抗真菌多肽制造技术

本发明专利技术涉及包含至少一种多肽的组合物，该多肽包含SEQ ID NO:1至51或101至111中任一项所示的氨基酸序列或与其具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列，并且该多肽能够与真菌结合。本发明专利技术进一步涉及包含至少一种多肽的组合物，该多肽包含具有SEQ ID NO:52至67或112至122中任一项所示氨基酸序列的CDR1区、具有SEQ ID NO:68至83或123至133中任一项所示氨基酸序列的CDR2区，以及具有SEQ ID NO:84至100或134至144中任一项所示氨基酸序列的CDR3区，并且该多肽能够与真菌结合。该组合物可以用作抗真菌组合物。真菌组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗真菌多肽


[0001]本专利技术涉及一种包含至少一种多肽的组合物，该多肽能够与真菌结合，并且涉及所述至少一种多肽本身。本专利技术还涉及组合物作为抗真菌剂的用途。本专利技术进一步涉及一种保护或治疗植物或所述植物的一部分免受植物病原性真菌感染的方法，一种用于保护或治疗收获的植物或所述植物的收获部分免受植物病原性真菌感染的收获后处理方法，和一种抑制植物病原性真菌生长或杀死植物病原性真菌的方法，至少包含将组合物或多肽直接或间接地施用于植物或所述植物的一部分的步骤。此外，本专利技术涉及一种制备抗真菌多肽的方法和一种制备抗真菌组合物的方法。此外，本专利技术涉及一种转基因植物、植物部分、种子或植物细胞。

技术介绍

[0002]病原性真菌感染在患者和动物以及植物作物中的存在和持续存在，主要归因于广谱抗真菌药物的选择压力和目前可用的抗真菌剂普遍缺乏疗效。
[0003]在人类和动物中，诸如侵袭性念珠菌病和侵袭性曲霉病等全身性真菌感染可能是由多种真菌病原体引起的，例如剧毒的念珠菌属白色念珠菌(C.albicans)、热带念珠菌(C.tropicalis)和克柔念珠菌(C.krusei)以及不那么剧毒的物种近平滑念珠菌(C.parapsilosis)和光滑球拟酵母(Torulopsis glabrata)(后者有时称为光滑念珠菌(Candida glabrata))。虽然白色念珠菌曾经是从重症监护室获得的最常见的真菌分离物，但后来的研究表明，热带念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和克柔念珠菌现在约占此类分离物的一半。非白色念珠菌属的增加意味着对常规抗真菌治疗有抗药性的念珠菌属的出现。
[0004]传统上，白色念珠菌、热带念珠菌和近平滑念珠菌已用抗真菌剂两性霉素B进行治疗，其被视为全身抗真菌治疗的“金标准”。不幸的是，两性霉素B本身具有剧毒，并且它的使用受到副作用的影响，包括寒战、发烧、肌痛或血栓性静脉炎。其他抗真菌剂包括口服唑类药物(咪康唑、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑)和5
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氟胞嘧啶。然而，诸如克柔念珠菌和光滑球拟酵母等真菌物种对氟康唑具有抗药性，这些物种通常发生在预防性施用该药物的患者身上。此外，还报道了白色念珠菌的氟康唑抗性菌株。因此，尽管在治疗性抗真菌药物方面取得了进展，但对治疗真菌感染的有效药物的需求仍然很迫切。
[0005]在农业中，作物保护在很大程度上依赖于农药的使用，通过将农药喷洒到作物上、在作物浇水期间施用或将其掺入土壤中来施用到作物上。农药通常是有机化学分子，并且由于喷雾漂移、在土壤中的持久性或冲入地表水或地下水，它们重复施用于作物对在处理过程中的农业工人和环境均造成毒性威胁。能够使用对人类和环境毒性较小但同时提供对植物害虫的有效控制的替代化合物将是有利的。对特定植物害虫目标具有特异性的蛋白质类农药在这方面可能非常有利，因为预计它们在环境中短期存在并且具有较少毒性的脱靶效应。然而，已知的蛋白质类或肽类农药很少。一些例子是Bt毒素、凝集素、防御素、fabatins、鲎素肽、蛙皮素、过敏蛋白(参见WO2010019442)、豌豆白蛋白1亚基b(PA1b)。然
而，这些蛋白质类农药要么是结构紧凑的小肽，由几个二硫桥稳定，要么是较大的蛋白质(>300个氨基酸)，以结晶形式存在(Cry毒素(哭泣毒素，cry toxins))。在农业领域中确实已知的是，生物制品，特别是蛋白质，对于开发农药来说是具有挑战性的结构，因为它们通常具有太低的稳定性而无法在农业化学制剂中维持它们的杀虫功能，特别是对于田间应用。

