治疗性mRNA的体外制造和纯化制造技术

本发明专利技术包含用于在体外产生多核苷酸，并且具体地产生用于治疗性应用的mRNA的新型系统、方法和组合物。方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗性mRNA的体外制造和纯化
[0001]本国际PCT申请要求于2020年4月16日提交的美国临时申请第63/011133号的权益和优先权，所述美国临时申请通过引用整体并入本文中。
[0002]序列表
[0003]本申请含有序列表，所述序列表已经以ASCII格式电子提交，并且在此通过引用整体并入。创建于2021年4月16日的所述ASCII副本命名为“90125
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00181
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Sequence
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Listing
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AF.txt”，并且大小是26.9千字节。


[0004]本专利技术总体上涉及在体外产生多核苷酸的领域，并且具体地产生用于治疗性应用的mRNA。

技术介绍

[0005]信使RNA(mRNA)是从细胞DNA转录的模板分子，并且在生物体细胞的核糖体处翻译成氨基酸序列，即，蛋白质。为了控制编码的蛋白质的表达水平，mRNA具有位于实际开放阅读框(ORF)的两侧的非翻译区(UTR)，所述实际开放阅读框含有编码氨基酸序列的遗传信息。分别称为5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在体外产生信使RNA(mRNA)多核苷酸的连续流重组系统，所述连续流重组系统包括：
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连续流生物反应器，所述连续流生物反应器具有：
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至少一个连续流反应室，所述至少一个连续流反应室被配置成容纳具有DNA模板的输入反应混合物；以及
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至少一个连续流导管，所述至少一个连续流导管被配置成容纳进料溶液并使所述进料溶液循环并且被进一步配置成通过一系列导管孔与所述连续流反应室流体连通，从而在所述输入反应混合物与所述进料溶液之间形成梯度；
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其中所述输入反应混合物和所述进料溶液含有用于在体外产生从所述DNA模板转录的靶mRNA的所有必要组分；
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蛋白质去除组件，所述蛋白质去除组件被配置成去除所述mRNA输出的蛋白质级分；
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DNA去除组件，所述DNA去除组件被配置成去除所述mRNA输出的DNA级分；以及
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核苷酸沉淀组件，所述核苷酸沉淀组件被配置成去除所述mRNA输出的核苷酸三磷酸(NTP)级分。2.根据权利要求1所述的系统，其中所述DNA模板包括线性DNA模板或环状DNA模板。3.根据权利要求1和2中任一项所述的系统，其中所述DNA模板编码抗原多肽。4.根据权利要求1所述的系统，其中所述抗原多肽包括来自COVID
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19冠状病毒的抗原多肽。5.根据权利要求1所述的系统，其中所述输入反应混合物包括一种或多种选自由以下组成的组的组分：
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第一量的分离的RNA聚合酶(RNAP)；
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一定量的反应缓冲液；以及
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任选地初始量的分离的核苷酸三磷酸(NTP)。6.根据权利要求1所述的系统，其中所述进料溶液包括一种或多种选自由以下组成的组的组分：
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第一量的分离的NTP；
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一定量的反应缓冲液；
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任选地无机多磷酸盐能量再生系统的组分；以及
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任选地一种或多种用于产生mRNA多核苷酸的辅因子。7.根据权利要求1所述的系统，其中所述蛋白质去除组件包括蛋白质亲和柱，所述蛋白质亲和柱被配置成从所述mRNA输出中去除所述蛋白质级分。8.根据权利要求1所述的系统，其中所述DNA去除组件包括DNA亲和柱，所述DNA亲和柱被配置成从所述mRNA输出中去除所述蛋白质级分。9.根据权利要求1所述的系统，其中所述核苷酸沉淀组件包括醇沉淀系统，所述醇沉淀系统被配置成从所述mRNA输出中分离所述靶mRNA。10.根据权利要求1和9中任一项所述的系统，其中分离的靶mRNA被重新溶解或干燥。11.根据权利要求9所述的系统，其中所述分离的靶mRNA包括稳定的mRNA。12.根据权利要求9和11中任一项所述的系统，其中所述分离的靶mRNA是疫苗。13.根据权利要求9、11和12中任一项所述的系统，其中所述分离的靶mRNA被掺入到药
物组合物中。14.根据权利要求1所述的系统，并且进一步包括与输入阀联接的输入储器，所述输入阀被配置成允许将进料溶液实时注入到所述连续流导管中。15.根据权利要求1所述的系统，并且进一步包括与输出阀联接的输出储器，所述输出阀被配置成允许从所述连续流反应室中提取所述mRNA输出。16.一种用于在体外产生信使RNA(mRNA)多核苷酸的分批进料重组系统，所述分批进料重组系统包括：
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分批进料反应室，所述分批进料反应室被配置成容纳具有DNA模板和进料溶液的输入反应混合物，其中所述输入反应混合物和所述进料溶液含有用于在体外产生从所述DNA模板转录的靶mRNA的所有必要组分；
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蛋白质去除组件，所述蛋白质去除组件被配置成去除所述mRNA输出的蛋白质级分；
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DNA去除组件，所述DNA去除组件被配置成去除所述mRNA输出的DNA级分；以及
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核苷酸沉淀组件，所述核苷酸沉淀组件被配置成去除所述mRNA输出的核苷酸三磷酸(NTP)级分。17.根据权利要求16所述的系统，其中所述DNA模板包括线性DNA模板或环状DNA模板。18.根据权利要求16和17中任一项所述的系统，其中所述DNA模板编码抗原多肽。19.根据权利要求16所述的系统，其中所述抗原多肽包括来自COVID
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19冠状病毒的抗原多肽。20.根据权利要求16所述的系统，其中所述输入反应混合物包括一种或多种选自由以下组成的组的组分：
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第一量的分离的RNA聚合酶(RNAP)；
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一定量的反应缓冲液；以及
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任选地初始量的分离的核苷酸三磷酸(NTP)。21.根据权利要求16所述的系统，其中所述进料溶液包括一种或多种选自由以下组成的组的组分：
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第一量的分离的NTP；
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一定量的反应缓冲液；
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任选地无机...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：自然工具箱公司，
类型：发明
国别省市：