一种抗体偶联药物连接子的合成方法技术

本发明专利技术提供了一种抗体偶联药物连接子的制备方法，其包括以下步骤：以Fmoc

【技术实现步骤摘要】
一种抗体偶联药物连接子的合成方法


[0001]本专利技术涉及一种制备抗体偶联药物连接子的工业化方法，尤其涉及一种Mc
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PNP连接子的制备方法，属于药物化学合成


技术介绍

[0002]抗体偶联药物(Antibody
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Drug Conjugate，ADC)是一种通过连接子将有生物活性的细胞毒性药物与单克隆抗体连接起来的新型靶向生物药。其作用机制一方面是抗体可高特异性靶向识别肿瘤抗原，静脉注射给药后，药物通过血液循环，分布到肿瘤组织并与肿瘤表面抗原结合，ADC与抗原的复合物经历内吞作用，将其携带的小分子细胞毒载荷内化到肿瘤细胞中，被转运到溶酶体以高效活性形式被释放，通过DNA损伤或抑制微管合成进而诱导癌细胞凋亡以实现肿瘤治疗的目的。另一方面是通过释放出可渗透性的游离小分子细胞毒素，通过被动扩散或细胞死亡后进入肿瘤环境中，对邻近的肿瘤细胞造成杀伤效果，即旁观者效应。
[0003]ADC除兼具抗体药物的精准靶向优势和小分子细胞毒药物的高效杀伤优势，还具有活性高、毒副作用小、作用时间长等优势，已经成为生物医药领域炙手可热的研发品种，近10年来取得了长足发展。
[0004]ADC由单克隆抗体(Antibody)、连接子(Linker)和细胞毒性药物(Cytotoxin)三个模块组成。单克隆抗体提供靶向定位，连接子确保ADC可在肿瘤细胞内高效释放细胞毒性药物、且在血液循环和靶外组织细胞中保持稳定，到达靶点后，小分子细胞毒性药物提供对肿瘤细胞的高效杀伤作用。连接子不仅是抗体与小分子细胞毒物之间形成共价连接的结构部分，而且是靶向药物治疗中具有设计性质的关键元件。
[0005]连接子会影响ADC的许多重要特性，如药物
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抗体比值(DAR)、有效载荷释放时间、治疗指数(Therapeutic Index，TI)和药代动力学/药效学。根据肿瘤细胞内连接子的切割特性，可将连接子分为可切割和不可切割两种类型。可切割连接子利用肿瘤微环境特异性释放小分子毒素，包括腙类连接子、二硫化物连接子、酶可裂解型连接子。不可切割连接子通过细胞内溶酶体断开其与抗体的连接，依靠抗体的完全降解来释放。两种类型的连接子分别具有其优缺点：可切割连接子产生的代谢产物被动扩散更易进入胞内产生旁观者杀伤效应，对于靶抗原表达异质性的肿瘤有重要意义，但也会杀死目标肿瘤细胞附近的正常细胞或免疫细胞，在体内循环时可能存在一定程度的代谢降解进而导致脱靶毒性；不可切割连接子比可切割连接子更稳定，可减少脱靶毒性，但其更依赖于靶细胞的生物学特征，需要良好的内化过程才能在细胞内发生降解而激活，旁观者效应也会降低。
[0006]本专利技术涉及的连接子Mc
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PNP为酶可裂解的肽类连接子，此类连接子具有较高的血液循环稳定性和释放效率，连接子结构中链端的马来酰亚胺基和碳酸酯结构可以很容易地分别与抗体分子中的巯基和细胞毒性药物分子中的氨基结合形成ADC分子，非常便于ADC的合成和结构筛选研究工作。结构式如下：
[0007][0008]自2000年首个ADC上市以来，截至目前共有12个ADC获批上市，其中使用Mc
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PNP连接子的就有4个，包括Adcetris(本妥昔单抗)、Polivy(泊洛妥珠单抗)、Padcev(恩诺单抗)和Tivdak(替索单抗)。目前有多达25个使用该结构连接子的分子处于临床阶段。并且在近期有关的专利研究报道中，有大量的ADC活性分子使用该连接子结构(PCT Int.Appl.,2021011834；2020256721；20210015941；2020132658；2020185069；2020095253；2020092617等)。可见该连接子的应用相当广泛。
[0009]文献Bioconjugate Chem.2002,13,855
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869其合成路线包括中公开。化合物2经过取代，缩合，去保护，两步取代反应得到连接子1，该方法文献操作量较小，只有毫克级别，最终收率只有8.6％，并且使用大量乙醚进行后处理，文献中报道的路线如下所示：
[0010][0011]专利CN106380508报道了以化合物3为起始物料经过四步反应得到化合物1。该方法终产物纯度可达99％，收率55％，但是合成过程中使用大量石油醚进行后处理。专利中报道的路线如下所示：
[0012][0013]以上合成路线中使用大量管制试剂乙醚进行打浆处理或剧毒、高度易燃试剂氯甲酸乙酯，不适于放大生产。为了解决上述合成工艺的缺点，本申请旨在提供一种能适用于工业化生产，工艺参数稳定性良好，产品纯度可达到制药行业标准且收率较高的连接子Mc
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PNP的合成方法。

