【技术实现步骤摘要】
一种以工业大麻悬浮细胞制备大麻二酚的方法
[0001]本专利技术涉及一种制备大麻二酚的方法，特别涉及一种以工业大麻悬浮细胞制备大麻二酚的方法。本专利技术属于生物
技术介绍
[0002]大麻素是大麻特有的次生代谢产物，包括四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)等，其中THC具有致幻成瘾作用，但其同分异构体CBD无致幻成瘾性，且具有抗惊厥痉挛、癫痫、焦虑、抗菌抗炎、抗麻醉和神经系统保护等药理功效。不同品种之间THC含量差别很大，在国际上把THC含量低于0.3％的大麻称为工业大麻。
[0003]工业大麻作为在医药、食品饮料、化妆品、医疗保健、纤维纺织等多个领域有广泛应用前景的战略新兴产业，越来越受到国内市场和投资者的关注，也成为黑龙江省未来重点发展产业之一。由于种质资源等原因，限制了工业大麻产业的发展。国内主要种植的工业大麻中大麻二酚(CBD)含量在0.9％以内，而美国高含量CBD品种已接近16％。大麻品种的CBD含量较低，意味着要付出更多的种植、加工和污水处理成本。另外，从工业大麻中提取的CBD因受到气候、季...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种以工业大麻悬浮细胞制备大麻二酚的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)大麻细胞的制备S1：选取工业大麻开花期的上部叶片，自来水冲洗备用；S2：将S1准备好的工业大麻叶片转入超净台中，用无菌水冲洗3
‑
5次，无菌纸吸干表面残留水分备用；S3：将S2准备好的大麻叶片用无菌水配制的75％v/v酒精消毒20
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40s捞出，无菌水清洗一次，无菌纸吸干表面水分备用；S4：将S3准备好的大麻叶片用0.1％v/v升汞溶液消毒4
‑
5min，再用无菌水冲洗3
‑
5次，去掉残留升汞溶液，无菌纸吸干表面残留水分备用；S5：将S4准备好的大麻叶片用剪刀剪成0.1
‑
0.3mm宽度的碎片，转移入三角瓶中备用；S6：按1g叶片加入15mL混合酶液的比例，向S5中的三角瓶中加入混合酶液，所述的混合酶液中含有0.5
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1.5％w/v离析酶与0.5
‑
1.0％w/v甘露醇，封口膜封口备用；S7：将S6中的三角瓶置于恒温振荡摇床中26℃
‑
30℃，100
‑
150rpm/min避光酶解处理；S8：酶解处理1
‑
9h后，将三角瓶静置5
‑
7min，从上层吸取500ul细胞悬液接入培养基中，26℃
‑
30℃恒温震荡摇床中，100
‑
150rpm黑暗条件下进行初代培养；(2)悬浮细胞的培养S1：从初代培养的细胞悬液中取样50ul，稀释后镜检，选取生长条件较好的悬浮细胞，接种4
‑6×
106个细胞于100ml培养基中，备用；S2：将(2)S1中接种的细胞悬液置于恒温振荡摇床中，26℃
‑
30℃，100
‑
150rpm暗培养；S3：继代培养至7d时，重复(2)S1、S2步骤，获得的工业大麻悬浮细胞用于后续实验；(3)赤霉素诱导悬浮细胞合成大麻二酚S1：在250mL三角瓶中加入100mL培养基，pH调至5.8，共3瓶，灭菌备用；S2：选取稳定培养4
‑
6代生长状态良好的工业大麻悬浮细胞，向(3)S1准备好的每瓶培养基中接入1.5
×
107个工业大麻悬浮细胞，置于恒温振荡摇床中26℃
‑
30℃，100
‑
150rpm暗培养；S3：培养至6d时加入赤霉素使其浓度达到10
‑
200mg/L，进行诱导，12d
‑
18d时对细胞进行悬浮细胞液进行离心，4℃低温条件下8000g离心3min，离心完所有细胞悬液得到细胞备用；S4：将(3)S3中收集的细胞用蒸馏水重悬，用滤纸过滤出细胞备用；S5：将(3)S4收集的细胞放置鼓风干燥机中130℃高温处理30min，60℃恒温过夜；S6：将(3)S5中干燥过的细胞放入研钵中研磨成粉，电子天平称量细胞粉末重量，转移入干燥离心管中备用；S7：按0.2g细胞粉末加入2mL 70％甲醇的比例，向S6中准备的细胞粉末中加入70％甲醇，置于4℃环境中备用；S8：将S7准备的细胞用超声波破碎仪进行破碎处理...
【专利技术属性】
技术研发人员：李珊珊，杨镇才，王丹，王志刚，翟莹，钟胐杲，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：
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