本发明专利技术属于食品检测方法领域。样品经水与乙腈提取,冷冻后取上层,用磁固相萃取辣椒中的真菌毒素。通过选择吸附剂(Fe3O4@MWCNTs
【技术实现步骤摘要】
一种冷冻液液萃取联合Fe3O4@MWCNTs
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NH2检测辣椒中多种真菌毒素的方法
[0001]本专利技术涉及一种冷冻液液萃取联合Fe3O4@MWCNTs
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NH2检测辣椒中多种真菌毒素的方法,属于食品检测方法领域。
技术介绍
[0002]真菌毒素是一组天然存在的有毒化学物质,由不同的真菌物种产生,主要真菌毒素,如黄曲霉毒素(AFB1、AFB2、AFG1和AFG2)、赭曲霉毒素A(OTA)、T
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2毒素(T
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2)与HT
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2毒素(HT
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2)可能会对健康造成不良影响,如致癌、致突变、致畸、细胞毒性、神经毒性、肾毒性等作用,根据国际癌症研究机构的数据,黄曲霉毒素属于第1组(对人类致癌),OTA属于2B组(可能对人类致癌),T
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2属于第3组(未按其对人类的致癌性进行分类)。这些真菌毒素是高度稳定和耐热的代谢物,不受传统烹饪方法的影响,这对人类的食品安全问题提出了巨大的挑战。
[0003]在生长、收获、储存和消费过程中受到异常气候、储藏环境和运输环境等条件的影响会造成真菌污染,在适宜的条件下,辣椒上的某些真菌会产生真菌毒素。根据我国及国际其他组织(如欧盟委员会)规定,香料中AFB1和总AFS(AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的总和)的最高允许限量分别为5μg/kg和10μg/kg。此外,香料中OTA的最高允许限量为15μg/kg。辣椒在收获前的生长阶段和收获后的贮运过程中,容易受到真菌毒素污染。而辣椒作为香辛料的一种,其富含油脂、色素等物质,在检测过程中造成很强的基质干扰效应,造成辣椒真菌毒素检测困难。
[0004]样品前处理技术是复杂基质样品中真菌毒素检测的必要步骤,起到了浓缩和提纯的作用,从而减少基质效应和对目标组分的干扰。与常规液液萃取技术相比,冷冻诱导液液萃取法操作简单,不需要额外添加试剂诱导分层,可以在较少的有机溶剂消耗下实现真菌毒素的提取和净化。
[0005]并且,萃取材料的选择直接关系到检测灵敏和准确度。MWCNTs
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NH2是目前常用于痕量分析的材料,磁性Fe3O4利于重复利用。
[0006]现有技术中,常常见于辣椒某种真菌毒素的检测,多种辣椒真菌毒素同时检测的方法少,效能低。对于辣椒多种真菌毒素检测的方法,检测限不灵敏,定量限不低,回收率也不高。一般能同时检测到4
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6种辣椒真菌毒素。检测种类多的方法,LOD仅为73μg/kg,线性仅为5
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600μg/kg(参见Ok,Chung,Lee,&Chun,2015;Dhanshetty,Shinde,Goon,Oulkar,Elliott,&Banerjee,2022;Pantano et al.,2021;Yogendrarajah,Van Poucke,De Meulenaer,&De Saeger,2013.)。
[0007]因此,建立一种准确、简便的辣椒真菌毒素检测前处理方法对预防和控制辣椒中的真菌毒素污染具有重要意义,方法具有广阔的市场推广应用前景。本专利技术提供的方法抑制了样品基质影响,很大限度减少辣椒复杂基质对真菌毒素检测的干扰,实现了同时对辣椒中10种真菌毒素的检测,提高了实验的效率,具有操作方便、净化效果好、高通量检测、经
济环保的特点。
技术实现思路
[0008]为了解决上述问题,本专利技术提供一种一种冷冻液液萃取联合Fe3O4@MWCNTs
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NH2检测辣椒中多种真菌毒素的方法,包括基于冷冻诱导液液萃取
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磁固相萃取
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超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法检测辣椒中多种真菌毒素的方法,本专利技术提供的测定方法方便、简单、灵敏,使辣椒中的各种真菌毒素能有效提取,净化,分离,检测,实验的回收率、检出限均满足实验要求,实现了对辣椒中10种真菌毒素的高通量检测。
[0009]首先,本专利技术是提供一种制备Fe3O4@MWCNTs
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NH2的方法,包括如下步骤:
[0010](1)将FeCl2·
4H2O、FeCl3·
6H2O、MWCNTs
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NH2加入到超纯水中混合均匀,得到混合溶液;其中FeCl3·
6H2O、FeCl2·
