嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila改良培养基制造技术

本发明专利技术属于细菌培养基技术领域，具体涉及嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila改良培养基。本发明专利技术公开的Akkermansiamuciniphila改良培养基包括酵母提取物、EGCG、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、葡萄糖、N

【技术实现步骤摘要】
嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansia muciniphila改良培养基


[0001]本专利技术属于细菌培养基
，具体涉及嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansia muciniphila改良培养基。

技术介绍

[0002]嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)是一种肠道严格厌氧细菌，属于疣微菌门，G
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，为非运动的、不产芽孢的椭圆形菌，菌体长度为0.6
‑
1μm，能够在人类及许多动物胃肠道粘液层中定居，被广泛报道与肥胖、炎症性肠炎、高血压、动脉粥样硬化等疾病相关，有望成为下一代益生菌药物。然而，嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)的体外培养并不容易。2004年，有学者使用含有猪胃黏蛋白成分的培养基首次实现了嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)的体外培养。此后，更是发现嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)能够在多种富集培养基中生长，例如：哥伦比亚培养基(Columbia Broth)【蛋白胨、玉米淀粉、氯化钠、脱纤维羊血】、脑心浸液培养基(Brain Heart Infusion)【脑心浸粉、D
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葡萄糖、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钠】等。然而，由于这些可用于体外培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)的培养基都含有动物来源成分，这些成分可能含有病毒、细菌，或过敏源、致病因子等，会使嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)后续作为益生菌的应用受到制约。为此，有研究提出了一种可以体外培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)的非来源于动物产品的培养基，该培养基的主要成分包括大豆蛋白胨、葡萄糖和氨基酸等。但是这种培养基会使菌体的形态发生变化，包括形状不均匀、菌体变长，甚至出现“三脚架”形状等，这可能会影响后续的菌株活力。
[0003]因此，有必要开发一种不包含动物源成分的培养基，不具有过敏源，能有效保持嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)体外的优异生长，同时不改变菌体的正常形态，适合于嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)后续的大规模发酵培养，使其能够作为下一代益生菌被广泛开发使用。

