一种可提高作物赤霉素含量的方法技术

本发明专利技术提供一种可提高作物赤霉素含量的方法，主要步骤为在培养基中添加蚯蚓提取液配制成改良型巨大芽孢杆菌菌悬液，然后将改良型巨大芽孢杆菌菌悬液接种于作物上。本发明专利技术不外源添加赤霉素，仅通过巨大芽孢杆菌及蚯蚓提取液的互作效应，诱导作物体内赤霉素合成，从而提高作物赤霉素含量。提高作物赤霉素含量。

【技术实现步骤摘要】
一种可提高作物赤霉素含量的方法


[0001]本专利技术涉及植物生长调节剂
，具体涉及一种可提高作物赤霉素含量的方法。

技术介绍

[0002]赤霉素(Gibberellins，GA)是一种常见的植物生长调节剂，其化学结构属于二萜类的化合物。赤霉素在高等植物、细菌以及真菌中广泛存在，多分布于根尖、种子和嫩叶等生长旺盛的部位，该部位赤霉素含量远高于营养器官。赤霉素对植物的细胞分裂与伸长有促进作用，是调控植物生长和发育的一个重要激素，具有多种调节功能，目前已广泛应用于农业生产领域。尤其在促进作物种子萌发和根茎叶生长，有效调控养分吸收，缩短作物生长周期等方面发挥着重要作用。
[0003]目前，农业生产上赤霉素多作为外源喷施，以达到调控作物生长发育的目的。而关于如何提高作物内源赤霉素含量的研究鲜见报道。