技术实现思路

[0006]本专利技术人已成功开发出对害虫(特别是植物、动物或人类病原性害虫，例如但不限于植物、动物或人类病原性真菌)的靶具有令人惊讶的高特异性、亲和力和效力的多肽。多肽可以结合真菌孢子细胞膜的特定脂质级分。仅仅多肽的结合通过阻滞孢子生长和/或裂解和爆炸孢子而足以具有杀真菌活性，从而防止菌丝体形成。因此，多肽可具有杀真菌或抑真菌活性。
[0007]此外，这些多肽在组合物中保留了它们的完整性、稳定性和活性，并且通过将包含如本申请中公开的多肽的组合物施用于作物、动物或人类可以令人惊讶地实现有效的害虫或病原体控制。
[0008]如本文所公开的多肽的功效和效力表明在相同剂量下较低的治疗剂量和/或更有效治疗的潜力。这可能意味着，在农业化学和医疗应用中减少不需要的副作用并降低毒性。此外，这允许应用较低量或剂量的本文公开的多肽或组合物。
[0009]更具体地，本专利技术人发现用本文设想的多肽靶向害虫或病原体的分子结构允许有效控制该病原体。
[0010]特别地，本专利技术人已经开发出能够预防、保护、治疗或治愈植物、动物或人类免于(发展)病原体感染或免于与病原体(特别是真菌病原体)的任何其他生物相互作用的多肽。因此，本专利技术证明生物分子(例如多肽或氨基酸序列)可用于有效地保护或治疗植物、动物或人类免于因植物、动物或人类与病原体之间的生物相互作用(例如通过病原体感染)以任何方式带来的损害或遭受所述生物相互作用。
[0011]本专利技术的多肽和组合物可以作为独立产品，例如独立组合物，例如抗真菌组合物。
[0012]本专利技术的多肽和组合物可以以预防性或预防性方式使用，即第一次施用发生在疾病出现之前。
[0013]本专利技术的多肽和组合物可以用作接触杀真菌剂。
[0014]因此，根据本专利技术，提供了一种包含至少一种多肽的组合物，该多肽能够与真菌结合。该多肽由此导致所述真菌的孢子生长延迟和/或所述真菌的孢子裂解。也就是说，多肽与真菌的结合导致所述真菌的孢子生长延迟和/或所述真菌的孢子裂解。
[0015]还提供了一种多肽，该多肽能够与真菌结合。多肽由此导致所述真菌的孢子生长延迟和/或所述真菌的孢子裂解。也就是说，多肽与真菌的结合导致所述真菌的孢子生长延迟和/或所述真菌的孢子裂解。
[0016]本专利技术的和本专利技术中使用的多肽可以(特异性地)结合真菌的膜或真菌膜的组分。在一些实施方式中，本专利技术的和本专利技术中使用的多肽不(特异性地)结合真菌的细胞壁或细胞壁的组分。例如，在一些实施方式中，本专利技术的和本专利技术中使用的多肽不(特异性地)结合真菌的葡糖神经酰胺。
[0017]本专利技术还提供了一种包含至少一种多肽的组合物，其中所述至少一种多肽能够结
合真菌(例如贵腐霉菌(Botrytis cinerea)或其他真菌)的质膜的含脂质的级分。含脂质的级分可以是通过色谱法能够获得的。例如，含脂质的级分可以是通过以下方法能够获得的，该方法包括：
[0018]通过总脂质提取物薄层色谱分级真菌(例如贵腐霉菌或其他真菌)的菌丝，和选择保留因子(Rf)高于神经酰胺级分并且低于非极性磷脂级分的级分。
[0019]本专利技术还提供了一种多肽，其中所述至少一种多肽能够结合真菌(例如贵腐霉菌或其他真菌)的质膜的含脂质的级分。含脂质的级分可以是通过色谱法能够获得的。例如，含脂质的级分可以是通过以下方法能够获得的，该方法包括：
[0020]通过总脂质提取物薄层色谱分级真菌(例如贵腐霉菌或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述多肽能够与真菌结合，从而导致所述真菌的孢子的生长延迟和/或所述真菌的孢子的裂解。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述至少一种多肽特异性地结合所述真菌的至少一种质膜组分。3.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述至少一种多肽能够结合贵腐霉菌质膜的含脂质的级分，所述含脂质的级分可以通过包括以下各项的方法获得：通过总脂质提取物薄层色谱分级贵腐霉菌的菌丝，和选择保留因子(Rf)高于神经酰胺级分并且低于非极性磷脂级分的级分。4.