一种氯苯降解菌及其在污染场地修复中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种氯苯降解菌及其在污染场地修复中的应用，该降解菌为潘多拉菌属，命名为Pandoraea sp.XJJ

【技术实现步骤摘要】
一种氯苯降解菌及其在污染场地修复中的应用


[0001]本专利技术属于微生物处理降解
，涉及一种氯苯降解菌及其在污染场地修复中的应用。

技术介绍

[0002]氯苯是一种有毒有害的挥发性有机物(VOCs)，具有三致作用，已经被美国EPA列为优先控制污染物。氯苯是一种重要的中间体和溶剂，广泛应用于农药、塑料和医药等行业。中国是氯苯类化合物最主要的生产国和供应国，占世界产量的50％以上。在土壤和地下水的氯苯污染中，农药厂是主要污染源，吴晓峰等人在山东某农药厂污染地下水中检出氯苯最高超标7倍，王海平等人在某农药厂污染地下水检出氯苯37.4mg/L，陈莉娜等人在某有机氯农药厂检出氯苯5.62mg/L。另外，在一些在产企业场地也常氯苯检出，沈宗泽等人在北方某化工厂污染地块地下水中检出氯苯600
‑
1200μg/L，Xu等人在中国某溶剂处理厂的土壤和地下水中分别检出氯苯13.8
‑
1560mg/kg和1.56mg/L。氯苯对人类和被污染的水生和陆生生态系统周围的其他生物造成了很高的潜在风险和有害影响。
[0003]近年来，氯苯类化合物的实际场地修复不断开展。顾维等人利用循环井技术在28d后可以去除地下水中94.5％
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96.5％的氯苯，迟克宇等人利用原位电热脱附技术可以去除某退役化学试剂厂土壤及地下水中的氯苯，Xie等人利用水电解技术可以去除某废弃化工厂的氯苯污染。但是，这些技术无法满足在产企业的场地修复要求。在产场地修复要避免影响正常生产，要充分保障安全，要防止污染物反弹，因此，因此有必要选择一种安全、高效、连续的原位修复方法。微生物修复因其灵活性、高效性、有效性、经济性和生态友好性而成为较好的选择。
[0004]利用微生物来降解氯苯及氯苯类化合物在国内外已有很多报道，并筛选出大量对氯苯有很好降解作用的微生物。张丽丽等人从生物滴滤床中筛选到皮氏罗尔斯顿菌H2(专利号CN 101880642 A)，欧阳杜娟等人从活性污泥中筛选到吡啶红球菌(专利号CN 110982728 A)。而这些菌株虽然能够降解氯苯，但针对农药、化工等氯苯污染地下水具有温度低、污染物种类多造成降解菌难存活和活性低的问题，研发具有生长温度范围广、降解底物多的氯苯高效降解菌株尚未报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的就是为了提供一种氯苯降解菌及其应用，以克服现有其它菌种降解速度慢、对低浓度氯苯污染物去除不够彻底，并且容易造成二次污染等问题中的至少一种。
[0006]本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
[0007]一方面，本专利技术提出了一种氯苯降解菌，其为潘多拉杆菌属，命名为Pandoraea sp.XJJ
‑
1，保藏于中国典型培养物保藏中心(地址为中国.武汉.武汉大学)，保藏编号为CCTCC NO：M 2021057，保藏时间为2021年1月14日。
[0008]进一步的，其革兰氏染色呈阴性，菌株形态无荚膜、杆菌，且在Luria
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Bertani培养
基上菌落形态规则，呈黄色、凸起、不透明和光滑。同时，对其进行了16S rDNA测序，所测得的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示，并将16S rDNA序列进行BLAST比对，比对结果显示，菌株XJJ
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1的16S rDNA的核苷酸序列与潘多拉杆菌属(Pandoraea sp.)不同菌株的核苷酸序列有大于99％的同源性。
