载药的胞外囊泡在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了载药的胞外囊泡在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用，涉及生物医药技术领域。载药的胞外囊泡在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用，所述药物的成分包含能够与Trim21基因表达的蛋白竞争性结合底物的蛋白片段。本发明专利技术体内外实验均证明，利用mEVs/TRIM21

【技术实现步骤摘要】
载药的胞外囊泡在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及载药的胞外囊泡在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用。

技术介绍

[0002]胞外囊泡(Extracellular vesicles，EVs)是活细胞分泌的具有脂质双分子结构的小囊泡，可分为外泌体、核外颗粒、凋亡小体和癌小体4个亚群。作为一种天然内源性药物载体，它有其独特的优势：直径为纳米级别，可以穿透包括血脑屏障在内的多种屏障；具有复杂的蛋白质和磷脂双层结构，可以更好地保护药物不被身体清除；免疫原性低，作为载体携带药物或药用蛋白进行治疗时不会引起宿主的免疫反应。牛奶作为一种天然，营养丰富的饮品，含有丰富的外泌体，与我们的生活联系密切。根据文献报道，将牛奶来源的外泌体(Milk extracellular vesicles，mEVs)给小鼠灌胃处理后，能靶向全身多种器官，如肝脏、脾脏和肺等。病毒感染可导致全身多种器官受损，而牛奶来源的外泌体可作为载体携带药物或小分子调节全身各处器官中免疫细胞如巨噬细胞参与介导的组织免疫微环境，用于靶向治疗或缓解病毒感染相关炎症疾病等。
[0003]病毒感染是严重威胁人类健康和生命的全球性问题。近些年爆发的大型病毒感染疾病多是由RNA病毒感染引起的，比如常见的流感病毒。由于RNA病毒本身突变率较高，导致其疫苗研发困难，给疾病的预防带来了很大阻力。
[0004]抗体和免疫血清被长时间用于治疗病原体感染。例如，在1890年代马抗血清被用于治疗破伤风和白喉。但是，抗血清被人免疫系统视为外源性的，其通过产生对抗其的抗体进行反应，特别是在重复剂量时。在20th世纪的大多数时期，动物抗体的副作用促进了来自供体的人抗血清的使用，这些供体是疾病的恢复者，典型地用于呼吸道和B型肝炎感染的预防。在由于毒性的问题而使抗体疗法的普及降低之后，人源化和人抗体消除了这些问题，并导致这些治疗方法的恢复。参见Casadevall等人，NatureReviews Microbiology2，695
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703(2004九月)用于回顾。使用抗体疗法所靶向的疾病包括炭疽、百日咳、咳嗽、破伤风、肉毒中毒(Botulism)、隐球菌病、隐孢子虫病、肠病毒的胃肠道感染、链球菌群感染、坏死性筋膜炎、B型肝炎、麻疹、肺结核、脑膜炎、再生障碍性贫血、狂犬病、RSV感染、肺炎、带状疱疹、水痘和VZV引起的肺炎、和天花。虽然有这些发展，但是，仅仅当没有其它适合的疗法存在时才考虑抗体疗法，其需要大剂量抗体并产生不可预期的结果。
[0005]而病毒感染是一个传播性高、传播速度快、且并发症多的过程。因此，寻找一种安全有效的策略快速缓解病毒感染引发的炎症疾病是当下治疗病毒感染相关疾病的探究热点之一。

