本发明专利技术提供了一种海参体壁多糖的提取和解析方法，包括如下步骤：A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。本发明专利技术以海参体壁为原料，进行预处理、酶解醇沉、脱色、除蛋白、分级柱层析、冻干即得成品。所得多糖结构完整且纯度高，为富含硫酸基的海参多糖提取纯化制备提供了有效手段。了有效手段。
【技术实现步骤摘要】
一种海参体壁多糖及其提取、解析方法
[0001]本专利技术涉及水产品加工
，尤其是涉及一种海参体壁多糖及其提取、解析方法。
技术介绍
[0002]我国海洋资源甚是丰富，开发利用海洋生物资源已成为一个重要领域和发展方向，其中海洋多糖由于其抗炎、抗肿瘤、抗病毒等活性，成为现在关注的热点之一。不同海参品种中的活性杂多糖结构和活性存在较大差异，多糖的分离提纯，及结构分析测定是研究其生物活性的基础，对于其构效关系的研究十分重要，且对于海参资源的开发利用具有一定的社会价值和经济价值。
[0003]目前，国内专利对于海参多糖的开发已有所涉及。如现有专利CN102605031A公开了一种以海参内脏为原料，采用生物酶解技术、膜分离技术提取海参多糖、海参多肽的方法。海参下脚料中所含蛋白质及总糖的提取率可达到60～70％，目标产物中的有效活性成份含量较高，而且不含有溶剂残留，安全性高。专利CN 104513322A公开了一种碱提取海参多糖方法,一般使用稀NaOH溶液或KOH溶液进行提取，此法可以从组织中对海参多糖进行较完全的提取，但多糖分子有可能被碱进一步降解，因此在提取时所采用使用的稀碱溶液的浓度在5％—10％之间，温度保持在10℃以下。
[0004]目前，专利中未见以体壁制备海参精多糖，同时对海参多糖结构系统解析的相关报道。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供一种海参精多糖的提取方法，本专利技术海参精多糖的提取率高、纯度高，同时结构完整。
[0006]本专利技术提供了一种海参体壁多糖的提取和解析方法，包括如下步骤：
[0007]A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；
[0008]B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；
[0009]C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；
[0010]D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。
[0011]优选的，步骤A)所述脱脂为丙酮脱脂；所述冻干参数为
‑
60～
‑
25℃，真空度1
‑
3bar，10
‑
14h。
[0012]优选的，步骤A)所述酶解为采用木瓜蛋白酶酶解；所述酶解参数为10400u/g，所述酶加入量为0.2～0.5g。
[0013]优选的，步骤A)所述醇沉为采用无水乙醇沉淀；所述醇沉后为静置10～12h离心。
[0014]优选的，步骤B)所述脱色为活性炭脱色，所述脱色具体为40℃搅拌脱色60min；所述除蛋白为采用三氟乙酸除蛋白。
[0015]优选的，步骤B)所述透析为采用截留分子量为8000Da的透析袋透析48h；所述冻干
参数为
‑
60～
‑
25℃，真空度1
‑
3bar，10
‑
14h。
[0016]优选的，步骤C)所述分级柱层析具体为先采用DEAE
‑
Sepharose Fast Flow柱分级分离，洗脱后再经Sephadex G
‑
100柱纯化。
[0017]优选的，所述洗脱为采用梯度浓度的NaCl溶液洗脱；所述洗脱具体为:
[0018]使用含0M，0.05M，0.5M，1M，1.5M，2M，3M和4MNaCl的0.1M乙酸钠溶液洗脱，设置1mL/min的流速，5min/管，收集洗脱溶液.
[0019]优选的，所述步骤D)具体为：
[0020]所述海参精多糖采用高效液相色谱和离子色谱进行单糖组成的分析；
[0021]所述海参精多糖通过高效液相色谱的LC系统测定多糖的均一性和分子量
[0022]所述海参精多糖通过红外光谱和核磁共振光谱解析多糖的分子结构，通过Verios G4 UC扫描电子显微镜和X射线衍射仪观察多糖形貌以及分析多糖晶体结构。
[0023]本专利技术提供了一种海参体壁多糖，由上述技术方案任意一项所述的制备方法制备得到。
[0024]与现有技术相比，本专利技术提供了一种海参体壁多糖的提取和解析方法，包括如下步骤：A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。本专利技术以海参体壁为原料，进行预处理、酶解醇沉、脱色、除蛋白、分级柱层析、冻干即得成品。所得多糖结构完整且纯度高，为富含硫酸基的海参多糖提取纯化制备提供了有效手段。
附图说明
[0025]图1足海参多糖的DEAE洗脱曲线(A)、HLP
‑
I(B)和HLP
‑Ⅱ
(C)的Sephadex G
‑
100洗脱曲线；
[0026]图2是冻干玉足海参多糖；
[0027]图3是标准单糖和HLP的HPAEC
‑
PAD色谱图谱(A)；标准单糖和HLP的HPLC色谱图(B)；HLP
‑
I的高效液相色谱图单糖组成分析(C)；
[0028]图4是HLP
‑
I的HPSEC色谱图；
[0029]图5是HLP
‑
I的红外光谱图(A)、1H NMR谱(B)、13C NMR谱(C)、COSY谱(D)、TOCSY谱(E)、HSQC谱(F)、NOESY谱(G)、HMBC谱(H)；
[0030]图6是HLP
‑
I的扫描电子显微镜图(A)(B)(2000
×
和10000
×
)和原子力显微图(C)(D)；
[0031]图7是X射线衍射曲线的晶体结构分析。
具体实施方式
[0032]本专利技术提供了一种海参体壁多糖及其提取、解析方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本专利技术保护的范围。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0033]本专利技术提供了一种海参体壁多糖的提取和解析方法，包括如下步骤：
[0034]A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；
[0035]B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；
[0036]C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；
[0037]D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。
[0038]本专利技术提供的一种海参体壁多糖的提取方法首先将海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；
[0039]本专利技术所述海参体壁制浆具体为:将干燥的海参体本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种海参体壁多糖的提取和解析方法，其特征在于，包括如下步骤：A)海参体壁制浆、冻干成粉，脱脂，酶解，醇沉，得到预处理后样品；B)将预处理后样品脱色、除蛋白，透析、冻干得到海参粗多糖；C)将海参粗多糖通过分级柱层析，冷冻干燥得到海参精多糖；D)对海参精多糖的组成、分子量和结构进行解析。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述脱脂为丙酮脱脂；所述冻干参数为
‑
60～
‑
25℃，真空度1
‑
3bar，10
‑
14h。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述酶解为采用木瓜蛋白酶酶解；所述酶解参数为10400u/g，所述酶加入量为0.2～0.5g。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A)所述醇沉为采用无水乙醇沉淀；所述醇沉后为静置10～12h离心。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B)所述脱色为活性炭脱色，所述脱色具体为40℃搅拌脱色60min；所述除蛋白为采用三氟乙酸除蛋白。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B)所述透析为采用截留分子量为8000Da的透析袋透析48h；所述冻干参数为
‑...
【专利技术属性】
技术研发人员：李川，王莞婷，史亚丽，曹君，
申请(专利权)人：海南大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。