[0009]另一方面，本专利技术还提出了一种氯苯降解菌的筛选方法，包括以下步骤：
[0010](1)将基础无机盐培养基、微量元素混合液和氯苯溶液混合，得到液体培养基；
[0011](2)称取一定质量的农药厂污染土壤样品放置于液体培养基中，恒温摇床培养后得到含有菌的第一培养液，移取10％的第一培养液(此处为体积量)转移至另一份液体培养基中，培养后得到含有菌的第二培养液，如此重复多次，直至得到第n培养液，其中n＝5
‑
8；
[0012](3)将所得第n培养液进行涂布稀释划线分离培养，即得到氯苯降解菌。
[0013]进一步的，步骤(1)中，所述的基础无机盐培养基中的无机盐成分至少包含：0.023g/L CaCl2；0.2g/L MgSO4·
7H2O；2.5g/L(NH4)2SO4；1.0g/L KH2PO4；4.5g/L Na2HPO4·
12H2O。
[0014]进一步的，步骤(1)中，所述的微量元素混合液中的溶质成分至少包括：0.15g/L ZnSO4·
7H2O，0.26g/L MnSO4·
H2O，0.03g/L CoCl2·
6H2O，4.5g/L FeSO4·
7H2O，0.02g/L NiCl2·
6H2O，0.01g/L CuCl2，0.1g/L Na2MoO4·
2H2O，0.06g/L H3BO3。
[0015]进一步的，步骤(1)中，氯苯溶液所用的溶剂为N,N
‑
二甲基甲酰胺，其浓度优选为50g/L；
[0016]无机盐培养基、微量元素溶液、氯苯溶液的添加体积比为106:103:2。
[0017]进一步的，这里从农药厂获得的土壤样品和液体培养基的用量可以根据实际要求进行调节。例如，步骤(2)中，制得第一培养液时，土壤样品与液体培养基的添加量之比可以为(3
‑
6)g:30mL。同样的，从第一培养液中转移至第二培养液的量与第一混合液体积比可以是1:30至1:10，本专利技术不局限于此。
[0018]进一步的，步骤(2)的整个驯化过程中，所用工具可以根据实际情况具体选择，这里筛选所用的瓶子为150mL钳口血清瓶，用铝盖加垫片密封，其中所加液体为20
‑
30mL，当然，本专利技术不局限于此。
[0019]进一步的，步骤(2)中，驯化条件可以根据实际情况具体选择。比如，这里适用的摇床转速可以是180r/min，培养过程在密闭条件下进行，温度为28℃，每次培养的时间为2
‑
3d。
[0020]进一步的，步骤(3)中，稀释涂布分离培养过程具体为：取1mL第n次培养液，用磷酸缓冲液逐级稀释为10
‑1，10
‑2，10
‑3，10
‑4，10
‑5，10
‑6，每个浓度梯度吸取100μL液体后转移至含有氯苯的Luria
‑
Bertani培养基平板中，用涂步棒进行涂布分离，每个梯度3个平行。培养一定时间后，用接种环挑取合适的单菌落在Luria
‑
Bertani培养基平板上线分离，如此重复2
‑
3次，将获得的单菌接种至含有氯苯的无机盐培养基中验证降解能力，若观察到氯苯浓度降低且细菌能以氯苯为唯一碳源生长，即为氯苯降解菌。
[0021]再另一方面，本专利技术还提出了一种氯苯降解菌的应用，具体的，将其应用在降本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种氯苯降解菌，其特征在于，其为潘多拉杆菌属，命名为Pandoraea sp.XJJ
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1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2021057，保藏时间为2021年1月14日。2.根据权利要求1所述的一种氯苯降解菌，其特征在于，其革兰氏染色呈阴性，菌株形态无荚膜、杆菌，且在Luria
‑
Bertani培养基上菌落形态规则，呈黄色、凸起、不透明和光滑。3.根据权利要求1所述的一种氯苯降解菌的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔长征，袁波，张磊，陈欣，杨洁，潘丽旭，欧阳霁，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：