技术实现思路

[0006]申请人研究发现TRIM21分子可抑制抗病毒感染功能蛋白的表达，从而促进病毒的
免疫逃逸。利用牛奶来源的外泌体装载可与TRIM21竞争性结合底物蛋白的TRIM21蛋白片段，可以通过调节肺组织及肝组织巨噬细胞中抗病毒感染功能蛋白的表达，达到抑制病毒感染的效果。
[0007]本专利技术提供了载药的胞外囊泡在制备治疗病毒感染相关指标的药物中的应用，目的是寻找一种安全有效的策略来缓解病毒感染相关疾病。
[0008]具体的技术方案如下：
[0009]本专利技术提供了Trim21基因或表达的蛋白作为靶点在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用。
[0010]优选的，所述病毒为VSV病毒、H1N1病毒、SeV病毒或RSV病毒。
[0011]病毒感染炎症的指标为各组织病理切片、血清或组织中病毒含量、或者是血清或组织中干扰素及各种炎症因子含量。
[0012]本专利技术还提供了一种用于治疗病毒感染引起的炎症的药物，成分包含能够与Trim21基因表达的蛋白竞争性结合底物的蛋白片段。
[0013]优选的，所述蛋白片段为缺失RING结构域的TRIM21蛋白。
[0014]人TRIM21蛋白编码基因的核苷酸序列的GenBank号：NC_000011.10。
[0015]本专利技术还提供了一种荷载药物的胞外囊泡，所述药物为所述用于治疗病毒感染引起的炎症的药物。
[0016]优选的，用于荷载药物的胞外囊泡为外泌体、凋亡小体、癌小体或核外颗粒。
[0017]具体的，用于荷载药物的胞外囊泡来源于人或其他哺乳动物的乳汁、血液、唾液、尿液或脑脊液。
[0018]本专利技术还提供了所述荷载药物的胞外囊泡在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用。
[0019]优选的，所述病毒为VSV病毒、H1N1病毒、SeV病毒或RSV病毒。
[0020]本专利技术还提供了一种用于治疗病毒感染引起的炎症的药物，成分包含所述荷载药物的胞外囊泡。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术体内外实验均证明，利用mEVs/TRIM21
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ΔRING可以实现肝脏、肺、肾组织中巨噬细胞的精准靶向，通过与TRIM21竞争性结合底物蛋白缓解病毒感染引发的炎症疾病、抑制病毒感染。
附图说明
[0023]图1为荷载TRIM21
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ΔRING的牛奶来源外泌体(mEVs/TRIM21
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ΔRING)的制备和鉴定结果图；其中A为电镜检测外泌体形态图，B为NTA粒径分析外泌体颗粒大小图。
[0024]图2为荷载TRIM21
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ΔRING的牛奶来源外泌体(mEVs/TRIM21
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ΔRING)的制备和鉴定结果图；A为Western Blot检测牛奶外泌体经典标志物图，B为流式细胞术检测牛奶外泌体荷载TRIM21
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ΔRING的效率图；“ns”表示无统计学意义，“***”表示P＜0.001。
[0025]图3为mEVs/TRIM21
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ΔRING的体外靶向性功能验证结果图；其中A为Western Blot检测巨噬细胞TRIM21和UBE2M之间的相互作用图；B为Western Blot检测巨噬细胞UBE2M的K48位泛素化修饰图；C为Western Blot检测巨噬细胞蛋白UBE2M的表达图。
[0026]图4为mEVs的体内分布验证结果图；A为小动物成像分析仪检测mEVs灌胃后在小鼠体内各个脏器中的分布图；B为流式细胞术分析mEVs灌胃后在小鼠血液中单核细胞对mEVs的摄取情况图。
[0027]图5为HE染色检测心、肝、脾、肺、肾的组织形态变化图。
[0028]图6为体内肝脏和肺脏巨噬细胞中UBE2M以及TRIM21
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ΔRING的表达分布图；其中A为免疫荧光检测肝脏巨噬细胞中UBE2M以及TRIM21
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ΔRING的表达分布图；B为免疫荧光检测肺脏巨噬细胞中UBE2M以及TRIM21
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ΔRING的表达分布图；C为分析巨噬细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.Trim21基因或表达的蛋白作为靶点在制备治疗病毒感染引起的炎症的药物中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述病毒为VSV病毒、H1N1病毒、SeV病毒或RSV病毒。3.一种用于治疗病毒感染引起的炎症的药物，其特征在于，成分包含能够与Trim21基因表达的蛋白竞争性结合底物的蛋白片段。4.如权利要求3所述用于治疗病毒感染引起的炎症的药物，其特征在于，所述蛋白片段为缺失RING结构域的TRIM21蛋白。5.一种荷载药物的胞外囊泡，其特征在于，所述药物为权利要求3或4所述用于治疗病毒感染引起的炎症的药物。6.如权利要求5所述荷载药物的胞外囊泡，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡志坚，王建莉，孔祥辉，卢信良，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：