一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株及其应用，属于ACE抑制肽制备技术领域。本发明专利技术提供的具有产ACE抑制肽潜力的菌株，发酵乳杆菌187，拉丁文为Lactobacillusfermentum，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2022年08月24日，保藏编号为：CGMCCNo.25586。利用该菌株与碱性蛋白酶联合发酵水解牦牛乳酪蛋白制备高活性的ACE抑制肽。肽。

【技术实现步骤摘要】
一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株及其应用


[0001]本专利技术涉及ACE抑制肽制备
，尤其涉及一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株及其应用。

技术介绍

[0002]高血压(Hypertension)是指以体循环动脉血压(收缩压/舒张压)增高为主要特征(收缩压≥140mmHg，舒张压≥90mmHg)，以心绞痛、心脏病发作、器官损害等为主要危害的一种心血管疾病。据统计，每年全球有九百多万人死于高血压并发症。血管紧张素转换酶(Angiotensin
‑
I converting enzyme，ACE)是一种含锌的二肽羧肽酶，是介导全身性高血压的关键酶促因素，在人体心血管系统中起着至关重要的作用。目前临床上有许多可用于抑制ACE的药物，如卡托普利、吲哚帕胺片、倍他乐克、氯沙坦等。但研究发现，一些药物的长期使用，会造成持续性咳嗽、味觉障碍、血管水肿，钾水平升高等副作用，而食源性ACE抑制肽认为是相对安全的补充剂、且具有成本低、无副作用等优点，有望成为合成药物的良好替代品。
[0003]牦牛是一种独特的牲畜，其生长环境为高海拔、无污染的绿色草原，是一种优质的营养资源。牦牛奶在藏区农牧民饮食习惯中占有无可替代的地位，含有多种营养物质，且含量高于普通牛奶，有助于维持生活在恶劣环境下的牧民的健康。与荷斯坦牛乳相比，牦牛乳中的矿质元素、蛋白质、脂肪、维生素等含量更高，其中牦牛乳中蛋白的含量约为5.3g/kg，氨基酸含量丰富，含有8种必需氨基酸，达到联合国粮食安全组织(FAO)的标准。
[0004]酪蛋白(Casein)，又称干酪素，是在一定条件(pH4.6，温度20℃)下，从脱脂乳中沉淀下来的蛋白，是牦牛乳中最主要的蛋白质之一，其含量为34.28～45.79g/L，约占其蛋白总量的80％。主要包括α
s1
‑
酪蛋白、α
s2
‑
酪蛋白、β
‑
酪蛋白和κ
‑
酪蛋白四种单体，其中α
‑
酪蛋白约占酪蛋白总量36％，β
‑
酪蛋白约占酪蛋白总量的34％。随着对牦牛乳酪蛋白的开发利用，其营养价值也正逐步被发现，乳源酪蛋白中蕴藏着许多具有生物活性的多肽，具有丰富蛋白质的牦牛乳及其副产品是ACE抑制肽的良好来源。这些多肽在母体蛋白质序列内是无活性的，这些活性序列可通过适当的降解方法从酪蛋白中释放出来，成为具有降血压、抗氧化等生理活性的片段。但降解的方法对释放出来的多肽活性有显著影响。不同的降解方法所得多肽活性有差异。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株，利用该菌株采用菌酶联合的发酵水解工艺，水解牦牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株，发酵乳杆菌187，拉丁文为Lactobacillus fermentum，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2022年
08月24日，保藏编号为：CGMCC No.25586。
[0008]本专利技术还提供了一种利用所述的菌株联合碱性蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，包括如下步骤：
[0009](1)将碱性蛋白酶、所述菌株的菌液、牦牛乳酪蛋白溶液混合发酵，得到发酵液；
[0010](2)所述发酵液经灭酶、调pH值后，取上清液；
[0011](3)所述上清液超滤膜超滤后，取ACE抑制活性高的超滤液，进行分离鉴定，得到ACE抑制肽。