技术实现思路

[0004]为了克服上述现有技术的不足，本专利技术提出了一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansia muciniphila改良培养基，该培养基不包含动物源成分，既能保持嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)体外的优异生长，又不改变菌体正常形态，同时适用于大体积培养嗜黏蛋白阿克曼氏菌(A.muciniphila)。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0006]本专利技术提供了一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansia muciniphila改良培养基，所述培养基包括酵母提取物、EGCG、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、葡萄糖、N
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乙酰
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葡糖胺、N
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乙酰
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D
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半乳糖胺、尿素、苏氨酸、脯氨酸、L
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半胱氨酸盐酸盐、丙酮酸钠、焦磷酸铁、维生素K3。
[0007]本专利技术的改良培养基所包含的组分均为非动物来源成分，安全性高，且仅添加
0.5g/L焦磷酸铁(嗜黏蛋白阿克曼氏菌基因组中有15.9％毒力基因被注释到与铁离子相关)和5mg/L维生素K3，没有使用其他元素及维生素。其中，酵母提取物在培养基中添加量达到30g/L，能保持嗜黏蛋白阿克曼氏菌A.muciniphila体外的优异生长；使用尿素替代蛋白胨类成分，可以在保持嗜黏蛋白阿克曼氏菌A.muciniphila的体外优异生长的同时，也维持菌体的正常形态；添加绿茶提取物EGCG可显著提高嗜黏蛋白阿克曼氏菌A.muciniphila的体外生长速度和生长量。即在改良培养基中的酵母提取物、N
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乙酰
‑
D
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半乳糖胺、尿素和EGCG的协同作用下，能显著增加嗜黏蛋白阿克曼氏菌A.muciniphila的体外生长速度和生长量。
[0008]优选地，所述培养基包括25
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35g/L酵母提取物，0.4
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0.6g/L EGCG，0.4
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0.6g/L磷酸二氢钾，1
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2g/L磷酸氢二钠，0.5
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1.5g/L氯化钠，4
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5g/L葡萄糖，5
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6g/L N
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乙酰
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葡糖胺，20
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30g/L N
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乙酰
‑
D
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半乳糖胺，7
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15g/L尿素，3
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5g/L苏氨酸，3
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5g/L脯氨酸，4
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6mg/L L
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半胱氨酸盐酸盐，0.5
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1.5g/L丙酮酸钠，0.4
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0.6g/L焦磷酸铁，4
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6mg/L维生素K3。
[0009]更优选地，所述培养基包括30g/L酵母提取物，0.5g/L EGCG，0.5g/L磷酸二氢钾，1.5g/L磷酸氢二钠，1.0g/L氯化钠，4.5g/L葡萄糖，5.53g/L N
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乙酰
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葡糖胺，25g/L N
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乙酰
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D
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半乳糖胺，10g/L尿素，4g/L苏氨酸，4g/L脯氨酸，5mg/L L
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半胱氨酸盐酸盐，1g/L丙酮酸钠，0.5g/L焦磷酸铁，5mg/L维生素K3。
[0010]优选地，所述培养基的pH为6
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7。更优选地，所述培养基的pH为6.5。
[0011]本专利技术还提供了另一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansia muciniphila改良培养基，所述培养基包括酵母提取物、EGCG、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、葡萄糖、N
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乙酰
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葡糖胺、苏氨酸、脯氨酸、L
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半胱氨酸盐酸盐、丙酮酸钠、焦磷酸铁、维生素K3。
[0012]在上述第一种改良培养基的基础上，虽然不添加N
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乙酰
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D
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半乳糖胺和尿素会导致嗜黏蛋白阿克曼氏菌A.muciniphila体外生长的下降，但酵母提取物和EGCG相结合仍可以促进嗜黏蛋白阿克曼氏菌A.muciniphila在体外大体积培养下的生长，使其维持优异的生长速度和生长量，其生长速度和生长量依然优于现有的培养基。而且，不添加N
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乙酰
‑
D
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半乳糖胺和尿素还可以大大降低培养基的成本，更有利于工业应用。
[0013]优选地，所述培养基包括25
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila改良培养基，其特征在于，所述培养基包括酵母提取物、EGCG、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、葡萄糖、N
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乙酰
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葡糖胺、N
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乙酰
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D
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半乳糖胺、尿素、苏氨酸、脯氨酸、L
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半胱氨酸盐酸盐、丙酮酸钠、焦磷酸铁、维生素K3。2.根据权利要求1所述的一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila改良培养基，其特征在于，所述培养基包括25
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35g/L酵母提取物，0.4
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0.6g/L EGCG，0.4
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0.6g/L磷酸二氢钾，1
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2g/L磷酸氢二钠，0.5
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1.5g/L氯化钠，4
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5g/L葡萄糖，5
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6g/L N
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乙酰
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葡糖胺，20
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30g/L N
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乙酰
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D
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半乳糖胺，7
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15g/L尿素，3
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5g/L苏氨酸，3
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5g/L脯氨酸，4
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6mg/L L
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半胱氨酸盐酸盐，0.5
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1.5g/L丙酮酸钠，0.4
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0.6g/L焦磷酸铁，4
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6mg/L维生素K3。3.根据权利要求2所述的一种嗜黏蛋白阿克曼氏菌Akkermansiamuciniphila改良培养基，其特征在于，所述培养基包括30g/L酵母提取物，0.5g/L EGCG，0.5g/L磷酸二氢钾，1.5g/L磷酸氢二钠，1.0g/L氯化钠，4.5g/L葡萄糖，5.53g/L N
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乙酰
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葡糖胺，25g/L N
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乙酰
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D
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半乳糖胺，10g/L尿素，4g/L苏氨酸，4g/L脯氨酸，5mg/L L
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半胱氨酸盐酸盐，1g/L丙酮酸钠，0.5g/L焦磷酸铁，5mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆勇军，葛振煌，许敏青，
申请(专利权)人：陆勇军，
类型：发明
国别省市：