技术实现思路

[0004]鉴于现有技术的不足，本专利技术提供一种可提高作物赤霉素含量的方法。
[0005]本专利技术方案包括以下主要内容：
[0006]一种可提高作物赤霉素含量的方法在培养基中添加蚯蚓提取液配制成改良型巨大芽孢杆菌菌悬液，然后将改良型巨大芽孢杆菌菌悬液接种于作物上。
[0007]优选的，蚯蚓提取液的提取步骤包括：
[0008](1)将蚯蚓饥饿培养6
‑
8小时；
[0009](2)将蚯蚓放入水中，之后依次加入木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和微生物产酸性蛋白酶，调节pH，常温发酵至少24小时，得到蚯蚓粗提液；
[0010](3)将获得的蚯蚓粗提液离心，取上清液，之后依次加入甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸，搅拌均匀，即为蚯蚓提取液。
[0011]优选的，木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和酸性蛋白酶的质量比为1:1:1.5
‑
2，且添加比例为总物料质量的0.8
‑
1.2％。
[0012]优选的，甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸质量比为1:1:1:1.5
‑
2.5，且添加比例为游离氨基酸总质量的40
‑
50％。
[0013]优选的，所述蚯蚓为以牛粪为食的赤子爱胜蚓一代繁殖后的蚯蚓。
[0014]优选的，蚯蚓提取液的提取步骤包括：
[0015](1)将蚯蚓按每平方米5公斤的密度投放入盒中，调节室内温度23℃，饥饿培养6小时，之后将蚯蚓取出；
[0016](2)将洗干净的蚯蚓放入去离子水中，蚯蚓与去离子水的质量比为2.5:1，之后依次加入质量比为1:1:1.5
‑
2的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、微生物产酸性蛋白酶，蛋白酶添加比例为总物料质量的0.8
‑
1.2％，调节pH值至7，常温发酵24小时，期间每隔8小时搅拌一次，
得到蚯蚓粗提液；
[0017](3)将获得的蚯蚓粗提液放入离心机中，以转速2000转/分离心10分钟，取上清液；之后依次加入质量比为1:1:1:1.5
‑
2.5的甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸，确保蚯蚓提取液中甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸总量占游离氨基酸总质量的40
‑
50％，搅拌均匀，即为蚯蚓提取液。
[0018]优选的，所述改良型巨大芽孢杆菌菌悬液的配制步骤包括：
[0019](1)在无菌条件下，将巨大芽孢杆菌接种至LB培养基上，28
‑
30℃下培养；之后挑取单菌落接种至LB液体培养基中，28
‑
30℃，200
‑
220r/min下振荡培养至少24h，镜检，确保菌悬液浓度大于1
×
109cfu/ml，即得菌悬液；
[0020](2)在菌悬液中添加蚯蚓提取液，添加比例为培养基总量的1
‑
2％，搅拌均匀，放置恒温培养箱中，28
‑
30℃培养至少8小时，镜检，确保菌悬液浓度大于1
×
108cfu/ml，即为改良型巨大芽孢杆菌菌悬液。
[0021]优选的，所述改良型巨大芽孢杆菌菌悬液接种时期分为两次，第一次于作物播种时接种，在作物出芽后14
‑
16天，接种第二次。
[0022]优选的，所述作物包括白菜。
[0023]优选的，所述蚯蚓为以牛粪为食的赤子爱胜蚓一代繁殖后的蚯蚓。
[0024]优选的，所述LB培养基配制步骤如下：在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂粉15g，调节pH到7.0，定容至1L。121℃，30min高压灭菌即可。
[0025]所述巨大芽孢杆菌可以采用常规方法自行分离获得，也可以选择市售产品。本专利技术对于巨大芽孢杆菌的来源无特别要求。本专利技术实施例中选择湖北启明生物工程有限公司所售巨大芽孢杆菌。
[0026]本专利技术所取得的有益效果：
[0027]本专利技术不外源添加赤霉素，仅通过巨大芽孢杆菌及蚯蚓提取液的互作效应，诱导作物体内赤霉素合成，从而提高作物赤霉素含量15.41
‑
38.10％。此外，本专利技术蚯蚓提取液制备过程中添加特定比例甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸，可进一步提高作物赤霉素含量。
[0028]本专利技术可明显提高作物的赤霉素含量，可为赤霉素的提取提供大量原材料。
[0029]本专利技术方法安全、可靠，且容易操作。
具体实施方式
[0030]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0031]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0032]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0033]本专利技术实施例中所述酸性蛋白酶为水解酶类，由黑曲霉等微生物经发酵精制提炼而成，购买于广东丰盛生物。
[0034]实施例1
[0035]一种可提高作物赤霉素含量的方法，在培养基中添加蚯蚓提取液配制成改良型巨大芽孢杆菌菌悬液，于作物播种时接种第一次，在作物出芽后14天接种第二次，两次接种量均为5ml/株。
[0036]蚯蚓提取液提取步骤：
[0037](1)选用以牛粪为食的赤子爱胜蚓一代繁殖后的蚯蚓作为试验材料。将蚯蚓按每平方米5公斤的密度投放入透明塑料盒中，调节室内温度23℃，饥饿培养6小时。之后将蚯蚓取出，并清洗干净，除去体表的污泥。
[0038](2)将洗干净的蚯蚓放入去离子水中，蚯蚓：去离子水(m/m)＝2.5:1，之后依次加入木瓜蛋白酶：菠萝蛋白酶：酸性蛋白酶(m/m)＝1:1:本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可提高作物赤霉素含量的方法，其特征在于，在培养基中添加蚯蚓提取液配制成改良型巨大芽孢杆菌菌悬液，然后将改良型巨大芽孢杆菌菌悬液接种于作物上。2.根据权利要求1所述的可提高作物赤霉素含量的方法，其特征在于，蚯蚓提取液的提取步骤包括：(1)将蚯蚓饥饿培养6
‑
8小时；(2)将蚯蚓放入水中，之后依次加入木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和微生物产酸性蛋白酶，调节pH，常温发酵至少24小时，得到蚯蚓粗提液；(3)将获得的蚯蚓粗提液离心，取上清液，之后依次加入甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸，搅拌均匀，即为蚯蚓提取液。3.根据权利要求2所述的可提高作物赤霉素含量的方法，其特征在于，木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和微生物产酸性蛋白酶的质量比为1:1:1.5
‑
2，且添加比例为总物料质量的0.8
‑
1.2％。4.根据权利要求2所述的可提高作物赤霉素含量的方法，其特征在于，甘氨酸、L
‑
亮氨酸、L
‑
苏氨酸、L
‑
色氨酸质量比为1:1:1:1.5
‑
2.5，且添加比例为游离氨基酸总质量的40
‑
50％。5.根据权利要求1所述的可提高作物赤霉素含量的方法，其特征在于，所述蚯蚓为以牛粪为食的赤子爱胜蚓一代繁殖后的蚯蚓。6.根据权利要求1所述的可提高作物赤霉素含量的方法，其特征在于，蚯蚓提取液的提取步骤包括：(1)将蚯蚓按每平方米5公斤的密度投放入盒中，调节室内温度23℃，饥饿培养6小时，之后将蚯蚓取出；(2)将洗干净的蚯蚓放入去离子水中，蚯蚓与去离子水的质量比为2.5:1，之后依次加入质量比为1:1:1.5
‑
2的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和微生物产酸性蛋白酶，蛋白酶添加比例为总...

【专利技术属性】
技术研发人员：余小兰，李晓亮，李勤奋，李光义，彭实亮，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：