[0012]优选的，所述碱性蛋白酶与牦牛乳酪蛋白溶液的质量体积比为1g:200～300ml。
[0013]优选的，所述菌株的菌液浓度为1
×
108～1
×
109CFU/ml，所述菌液的接种量为牦牛乳酪蛋白溶液体积的4～6％。
[0014]优选的，步骤(2)中所述pH值为8～8.5。
[0015]优选的，步骤(3)中所述超滤膜为8～12kDa和2～4kDa的超滤膜。
[0016]本专利技术还提供了一种所述的方法获得的ACE抑制肽，所述ACE抑制肽的氨基酸序列包括SEQ ID NO：1～9中的一种或几种。
[0017]本专利技术还提供了一种所述的ACE抑制肽在制备降血压药物中的应用。
[0018]本专利技术采用乳酸菌发酵与碱性蛋白酶水解结合的方式进行ACE抑制肽的制备，可以缩短发酵水解周期，并能筛选出有效活性高的ACE抑制肽。本专利技术采用实验室筛选出的具有高产ACE抑制肽潜力的菌株——发酵乳杆菌187与碱性蛋白酶建立了一种菌酶协同发酵水解工艺，并对水解产物进行分离纯化，鉴定得到了一组新型ACE抑制肽。
[0019]保藏说明
[0020]发酵乳杆菌187，拉丁文为Lactobacillus fermentum，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2022年08月24日，保藏编号为：CGMCC No.25586。
具体实施方式
[0021]下面结合实施例对本专利技术提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。
[0022]实施例1
[0023]利用PBS缓冲液(pH7.0，0.05mol/L)配制5％(m/v)的牦牛乳酪蛋白溶液，滴加一定量的1mol/L NaOH至酪蛋白溶液pH为7.0，沸水浴加热15min，使其充分溶解后，高压蒸汽灭菌(115℃，15min)，得到5％(m/v)的无菌牦牛乳酪蛋白溶液。
[0024]在5％(m/v)的无菌牦牛乳酪蛋白溶液中接种5v/v％的发酵乳杆菌187菌液(8.2
×
108CFU/ml)，在温度37℃下发酵12h，计算水解度和ACE抑制率。结果显示水解度为12.83％，ACE抑制率为43.29％。表明发酵乳杆菌187在水解牦牛乳酪蛋白时具有较高的活性。
[0025]实施例2
[0026]采用单一蛋白酶(碱性蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶)分别按酶与底物比1g：200ml的添加量加入到5％无菌牦牛乳酪蛋白溶液中，再接入5％(v/v)发酵乳杆菌187，在37℃条件下发酵8h后，测量各组ACE抑制率、水解度、肽含量和pH。综合比较各项指标，确定与发酵乳杆菌187联合发酵水解的最佳蛋白酶。结果发现发酵乳杆菌
187在于碱性蛋白酶联合水解时，水解效果最好。其肽浓度为2.01mg/mL，pH值为6.09，ACE抑制率为59.76％，水解度为23.81％。
[0027]通过单因素实验和正交实验确定碱性蛋白酶添加量为1g:300ml，发酵乳杆菌187接种量为5％(v/v)，酶解时间为10h，底物pH为7.0，此条件下ACE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有产ACE抑制肽潜力的菌株，发酵乳杆菌187，拉丁文为Lactobacillus fermentum，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2022年08月24日，保藏编号为：CGMCC No.25586。2.一种利用权利要求1所述的菌株联合碱性蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将碱性蛋白酶、所述菌株的菌液、牦牛乳酪蛋白溶液混合发酵，得到发酵液；(2)所述发酵液经灭酶、调pH值后，取上清液；(3)所述上清液超滤膜超滤后，取ACE抑制活性高的超滤液，进行分离鉴定，得到ACE抑制肽。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述碱性蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈炼红，杨尚霖，刘曦，张岩，张诗琦，
申请(专利权)人：西南民族大学，
类型：发明
国别省市：