环状RNAcZNF215及其用途制造技术

本发明专利技术公开了环状RNA cZNF215及其用途，基于发明专利技术人对环状RNA cZNF215(CircBase ID:hsa_circ_0008338)在肝胆管癌细胞生长和转移中的功能和机制研究，提供一种诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒、用于肝内胆管细胞癌患者预后评估的试剂盒、治疗肝内胆管细胞癌的药物组合物，以及环状RNA cZNF215作为治疗靶点在肝内胆管细胞癌的预后、诊断和治疗中的应用。诊断和治疗中的应用。诊断和治疗中的应用。

【技术实现步骤摘要】
环状RNA cZNF215及其用途


[0001]本专利技术涉及生物医药
，具体涉及环状RNA CircZNF215，包含该环状RNA的试剂盒、药物组合物，以及该环状RNA在诊断、治疗肝内胆管细胞癌，以及肝内胆管细胞癌预后中的应用。

技术介绍

[0002]肝内胆管细胞癌(Intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC)是第二常见的原发性肝脏恶性肿瘤。由于非酒精性脂肪性肝病和丙型肝炎患病率的增加，肝内胆管细胞癌的发病率在全球范围内呈增长态势，过去10年平均每年增长4.4％。ICC在早期通常是无症状的，大多数患者诊断出ICC时已处于晚期，可选用的治疗手段有限，造成临床效果不佳。
[0003]当前，根治性切除仍是治愈ICC的主要手段，但60％的手术患者存在复发或转移性疾病。专利技术人团队致力于探寻ICC转移的分子机制，确定能够抑制转移的新治疗靶点以改善ICC患者的生存结果。在前期的研究成果中，公开了环状RNA cGGNBP2、CircNFIB在肝内胆管细胞癌诊断、治疗及预后中的用途，通过特有的机制抑制ICC的生长和转移。
[0004]环状RNA cZNF215(CircBase ID:hsa_circ_0008338)是一种已知的环状RNA，具有与其他环状RNA一样，其不易被降解，相较于线性RNA能够更稳定地存在于生物体中。cZNF215包含基因ZNF215的第2个至第4个外显子，其环化的核苷酸序列有405个碱基，目前尚未有任何关于环状RNA cZNF215在诊断、治疗肝内胆管细胞癌，以及肝内胆管细胞癌预后中应用的报道。