技术实现思路

[0014]本专利技术的目的是提供一种抗体偶联药物连接子Mc
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PNP的制备工艺，以解决上述
技术介绍
提到的问题。
[0015]实现上述目的的技术方案如下：
[0016]一种抗体偶联药物连接子的合成方法，将化合物6与双(4
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硝基苯基)碳酸酯反应后，经如下纯化步骤得到化合物1：
[0017]打浆、硅胶柱层析、重结晶、再打浆；
[0018]优选的是：打浆和再打浆选取的溶剂为甲基叔丁基醚，硅胶柱层析选取的流动相为二氯甲烷/甲醇＝15：1，重结晶选取的溶剂为DMF和甲基叔丁基醚；
[0019]其中，
[0020]化合物6的结构式为：
[0021][0022]化合物1的结构式为：
[0023][0024]进一步的抗体偶联药物连接子的合成方法，包括将化合物5与6
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(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯反应后，经如下纯化步骤得到化合物6：
[0025]打浆、重结晶、再打浆；
[0026]优选的是：打浆和再打浆选取的溶剂为甲基叔丁基醚，重结晶选取的溶剂为DMF和甲基叔丁基醚；
[0027]其中，
[0028]化合物5的结构式为：
[0029][0030]进一步的抗体偶联药物连接子的合成方法，包括将化合物4与二乙胺反应后，经如下纯化步骤得到化合物5：
[0031]打浆；
[0032]优选的是：打浆选取的溶剂为二氯甲烷；
[0033]其中，
[0034]化合物4的结构式为：
[0035][0036]进一步的抗体偶联药物连接子的合成方法，包括将化合物3与对氨基苯甲醇、EEDQ反应后，经如下纯化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体偶联药物连接子的合成方法，其特征在于，将化合物6与双(4
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硝基苯基)碳酸酯反应后，经如下纯化步骤得到化合物1：打浆、硅胶柱层析、重结晶、再打浆；优选的是：打浆和再打浆选取的溶剂为甲基叔丁基醚，硅胶柱层析选取的流动相为二氯甲烷/甲醇＝15：1，重结晶选取的溶剂为DMF和甲基叔丁基醚；其中，化合物6的结构式为：化合物1的结构式为：2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将化合物5与6
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(马来酰亚胺基)己酸琥珀酰亚胺酯反应后，经如下纯化步骤得到化合物6：打浆、重结晶、再打浆；优选的是：打浆和再打浆选取的溶剂为甲基叔丁基醚，重结晶选取的溶剂为DMF和甲基叔丁基醚；其中，化合物5的结构式为：
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，将化合物4与二乙胺反应后，经如下纯化步骤得到化合物5：打浆；优选的是：打浆选取的溶剂为二氯甲烷；其中，化合物4的结构式为：4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将化合物3与对氨基苯甲醇、EEDQ反应后，经如下纯化步骤得到化合物4：打浆、重结晶、再打浆；优选的是：打浆和再打浆选取的溶剂为甲基叔丁基醚，重结晶选取的溶剂为DMF和甲基叔丁基醚；其中，化合物3的结构式为：5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，将化合物2与瓜氨酸反应后，经如下纯化步骤得到化合物3：
打浆；优选的是：打浆选取的溶剂为甲基叔丁基醚；其中，化合物2的结构式为：6.如权利要求1<...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢文博，杨柳，李艳杰，朱林，孟黎明，韩志旭，姜新，王雪，孙雪，卢东阳，黄晓光，
申请(专利权)人：吉林省博大伟业制药有限公司，
类型：发明
国别省市：