金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用，所述引物对命名为PF3

【技术实现步骤摘要】
金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，具体涉及金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]香菇菌株金香194是由申请人自行选育获得的新菌株。该菌株与现有的香菇菌株相比，具有耐碱能力强、抗霉菌能力好的特性，经过实验发现该菌株的菌丝生长的酸度范围为pH4
‑
11，最适宜pH为4
‑
8，耐碱性能力远高于现有推广栽培的香菇品种；该菌株在用石灰调节pH至9的培养料中菌丝生长旺盛，菌棒杂菌感染率低，菌棒成功率达97
‑
100％的优势，目前，香菇菌种的鉴定一般是从形态、性状和生理特性上进行鉴定，而香菇菌株易受种植环境以及人为主观因素的影响，导致香菇菌种鉴定并不准确。因此，研究出香菇菌株金香194的有效鉴别方法，对于该菌株的进一步遗传改良研究和生产上的推广栽培均具有重要意义。
[0003]本专利技术意在原有ISSR遗传差异分析的基础上，设计特异引物，建立了金香194的特异性分子标记，并利用该分子标记可以简单、快速、明了地鉴别该菌株。

技术实现思路

[0004]本专利技术克服了现有技术中以形态、性状和生理特性上进行鉴定香菇菌种，鉴定结果不稳定、不准确的技术问题，提供金香194菌株特异性分子标记引物、试剂盒及其应用。
[0005]为解决上述问题，本专利技术采取如下技术方案：
[0006]金香194菌株特异性分子标记引物对，所述引物对命名为PF3/>‑
R1；
[0007]其上游引物序列为:5
’‑
GGAGAGGGAGAGAGAAAACGA
‑3’
；
[0008]下游引物序列为:5
’‑
AGAGAGGGAAGAGGAGAAGAG
‑3’
；
[0009]所述金香194香菇(Lentinula edodes)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.40137，保藏日期为2022年04月24日。
[0010]本专利技术还包括一种试剂盒，所述试剂盒包含所述引物对。
[0011]一种利用所述引物对从多个香菇菌株中鉴别出香菇菌株金香194的方法，所述方法为：提取待鉴别香菇菌株的总DNA，利用所述引物对PF3
‑
R1进行PCR扩增，当扩增出345bp片段时即判定该菌株为香菇菌株金香194；所述香菇菌株金香194的保藏编号为：CGMCCNo.40137。
[0012]进一步的，所述PCR扩增的反应程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s、60℃复性30s、72℃延伸50s、循环25次，72℃补平7min，4℃保存；所述PCR扩增时采用的PCR反应体系以20μL计为：2
×
Es TaqMasterMix 10μL、ddH2O 7μl、10μmol/L上游引物1μl、10μmol/L下游引物1μl、待测香菇菌株基因组DNA1μL。
[0013]进一步的，所述引物对PF3
‑
R1扩增出特异性片段的核酸序列如序列表SEQ ID NO:
3所示。
[0014]本专利技术与现有技术相比较具有以下有益效果：本专利技术的引物对PF3
‑
R1特异性强，能够对香菇菌株金香194提取的DNA进行特异扩增，并能扩增出345bp片段，而对其他香菇菌株无扩增作用。利用引物对PF3
‑
R1，依照本申请的分子标记筛选鉴定方法可简便、快速、准确的筛选鉴定香菇菌株金香194，对香菇菌株金香194的市场推广有重要的意义。
【附图说明】
[0015]图1
‑
2为本专利技术金香194菌株与其他香菇菌株的ISSR遗传差异图；图中，Maker为DNA maker，泳道1
‑
15分别为：泳道1
‑
15的香菇品种分别为：508、香菇808、野香3号、野香4号、野香7号、七河2号、七河9号、庆科20、金香194、庆科212、昆明1号、申香17、灌香1号、香杂6
‑
1、香杂107
‑
2。图2采用的引物为XG
‑
ISSR9，图3采用的引物为XG
‑
ISSR15；
[0016]图3为引物对PF1
‑
R1、引物对PF1
‑
R3、引物对PF3
‑
R1、引物对PF3
‑
R3和引物对PF2
‑
R2对昆明1号、194、808和野香7号的扩增效果图；
[0017]图4
‑
5为引物对PF3
‑
R1对15个香菇品种的扩增效果图，图中，Maker为DNAmaker，图4的泳道1
‑
4分别为：香菇808、金香194、昆明1号和野香7号，图5的泳道1
‑
15分别为：508、香菇808、野香3号、野香4号、野香7号、七河2号、七河9号、庆科20、金香194、庆科212、昆明1号、申香17、灌香1号、香杂6
‑
1、香杂107
‑
2。
【具体实施方式】
[0018]下面结合实施例和试验对本专利技术作进一步说明。
[0019]实施例1：
[0020]采用ISSR引物(XG
‑
ISSR9：VHVGTGTGTGTGTGTGTGT和XG
‑
ISSR15：AGAGAGAGAGAGAGAGG)对表1的香菇品种进行PCR扩增，其中，PCR扩增反应体系为：(20μL)：2
×
Es TaqMasterMix(Dye)10μL，ddH2O 8μL，引物(10μmol/L)1μL，DNA模板1μL；
[0021]PCR反应程序为：95℃预变性5min，95℃变性30s、54℃复性45s、72℃延伸90s、循环35次，72℃补平7min，4℃保存。
[0022]其中，引物XG
‑
ISSR9扩增的香菇菌株PCR图谱如图1所示，引物XG
‑
ISSR15扩增的香菇菌株PCR图谱如图2所示；
[0023]图1
‑
2中,Marker为DNAmarker，泳道1
‑
15的香菇品种分别为：508、香菇808、野香3号、野香4号、野香7号、七河2号、七河9号、庆科20、金香194、庆科212、昆明1号、申香17、灌香1号、香杂6
‑
1、香杂107
‑
2。(菌株来源见表1)
[0024]对比图谱找出金香194的特异性条带。
[0025]回收引物XG
‑
ISSR15扩增图谱中金香194菌株的特异条带并测序，结果如下：
[0026]AG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.金香194菌株特异性分子标记引物对，其特征在于，所述引物对命名为PF3
‑
R1；其上游引物序列为:5
’‑
GGAGAGGGAGAGAGAAAACGA
‑3’
；下游引物序列为:5
’‑
AGAGAGGGAAGAGGAGAAGAG
‑3’
；所述金香194的保藏编号为：CGMCC No.40137。2.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含如权利要求1所述的引物对。3.一种利用权利要求1所述引物对从多个香菇菌株中鉴别出香菇菌株金香194的方法，其特征在于，所述方法为：提取待鉴别香菇菌株的总DNA，利用所述引物对PF3
‑
R1进行PCR扩增，当扩增出34...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴圣进，张雯龙，刘增亮，陈雪凤，蒋建明，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：