一种植物基因编辑中的重组载体以及利用其筛除假阳性愈伤组织的方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种植物基因编辑中的重组载体以及利用其筛除假阳性愈伤组织的方法和应用。该重组载体可筛除假阳性愈伤组织，重组载体中包含Rose1基因元件，是将一个AtUbi10驱动，NOS终止的含有Rose1基因元件的ARS表达框加入到T

【技术实现步骤摘要】
一种植物基因编辑中的重组载体以及利用其筛除假阳性愈伤组织的方法和应用


[0001]本专利技术涉及植物基因工程
，特别涉及一种植物基因编辑中的重组载体以及利用其筛除假阳性愈伤组织的方法和应用。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas9技术自2012年开发至今，已在基因编辑领域得到广泛应用。其构成包含人工改造的引导RNA(sgRNA)和Cas9核酸酶两个部分。基因编辑原理是在Cas9核酸酶表达框中加入核定位信号(NLS)，Cas9在细胞质中翻译后由核定位信号引导进入细胞核与sgRNA结合，sgRNA中加入20nt序列特异的引导序列，二者形成复合体，识别sgRNA中20nt特异序列互补的DNA位点，切割形成DNA双链断裂。通常情况下DNA的修复以非同源末端连接(NHEJ)方式为主，会形成短片段的Indel(碱基插入或删除)，造成靶基因的移码突变。
[0003]在植物基因编辑的实施过程中一般需要组织培养形成抗性愈伤组织，抗性愈伤组织分化形成抗性植株。组织培养过程中会存在假阳性抗性愈伤组织，假阳性抗性愈伤组织会进一步分化成假阳性植株，在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物基因编辑中的重组载体，所述重组载体可筛除假阳性愈伤组织及转化株，其特征在于，所述重组载体中包含Rose1基因元件，是将一个AtUbi10驱动，NOS终止的含有Rose1基因元件的ARS表达框加入到T
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DNA中，与基因编辑其他元件形成一个连锁的重组载体；整个表达框序列为SEQ ID No.1。2.根据权利要求1所述的植物基因编辑中的重组载体，其特征在于，基因元件能行使基因编辑功能，Rose1基因是来源于金鱼草的MYB转录因子，用于促进植物花青素的合成。3.根据权利要求2所述的植物基因编辑中的重组载体，其特征在于，ARS表达框能表达产生调控花青素合成的蛋白，导致植物愈伤组织中大量积累花青素，肉眼能够区分阳性愈伤组织和假阳性愈伤组织，将假阳性愈伤组织剔除能提升基因编辑素材创制效率。4.根据权利要求1
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3任一所述的植物基因编辑中的重组载体在筛除假阳性愈伤组织中的应用。5.根据权利要求4所述的植物基因编辑中的重组载体在筛除假阳性愈伤组织中的应用，其特征在于，包括以下步骤：(1)Rose1基因元件及表达框的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建铎，王晋，杨光宇，邢佳鑫，孔维松，邓乐乐，杨文武，许力，蒋佳芮，高茜，向海英，曾婉俐，李雪梅，
申请(专利权)人：云南中烟工业有限责任公司，
类型：发明
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