一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法，属于植物离体培养领域。所述方法包括以下步骤：取冬季休眠后至萌芽前的一年生梨树枝条离体培养，以抽出的5

【技术实现步骤摘要】
一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法


[0001]本专利技术涉及植物离体培养领域，特别是涉及一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法。

技术介绍

[0002]梨是蔷薇科苹果亚科或梨亚科梨属(Pyrus L.)多年生落叶果树，原产中国，因其适应性强，分布广，在全球80多个国家和地区都有种植，是世界性重要水果之一。梨的原种起源于第三纪的中国西部或西南山区，已知的梨属植物种有30个以上，其中我国原产的梨属植物有13个种，品种资源在3000份以上。
[0003]农业种质资源是保障国家粮食安全和重要农副产品有效供给的战略性资源，是农业科技原始创新与现代种业发展的物质基础。种质资源安全保存与品种创新和种业发展直接相关，目前我国果树种质资源保存以田间圃保存为主，而西方发达国家相继建成了由种质圃、超低温库、试管苗库、低温种子库、DNA库等组成的多元化完整保存体系。中国果树种质资源多元化保存水平亟待提高，果树种质资源的离体培养是试管苗库能否建立的关键环节。
[0004]目前通过离体培养可以获得不同梨品种的组培试管苗，比如
‘
莱阳茌梨
’
、
‘
锦丰
’
、
‘
早酥
’
、
‘
鸭梨
’
、
‘
秋白梨
’
、
‘
幸水
’
、
‘
新梨七号
’
、
‘
砀山酥梨
’
>、
‘
黄花梨
’
等品种都获得了离体试管苗，不同品种离体培养方法有不同，没有统一且高效的培养方法。梨的离体培养大多选用田间健壮植株上春季或秋季的萌发无病虫害幼嫩新梢为外植体。幼嫩新梢去除叶片清水清洗后再消毒处理，消毒一般采用70％～75％乙醇浸泡10～30s，无菌水冲洗3～5次，再用0.1％ HgCl2(升汞)消毒8～10min，最后用无菌水冲洗3～5次；或者2％～5％次氯酸钠浸泡8～15min，无菌水冲洗5～6次，再用0.1％ HgCl2消毒8～10min，无菌水冲洗3～5次。离体培养中外植体消毒大多使用升汞或次氯酸钠为主要消毒剂，升汞的杀菌效果极好，但是有剧毒且不易将残留的药剂除净，会给环境造成污染，消毒后离体培养的死亡率极高；使用次氯酸钙毒性较小但杀菌效果一般，离体培养易褐变污染，成活率低。因此，以梨幼嫩新梢茎段为外植体，采用升汞或次氯酸钠消毒获得的离体培养试管苗的方法效率不高。目前，缺少一种高效快速简单无毒且适用于不同品种资源的离体培养方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法，以解决上述现有技术存在的问题，通过外植体的选择、消毒方式的筛选和培养过程的优化，实现了高效、简单、无毒的获得梨种质资源离体试管苗的目的。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法，包括以下步骤：
[0008]以休眠后的一年生梨树枝条室内培养出的嫩稍为外植体，用75％乙醇浸泡消毒两次后，接种MS固体培养基光照培养，获取梨种质资源离体组培苗。
[0009]优选的是，所述梨树枝条室内培养出的嫩稍的方法为：将所述梨树枝条用1/10MS培养液培养，每5天更换一次所述1/10MS培养液，诱导培养出嫩稍；培养条件为：每天光照12h、光照强度为1500
‑
2100lx、温度为25
‑
27℃。
[0010]优选的是，所述嫩稍长至5
‑
10cm，展开叶片3
‑
5片，长出可见的节间2
‑
4个时，去除所述嫩稍上的叶片后作为外植体。
[0011]优选的是，消毒方法为：用75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3
‑
5次，再用75％乙醇浸泡30s，无菌水冲洗3
‑
5次。
[0012]优选的是，所述MS固体培养基包括以下浓度组分：MS培养基+30g/L蔗糖+5.5g/L琼脂。
[0013]优选的是，光照培养条件为：温度为25
‑
27℃，光照强度为2000lx和光照时间为16h/d。
[0014]本专利技术公开了以下技术效果：
[0015]本专利技术公开了一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法，采用休眠的梨枝条室内培养出的嫩稍为外植体，只用75％乙醇消毒两次，每次30s。消毒处理简单便捷无毒副作用，外植体不易褐变，污染率低，6
‑
9周可高效获得不同梨种质资源的离体组培苗，离体培养组培苗成活率最高可达100％。本专利技术为梨种质资源试管苗库的建立提供技术支撑，为梨遗传改良和无病毒苗繁育奠定基础。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1为一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法不同步骤的示意图；A：外植体诱导；B：外植体采集；C：外植体消毒；D：外植体培养；E：获得离体组培苗。
具体实施方式
[0018]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0019]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0020]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0021]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本申请说明书和实施例仅是示例性的。
[0022]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0023]实施例1
[0024]一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法，包括以下步骤：
[0025](1)外植体诱导(图1中A)...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高效无毒梨种质资源离体培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：以休眠后的一年生梨树枝条室内培养出的嫩稍为外植体，用75％乙醇浸泡消毒两次后，接种MS固体培养基光照培养，获取梨种质资源离体组培苗。2.如权利要求1所述的高效无毒梨种质资源离体培养的方法，其特征在于，所述梨树枝条室内培养出的嫩稍的方法为：将所述梨树枝条用1/10MS培养液培养，每5天更换一次所述1/10MS培养液，诱导培养出嫩稍；培养条件为：每天光照12h、光照强度为1500
‑
2100lx、温度为25
‑
27℃。3.如权利要求2所述的高效无毒梨种质资源离体培养的方法，其特征在于，所述嫩稍长至5
‑
10cm，展开叶片3
...

【专利技术属性】
技术研发人员：范净，胡红菊，陈启亮，杨晓平，张靖国，杜威，董秀娟，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院果树茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：