一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法技术

本发明专利技术公开了一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法，显著提高了防治烟草赤星病病害效果，其菌剂富含对赤星病病原菌有抑制作用的拮抗菌群，能够有效防治烟草赤星病病害，而且大大降低了对污染环境的风险，并且添加的纳米银能够提高生防菌抗菌活性，在对环境友好的前提下，大幅度提高防治烟草赤星病病害的效果。的效果。

【技术实现步骤摘要】
一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法


[0001]本专利技术涉及烟草
，具体涉及一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法。

技术介绍

[0002]烟草是我国重要的经济作物，但是近年来，烟草病害的频繁发生，造成烟草产量和品质下降，带来了严重的经济损失。而赤星病是烟草病害较为常见的一种病害，赤星病一旦发生，会以很广泛的速度进行扩展，影响烟叶的产量，给烟农带来巨大的损失。现阶段防治烟草赤星病主要采用化学药剂，但是化学药剂会使得致病菌产生抗药性，并且容易污染环境。相对而言生防菌剂对环境友好，并且有些生防菌会促进植物生长，成为了目前植物病害绿色防治主要的途径之一。
[0003]筛选烟草赤星病病害生防微生物是目前生物防治的重要工作，但是目前现有的拮抗菌针对性不强，防治病害效果较差，少见其拮抗菌规模化生产应用的报道，并且生产成本不低，其菌剂的实用价值未能达到更好的水平。纳米银因其具有促使细胞破壁、容易被微生物细胞吸收、直接作用于病菌，显著提高了药效，并依托纳米物质的表面效应，充分降低用药量，从而在使用经济性上得到突破，而国内有关纳米银与生防菌剂结合对防治效果的影响显有报道。