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述多肽包含SEQ ID NO:1至51或101至111中任一项所示的氨基酸序列或与其任一项具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列，并且所述多肽能够与真菌结合。5.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述多肽包含具有选自SEQID NO:52至67和112至122的氨基酸序列的CDR1区、具有选自SEQ ID NO:68至83和123至133的氨基酸序列的CDR2区、以及CDR3区，可选地其中所述CDR3区具有选自SEQ ID NO:84至100和134至144的序列，并且所述多肽能够与真菌结合。6.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述多肽包含具有SEQ IDNO:52所示氨基酸序列的CDR1区、具有SEQ ID NO:68所示氨基酸序列的CDR2区和具有SEQ ID NO:84所示氨基酸序列的CDR3区，并且所述多肽能够与真菌结合。7.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述多肽包含具有SEQ IDNO:53所示氨基酸序列的CDR1区、具有SEQ ID NO:69所示氨基酸序列的CDR2区和具有SEQ ID NO:85所示氨基酸序列的CDR3区，并且所述多肽能够与真菌结合。8.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，所述多肽包含具有SEQ IDNO:54所示氨基酸序列的CDR1区、具有SEQ ID NO:70所示氨基酸序列的CDR2区和具有SEQ ID NO:86所示氨基酸序列的CDR3区，并且所述多肽能够与真菌结合。9.一种包含至少一种多肽的组合物，其中，该多肽包含SEQ ID NO:1至51至101至111中任一项所示的氨基酸序列或与其任一项具有至少约80％序列同一性的氨基酸序列，并且所述多肽能够与真菌结合，其中所述多肽包含导致与SEQ ID NO:1至51至101至111中任一个相比正电荷增加的一个或多个取代。10.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中，所述至少一种多肽是抗体或其功能片段。11.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中，所述至少一种多肽是抗体的重链可变结构域(V
H
或V
HH
)或其功能片段。12.根据权利要求4至11中任一项所述的组合物，其中，所述至少一种多肽与所述真菌的至少一种质膜组分特异性结合。13.根据权利要求12所述的组合物，其中，所述至少一种多肽能够结合贵腐霉菌质膜的含脂质的级分，所述含脂质的级分可以通过包括以下各项的方法获得：通过总脂质提取物薄层色谱分级贵腐霉菌的菌丝，和选择保留因子(Rf)高于神经酰胺级分并且低于非极性磷脂级分的级分。14.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中，所述组合物中所述至少一种多肽
的浓度范围为0.0001重量％至50重量％。15.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其为农化组合物。16.根据权利要求15所述的组合物，其还包含农业化学上合适的载体和/或一种或多种合适的佐剂。17.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中，所述真菌是植物病原性真菌。18.根据权利要求17所述的组合物，其中，所述植物病原性真菌的属选自链格孢属、壳二孢属、葡萄孢属、尾孢属、刺盘孢属、色二孢属、白粉菌属、镰胞菌、小球腔霉属、顶囊壳属、长蠕孢属、壳球孢菌、丛赤壳属、青霉菌属、霜霉属、茎点霉属、瘤梗孢属、疫霉属、单轴霉属、叉丝单囊壳属、柄锈属、核腔菌属、梨孢属、腐霉属、丝核菌属、小菌核菌属、核盘菌属、壳针孢属、根串珠霉属、钩丝...

【专利技术属性】
技术研发人员：纳塔利娅，
申请(专利权)人：生物催化公司，
类型：发明
国别省市：