代表性第二维离子交换色谱(IEX)。
[0007]图3是由根据本专利技术的系统使用尺寸排阻色谱(SEC)产生的蛋白A的代表性色谱图。
[0008]图4和图5是由根据本专利技术的系统的第二液相色谱装置利用阳离子交换色谱(CEX)产生的蛋白A的代表性色谱图，其分别使用弱和强阳离子交换柱。
[0009]图6是在线生物反应器滴度的代表性图，由根据本专利技术的系统的第一液相色谱装置测量，取自第7天至第15天。
[0010]图7是根据本专利技术的系统的第一液相色谱装置使用邻苯二醛衍生化(OPA)产生的代表性在线氨基酸分析图。
[0011]图8展现了与结合离线处理的6
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氨基喹啉基
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N
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羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯衍生化(AQC或AQ)相比，使用结合本专利技术的邻苯二醛衍生化(OPA)在细胞培养基中加标的氨基酸的加标和回收率研究结果。
具体实施方式
[0012]参考附图，提供了用于自动分析取自生物反应器12的一个或多个样品的系统10。本文使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制本专利技术。如本文所使用的，单数或复数形式的术语“样品”涵盖两种情况，但不限于此。生物反应器12可以是用于培养生物蛋白质样品的任何标准生物反应器。可以设置探针14，其被定位成从生物反应器12中抽取样品。可以设置具有入口18的泵16，其例如经由取样导管20与探头14连通。泵16被配置为产生负压以通过探针14和取样导管20从生物反应器12抽取样品。
[0013]泵16可以具有任何已知的设计并且可以是歧管的，以允许与多个并行的入口管线连接。泵16可以是蠕动泵类型，其被配置为作用于取样导管20或与取样导管20连通的导管上，而不接触样品。一个或多个中间小瓶22可以与泵16一起设置，以收集从生物反应器12抽取的样品。样品可以从中间小瓶22中抽取并由泵16加压，以提供流出泵16的样品流。可以设置与泵16的出口26连通的第一导管24，用于输送所产生的样品流。此外，样品收集环可以与泵16、取样导管20和/或第一导管24相关联，以在准备样品流时收集样品。
[0014]可以提供控制系统来控制泵16。控制系统可以包括计算机处理单元，具有用于存储指令的非暂态存储器。控制系统可以被配置为例如通过存储在存储器中的指令使泵16以给定的间隔或其他开始时间启动。通过自动化操作，泵16可以用作自动进样器。
[0015]设置了第一液相色谱装置28，其优选地被配置为第一维液相色谱装置，所述第一维液相色谱装置被配置为在产生纯化的样品流时纯化样品流中的至少一个靶蛋白。第一导管24将样品流递送到第一液相色谱装置28的主入口30。通过第一导管24的样品流的流速可以在0.5
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5mL/min的范围内。一个或多个主小瓶29可在第一液相色谱装置28内使用，以收集样品流用于纯化。任何已知设计的液相色谱装置都可以用于纯化样品流中的靶蛋白。
[0016]第一液相色谱装置28包括连接到第二导管34的主出口32。纯化的样品流从第一液相色谱装置28通过主出口32排放到第二导管34中。纯化的样品流可以以1
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100μl范围内、可
替代地以1
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80μl范围内、可替代地以1
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60μl范围内、可替代地以1
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40μl范围内、可替代地以1
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20μl范围内、可替代地以1
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10μl范围内的体积排出。第一液相色谱装置28可以包括用于对排出的纯化样品流加压且用于从主小瓶29(如果使用的话)抽取样品的泵。纯化的样品流包括增加百分比的由第一液相色谱装置28纯化的至少一种靶蛋白。
[0017]为具有分流器入口38、分支出口40和分流器出口42的系统10提供分流器36。分流器入口38连接到第二导管34以接收纯化的样品流。限流器44与分支出口40相关联，使得仅一部分纯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于分析来自生物反应器的至少一个样品的自动化系统，所述系统包括：探针，其用于从所述生物反应器中抽取所述至少一个样品；泵，其用于将所述抽取的至少一个样品加压到样品流中；第一导管，其连接到所述泵以用于输送所述样品流；第一液相色谱装置，其具有主入口和主出口，所述主入口连接到所述第一导管以接收所述样品流，所述第一液相色谱装置被配置为纯化所述样品流中的至少一种靶蛋白以产生纯化的样品流，所述纯化的样品流从所述主出口排出；第二导管，其连接到所述主出口以用于输送所述纯化的样品流；分流器，其具有分流器入口、分支出口和分流器出口，所述分流器入口连接到所述第二导管以接收所述纯化的样品流，其中，限流器与所述分支出口相关联以允许所述纯化的样品流的一部分从所述分支出口排出为纯化样品级分流，并且其中，未从所述分支出口排出的所述纯化样品流从所述分流器出口排出为流出物流；第三导管，其连接到所述分支出口以用于输送所述纯化的样品级分流；以及第二液相色谱装置，其具有连接到所述第三导管以接收所述纯化的样品级分流的次入口，所述第二液相色谱装置被配置为分析所述纯化的样品级分流中的所述至少一种靶蛋白。2.根据权利要求1所述的系统，其中，所述抽取的至少一个样品从所述生物反应器收集在一个或多个中间小瓶中。3.根据权利要求2所述的系统，其中，所述泵从所述一个或多个中间小瓶中抽取所述抽取的至少一个样品，并且然后将所述抽取的至少一个样品加压到所述样品流中。4.根据权利要求3所述的系统，其中，所述第一液相色谱装置包括收集所述样品流的一个或多个主小瓶。5.根据权利要求1所述的系统，其中，所述第一液相色谱装置为第一维液相色谱装置。6.根据权利要求1所述的系统，其进一步包括过滤器，用于在所述至少一个样品被所述泵加压之前对其进行过滤。7.根据权利要求1所述的系统，其中，所述纯化的样品级分流不...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：