技术实现思路

[0004]针对以上问题，本专利技术的目的在于提供一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法。
[0005]为解决上述的技术问题，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法，制备方法包括以下步骤：
[0007](1)准备枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌各一株；
[0008](2)将枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌分别经过固体斜面活化成原种；
[0009](3)将活化的菌种原种分别接种到对应的LB培养基中，扩大培养，当各微生物菌数为109‑
10
10
个/ml时，用储罐收集各个菌种的菌液；
[0010](4)将收集的枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌菌液按体积比3:4:3配制成微生物菌剂，其浓度为109‑
10
10
个/ml；
[0011](5)选用玉米粉和红糖作为营养元素，其中玉米粉与红糖的质量比为1:1，玉米粉、红糖的质量与微生物菌剂的质量比为5:7，玉米粉、红糖与微生物菌剂进行混合得到微生物菌剂；
[0012](6)制备纳米银；
[0013](7)制得的纳米银与微生物菌剂的菌液，按每1L微生物菌剂的菌液里面添加80mg纳米银复配为复合微生物菌剂，防治烟草赤星病。
[0014]进一步的；所述步骤(3)中，扩大培养为：用接种环从斜面培养基上挑取各菌种至
2L灭菌LB培养基中，于震荡培养箱中温度为25℃，转速为130r/min培养24h，得到一级种子液。
[0015]进一步的；所述步骤(3)中，扩大培养为：配置30L工业培养基于50L发酵罐灭菌后，接入5％
‑
10％体积的一级种子液，在pH为8，转速为180r/min，温度为35℃发酵条件下扩培48h，得到二级种子液接；配置400L工业培养基于500L发酵罐灭菌后，通过压力接种法，接入二级种子液，pH为6.5
‑
7.5，转速为180r/min，温度为30℃发酵条件下发酵72h后放罐。
[0016]进一步的；：所述LB培养基由950ml去离子水加入、10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10gNacl制备得到。
[0017]进一步的；所述工业培养基是在LB培养基基础上加入碳源、氮源制备得到工业培养基，碳源为葡萄糖，氮源为胰蛋白胨、酵母粉、硫酸铵；其中，胰蛋白胨、酵母粉、硫酸铵的质量比为2：3：1。
[0018]进一步的；步骤(6)中，制备纳米银：取配置100ml的1mol/LAgNO3溶液，至于磁力搅拌器上搅拌加热，逐滴加入5ml的1％柠檬酸钠溶液，煮沸1h，观察溶液变化，待反应完成时，将合成的纳米银溶液在12000r/min下离心15min，弃上清液，收集纳米银颗粒，用超纯水重复离心，超纯水的离心条件为12000r/min，时间为15min，操作三次以纯化；再进行冻干，收集纳米银粉末。
[0019]与现有技术相比，本专利技术的至少具有以下有益效果之一：
[0020]1、本专利技术的目的在于提供与纳米银按一定比例复配的复合型多功能微生物菌剂制备和施用方法，有效提高烟草对赤星病病害的抵抗力和防治效果，其添加的纳米银能够增加生防菌抗菌活性，本专利技术将防治赤星病的拮抗菌群结合添加纳米银形成复合型多功能菌剂，显著提升了其控病和促生效果。
[0021]2、提高了防治烟草赤星病病害效果，其菌剂富含对赤星病病原菌有抑制作用的拮抗菌群，能够有效防治烟草赤星病病害，而且大大降低了对污染环境的风险，并且添加的纳米银能够提高生防菌抗菌活性，在对环境友好的前提下，大幅度提高防治烟草赤星病病害的效果。
具体实施方式
[0022]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0023]一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法，制备方法包括以下步骤：
[0024](1)准备枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌各一株；
[0025](2)将枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌分别经过固体斜面活化成原种；
[0026](3)将活化的菌种原种分别接种到对应的LB培养基中，扩大培养，扩大培养为用接种环从斜面培养基上挑取各菌种至2L灭菌LB培养基中，于震荡培养箱中温度为25℃，转速为130r/min培养24h，得到一级种子液
[0027]再配置30L工业培养基于50L发酵罐灭菌后，接入一级种子液，在pH为8，转速为180r/min，温度为35℃发酵条件下扩培48h，得到二级种子液接；
[0028]再配置400L工业培养基于500L发酵罐灭菌后，通过压力接种法，接入二级种子液，
pH为6.5
‑
7.5，转速为180r/min，温度为30℃发酵条件下发酵72h后；当各微生物菌数为109‑
10
10
个/ml时，用储罐收集各个菌种的菌液；
[0029](4)将收集的枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌菌液按体积比3:4:3配制成微生物菌剂，其浓度为109‑
10
10
个/ml；
[0030](5)选用玉米粉和红糖作为营养元素，其中玉米粉与红糖的质量比为1:1，玉米粉、红糖的质量与微生物菌剂的质量比为5:7，玉米粉、红糖与微生物菌剂进行混合得到微生物菌剂；
[0031](6)制备纳米银；制备纳米银：取配置100ml的1mol/LAgNO3溶液，至于磁力搅拌器上搅拌加热，逐滴加入5ml的1％柠檬酸钠溶液，煮沸1h，观察溶液变化，待反应完成时，将合成的纳米银溶液在12000r/min下离心15min，弃上清液，收本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法，其特征在于：制备方法包括以下步骤：(1)准备枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌各一株；(2)将枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌分别经过固体斜面活化成原种；(3)将活化的菌种原种分别接种到对应的LB培养基中，扩大培养，当各微生物菌数为109‑
10
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个/ml时，用储罐收集各个菌种的菌液；(4)将收集的枯草芽孢杆菌、寡养单胞菌、无色杆菌菌液按体积比3:4:3配制成微生物菌剂，其浓度为109‑
10
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个/ml；(5)选用玉米粉和红糖作为营养元素，其中玉米粉与红糖的质量比为1:1，玉米粉、红糖的质量与微生物菌剂的质量比为5:7，玉米粉、红糖与微生物菌剂进行混合得到微生物菌剂；(6)制备纳米银；(7)制得的纳米银与微生物菌剂的菌液，按每1L微生物菌剂的菌液里面添加80mg纳米银复配为复合微生物菌剂，防治烟草赤星病。2.根据权利要求1所述的一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，扩大培养为：用接种环从斜面培养基上挑取各菌种至2L灭菌LB培养基中，于震荡培养箱中温度为25℃，转速为130r/min培养24h，得到一级种子液。3.根据权利要求2所述的一种与纳米银协同防治烟草赤星病的菌剂制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中，扩大培养为：配置30L工业培养基于50L发酵罐灭菌后...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄智华，崔永和，宋学茹，瞿兴，李江舟，杨海林，尹华群，谭格，黄婧怡，李晟，
申请(专利权)人：云南省烟草公司玉溪市公司，
类型：发明
国别省市：