技术实现思路

[0005]PI3K/AKT是一个典型的致癌信号通路，在肝内胆管细胞癌中经常被异常激活。PTEN是第一个被发现具有磷酸酶功能的肿瘤抑癌基因并且在癌症中常发生失调，大量研究表明PTEN的失活可以激活PI3K/AKT通路。进一步地，有研究发现PTEN的活性是通过氧化作用进行负向调节的，在细胞有氧和无氧代谢过程中不断产生的包括超氧化物(O2‑
)和过氧化氢(H2O2)在内的活性氧(ROS)可以通过氧化诱导PTEN失活，被氧化失活后的PTEN导致PI3K/AKT通路过度激活，从而促进癌症进展。同时，Prdx1是过氧化物蛋白中的一员，已有研究证实在氧化应激下Prdx1可以结合PTEN并防止PTEN被氧化从而发挥PTEN的抑瘤功能。
[0006]本专利技术中，专利技术人发现一种新的机制，即环状RNA cZNF215与Prdx1存在竞争性地相互作用。如图1所示，较高的cZNF215表达(cZNF215 high)将抑制Prdx1与PTEN的结合，cZNF215与Prdx1大量结合致使PTEN被活性氧氧化失活，从而激活PI3K/AKT通路，最终促进ICC的生长和转移；而较低的cZNF215表达(cZNF215 low)无法与PTEN竞争Prdx1结合位点，因此Prdx1可以大量与PTEN结合从而保护PTEN不被活性氧氧化，进而使得PTEN抑制PI3K/AKT通路并发挥抑制ICC生长和转移的作用。
[0007]通过分析cZNF215表达与ICC患者临床病理特征之间的关系发现，较高的cZNF215表达与更多的肿瘤数量和更大的肿瘤体积、淋巴结转移、微血管侵犯以及更晚的肿瘤分期
相关，表明cZNF215参与了ICC进展，且cZNF215表达较高的患者的总生存期(Overall Survival，OS)和无复发生存率(Recurrence
‑
Free Survival，RFS)更短，通过单因素和多因素分析发现，cZNF215的表达升高被认为是OS和RFS的独立危险因素，表明高cZNF215表达水平可以作为ICC患者的重要的预后指标之一。功能性研究表明，cZNF215在体外和体内促进了ICC细胞的增殖和转移。其中，体外实验表明，敲低cZNF215能够显著地抑制细胞的生长、迁移和侵袭能力，体内实验表明，敲低cZNF215将抑制肿瘤的生长、肝内转移和肺转移。不仅如此，专利技术人还发现帕他色替(ipatasertib)，一种AKT特异性抑制剂，与敲低编码cZNF215的慢病毒载体共同治疗相比于仅采用帕他色替进行治疗，显示出了更强的肿瘤抑制作用，表明cZNF215的外源性敲低能够增强帕他色替的抗肿瘤作用。
[0008]以上，实验结果及机理研究均表明环状RNA cZNF215在ICC细胞的生长与转移中发挥至关重要的作用，可作为治疗肝内胆管细胞癌的潜在的药物作用靶点。
[0009]本专利技术的目的在于基于专利技术人对环状RNA cZNF215在肝胆管癌细胞生长和转移中的功能和机制研究，提供一种诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒、治疗肝内胆管细胞癌的药物组合物，以及环状RNA cZNF215作为治疗靶点在肝内胆管细胞癌的预后、诊断和治疗中的应用。
[0010]本专利技术通过下述技术方案实现：
[0011]用于诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒，所述试剂盒包括定量检测环状RNA的试剂，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0008338。
[0012]用于肝内胆管细胞癌患者预后评估的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括定量检测环状RNA的试剂，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0008338。
[0013]环状RNA cZNF215包含基因ZNF215的第2个至第4个外显子，其环化的核苷酸序列有405个碱基。
[0014]cZNF215对应的DNA序列为：
[0015]ATATGCCCTGCAAGGACTCTGCCCTGCAGATGGGGAGCATCAAGGAGAAAATGAAAGCTGGCTCACGAACAGGCAAACCACAGGAACCAGTGACATTCAAAGATGTGGTTGTGGAATTCAGCAAGGAAGAGTGGGGGCAACTGGACTCTGCTGTAAAGAACCTGTACAGGAATGTGATGCTGGAAAACTTTAGGAACCTGAATTCATTGCGTAAAGCACATCTACTTTCCAAACCATTTGAGAGCCTTAAGTTGGAGAGTAAGAAAAAAAGATGGATAATGGAGAAAGAAATACCAAGGAAGACTATTTTTGACATGAAGAGTATTTCTGGAGAAGAATCATCCCATGGAGTGATTATGACAAGGCTTACCGAAAGTGGACACCCTTCTTCAGATGCCTGGAAAG
[0016]cZNF215的序列为以下所示的核苷酸序列首尾连接而成的环状结构：
[0017]AUAUGCCCUGCAAGGACUCUGCCCUGCAGAUGGGGAGCAUCAAGGAGAAAAUGAAAGCUGGCUCACGAACAGGCAAACCACAGGAACCAGUGACAUUCAAAGAUGUGGUUGUGGAAUUCAGCAAGGAAGAGUGGGGGCAACUGGACUCUGCUGUAAAGAACCUGUACA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于诊断肝内胆管细胞癌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括定量检测环状RNA的试剂，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0008338。2.用于肝内胆管细胞癌患者预后评估的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括定量检测环状RNA的试剂，所述环状RNA的CircBase ID为hsa_circ_0008338。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述定量检测环状RNA的试剂包括用于扩增所述环状RNA的引物，所述引物包括：F：5'
‑
TCAGATGCCTGGAAAGATATGC
‑
3'(SEQ ID NO：3)R：5'
‑
CCCCACTCTTCCTTGCTGAA
‑
3'(SEQ ID NO：4)。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA提取试剂和逆转录反应体系。5.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括环状RN...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书九页序列表电子公布附图八页，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：