4H2O、MWCNTs
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NH2的质量比为10
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12:4
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5:1;控制反应条件生成Fe3O4@MWCNTs
‑
NH2。
[0011](2)反应结束后将沉淀分离出来,洗涤、干燥,得到Fe3O4@MWCNTs
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NH2。
[0012]其中,步骤(1)的反应原理为:向分散有MWCNTs
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NH2的水溶液中加入Fe
2+
和Fe
3+
,用氢氧化钠或浓氨水作沉淀剂,将混合液中的Fe
2+
和Fe
3+
共同沉淀出来,沉淀转化为Fe3O4,然后Fe3O4在MWCNTs表面成核、生长,形成氧化铁纳米颗粒。
[0013]具体的,步骤(1)中Fe3O4@MWCNTs
‑
NH2的具体制备方法为:
[0014]将25mg MWCNTs
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NH2加入到25mL水中,之后加入107mg FeCl2·
4H2O和291mg FeCl3·
6H2O,搅拌2
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3min,再加入2mL氢氧化铵,通过恒温磁力搅拌器让溶液在85℃下剧烈搅拌90min,整个实验在氮气保护中进行(除氧)。
[0015]具体的,步骤(2)中所述的分离是通过外加磁铁进行分离。
[0016]具体的,步骤(2)中所述的洗涤是用超纯水洗涤6次。
[0017]具体的,步骤(2)中所述的干燥是冷冻(
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60℃)干燥24h。
[0018]其次,本专利技术目的是制备得到Fe3O4@MWCNTs
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NH2。
[0019]最后,一种基于本专利技术所述的Fe3O4@MWCNTs
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NH2检测辣椒中多种真菌毒素的方法,包括如下步骤:
[0020](1)在辣椒粉中加入提取液进行提取;之后离心,将提取液冷冻1h,取上层溶液,得到预处理的辣椒萃取液。
[0021](2)在Fe3O4@MWCNTs
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NH2中加入步骤(1)得到的预处理的萃取液,混合均匀进行吸附,吸附完成后分离得到沉淀,之后在沉淀中加入解吸附溶剂进行洗脱,收集洗脱液,氮气吹干,残留物复溶并过滤膜,得到待测样品。
[0022](3)采用超高效液相色谱
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串联四极杆飞行时间质谱仪对待测样品进行检测,得到多种毒素的吸收峰面积;之后根据标准曲线得到辣椒样品本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种制备Fe3O4@MWCNTs
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NH2的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)将FeCl2·
4H2O、FeCl3·
6H2O、MWCNTs
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NH2加入到水中混合均匀,用氢氧化钠或浓氨水作沉淀剂,得到混合溶液;控制反应条件生成Fe3O4@MWCNTs
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NH2。(2)反应结束后将沉淀分离出来,洗涤、干燥,得到Fe3O4@MWCNTs
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NH2。2.权利要求1所述的方法制备得到的Fe3O4@MWCNTs
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NH2。3.一种基于权利要求2所述的Fe3O4@MWCNTs
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NH2检测辣椒中多种真菌毒素的方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)在辣椒粉中加入提取液进行提取;之后离心,将提取液冷冻1h,取上层溶液,得到预处理的辣椒萃取液。(2)在Fe3O4@MWCNTs
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NH2中加入步骤(1)得到的预处理的萃取液,混合均匀进行吸附,吸附完成后分离得到沉淀,之后在沉淀中加入解吸附溶剂进行洗脱,收集洗脱液,氮气吹干,残留物复溶并过滤膜,得到待测样品。(3)采用超高效液相色谱
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串联四极杆飞行时间质谱仪对待测样品进行检测,得到多种毒素...
【专利技术属性】
技术研发人员:陈科伟,周凤兰,蔡甜,阚建全,
申请(专利权)人:西南大学,
类型:发明
国别省市:
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