一种赤芝菌丝体中三萜化合物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种赤芝菌丝体中三萜化合物，该三萜化合物的结构式为如下结构式2。本发明专利技术还提供了赤芝菌丝体中三萜化合物作为预防或治疗炎症的药物的应用；所述的赤芝菌丝体中三萜化合物为结构式1

【技术实现步骤摘要】
一种赤芝菌丝体中三萜化合物及其应用


[0001]本专利技术涉及食用菌应用领域，具体的说涉及一种赤芝菌丝体中三萜化合物及其应用。

技术介绍

[0002]“灵芝”是担子菌门Basidiomycota，蘑菇纲Agaricomycetes，多孔菌目Polyporales，灵芝科Ganodermataceae，灵芝属Ganoderma P.Karst.真菌统称，赤芝是其中的一种。三萜是灵芝中重要的代谢产物，具有较强的抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等生物活性。到目前为止，已在灵芝属真菌的子实体、菌丝体和孢子粉中发现超400种三萜化合物，其中，灵芝属真菌的发酵菌丝体中已报道了100余个三萜化合物。
[0003]炎症是机体对有害刺激所发生的复杂的防御反应，这些反应由巨噬细胞在内的炎症细胞介导。巨噬细胞能够被各种因子如促炎因子、细菌脂多糖(LPS)等活化，继而产生一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子
‑
α(TNF
‑
α)、白细胞介素
‑
6(IL
‑
6)等炎症介质，这些炎症介质靶向组织，引起损伤，炎症持续状态可导致类风湿性关节炎、抑郁、肺癌等疾病。
[0004]研究表明，赤芝菌丝体中的三萜化合物不仅与子实体中的三萜化合物在化学结构上有较大差别，生物活性上亦有差别。因此，可对赤芝菌丝体中的三萜化合物进行进一步的开发应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术首先提供了一种赤芝菌丝体中三萜化合物，该三萜化合物的结构式为如下结构式2：
[0006][0007]所述赤芝菌丝体中三萜化合物为结构式2所示的化合物或其药用盐、晶体或水合物；
[0008]本专利技术还提供了一种用于抗炎的制剂，其含有如下结构式1
‑
6所示的一种或一种以上化合物或其药用盐以及医学上可接受的载体；
[0009]本专利技术还提供了赤芝菌丝体中三萜化合物作为预防或治疗炎症的药物的应用；
[0010]其中所述的赤芝菌丝体中三萜化合物为如下结构式1
‑
6的化合物：
[0011][0012]本专利技术的创新点：
[0013]菌丝体是灵芝生长发育的初级阶段，具有不受气候影响、可规模化、生产周期短等优势。且灵芝菌丝体可产生特异性三萜化合物，并具有更强的抗炎能力。本专利技术首次对灵芝菌丝体中分离纯化的三萜化合物进行了抗炎活性测试，发现结构式1
‑
6的化合物均能显著抑制TNF
‑
α和IL
‑
6释放的活性，具有显著的抗炎活性，其中具有3个乙酰氧基取代的化合物5(Ganoderic acid T)抗炎作用最强。
附图说明
[0014]图1、Fr1液相色谱图
[0015]图2、Fr2液相色谱图
[0016]图3、Fr3液相色谱图
[0017]图4、Fr4液相色谱图
具体实施方式
[0018]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0019]下述实施例中所用的材料、试剂：
[0020]赤芝菌种龙芝2号(菌种编号6546，保藏于上海市农业科学院食用菌研究所)来自浙江龙泉。
[0021]小鼠单核巨噬细胞RAW264.7：购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，产品目录号为SCSP
‑
5036；
[0022]DMEM培养基、胎牛血清(fetal bovineserum，FBS)：购自美国Gibco公司；
[0023]青霉素和链霉素：购自美国Amresco公司；
[0024]鼠源TNF
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α、IL
‑
6试剂盒：购自北京四正柏生物科技有限公司；
[0025]葡萄糖马铃薯琼脂(PDA)：购自北京索莱宝科技有限公司；
[0026]葡萄糖、蔗糖、琼脂、MgSO4·
H2O、KH2PO4、CaSO4以及分析级甲醇、氯仿、石油醚、丙酮、乙醇、乙醇、乙腈、冰醋酸：均购自国药集团化学试剂有限公司；
[0027]色谱级甲醇、乙腈：购自上海安谱实验科技股份有限公司；
[0028]水飞蓟素、氘代甲醇、氘代氯仿：购自Sigma公司；
[0029]YMC*GEL C18硅胶(50μm，12nm)：北京元宝山色谱科技有限公司；
[0030]Zorbax Eclipse Plus C18制备色谱柱(5μm,4.6mm
×
250mm)：美国Agilent公司；
[0031]Sephadex LH
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20凝胶(70μm)：GE Healthcare Bio
‑
Sciences AB；
[0032]GF254硅胶板(0.2
‑
0.25mm)：青岛海洋化工厂；
[0033]LC3000型高效液相色谱仪：北京创新通恒科技有限公司；
[0034]Agilent LC1290 infinity II超高效液相色谱仪：美国安捷伦公司；
[0035]Agilent 6495三重四级杆质谱仪：美国安捷伦公司；
[0036]BruBer AB II
‑
600核磁共振波谱仪：德国布鲁克公司；
[0037]Synergy HT多功能酶标仪：美国BIO
‑
TEK公司；
[0038]实施例1赤芝菌丝体发酵
[0039]培养基配方：
[0040]种子培养基：1000mL水中加入豆饼粉20g，葡萄糖25g，MgSO4·
H2O 1.5g，KH2PO
4 3.0g，自然pH；
[0041]固体培养基：大米98％，1％ CaSO4，1％蔗糖(均为重量比)，按干物质重量0.6g/g的比例加水。
[0042]保存在4℃冰箱中的龙芝2号菌种，用马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基活化，待菌丝长满平板后，黑暗条件下在摇瓶中进行一级振荡培养7d(150r/min，25℃)，后按10％接种量转接到二级摇瓶中，黑暗条件下静态培养21d，获得菌丝体，冷冻干燥后备用。
[0043]实施例2赤芝菌丝体的提取和萃取
[0044]将实施例1中得到的干燥的菌丝体用无水乙醇25℃浸泡提取3次，浸提时间分别为48h，24h，24h，合并提取液，浓缩得到菌丝体醇提物。
[0045]进一步将菌丝体醇提物用等体积的氯仿萃取2次，合并氯仿萃取液，常压蒸馏浓缩获得氯仿相。
[0046]实施例3化合物的制备
[0047]实施例2中得到的氯仿相以YMC*GEL C18硅胶(50μm，12nm)为填料，以乙腈(A)
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0.01％冰醋酸水(B)梯度洗脱(0
‑
35min，A：60％
‑
85％；35
‑
40min，A：85％
‑
98％；40
‑
60min，A本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种赤芝菌丝体中三萜化合物，其特征在于该三萜化合物的结构式为如下结构式2：所述赤芝菌丝体中三萜化合物为结构式2所示的化合物或其药用盐、晶体或水合物。2.一种用于抗炎的制剂，其特征在于其含有结构式1
‑
6所示的一种或一种以上化合物或其药用盐以及...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯娜，张劲松，岳亚文，杨梅，汪旵，周帅，唐庆九，杨焱，张忠，王金艳，唐传红，谭贻，刘利平，颜梦秋，吴迪，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：