一种高产香草醇的光合细菌构建方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种高产香草醇的光合细菌构建方法及其应用，通过构建厌氧调控的强启动子表达系统，在沼泽红假单胞菌内高效表达内源阿魏酰辅酶A合成酶CouB和烯酰辅酶A水合酶/醛缩酶CouA及外源醇脱氢酶ADH2，构建香草醇生物合成路径。该重组光合细菌，以木质素单体阿魏酸为底物，硫代硫酸钠为电子供体，经过光催化高效生产香草醇；无需额外添加有机碳源，具有广阔的工业化应用前景。阔的工业化应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种高产香草醇的光合细菌构建方法及其应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种高产香草醇的光合细菌构建方法及其应用。

技术介绍

[0002]香草醇(4
‑
羟基
‑3‑
甲氧基苄醇，vanillyl alcohol)作为一种广泛使用的调味剂，是一种天然芳香化合物，存在于多种植物中，例如天麻和香草。香草醇具有多种药理活性，如抗氧化、抗血管生成、抗炎症、抗疼痛、抗哮喘、抗惊厥等，表明其作为药物成分具有潜在的治疗作用。目前，香草醇主要从多种植物中提取；但这些提取方法仍存在以下缺点：原材料有限的供给、苛刻的反应条件以及较低得率。另一方面，化学合成香草醇主要通过催化香草醛获得，然而受限于高昂的催化剂成本(如Pd/C,Pt/C,and Au/C)和高价值、不稳定的底物香草醛。
[0003]因此，利用可再生廉价原料通过高效的生物合成方式生产高附加值的香草醇，符合新经济形势下的可持续发展，有利于促进香草醇的工业化发展。迄今为止，生物合成香草醇的研究多聚焦于直接前体香草醛的合成，但较长的合成途径、酶的低本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高产香草醇的光合细菌构建方法，其特征在于，包括以下步骤：构建厌氧调控的强启动子表达载体pBRPt334O和pGenPt334O；构建表达阿魏酰辅酶A合成酶CouB、烯酰辅酶A水合酶/醛缩酶CouA的质粒pBRT334O
‑
CouBA和表达醇脱氢酶ADH2的质粒pGenT334O
‑
ADH2；敲除沼泽红假单胞菌中的醛脱氢酶，并将质粒pBRT334O
‑
CouBA和质粒pGenT334O
‑
ADH2结合转移导入沼泽红假单胞菌中，以获得高产香草醇的光合细菌。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述表达载体pBRPt334O的构建是以核苷酸序列为SEQ ID NO：25所示的启动子P
T334
‑6为模板，以SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2所示序列为引物，PCR扩增得到厌氧调控的强启动子P
T334O
，将其连接入载体pBRT，获得具有卡那霉素抗性的表达载体pBRPt334O；所述表达载体pGenPt334O的构建是以pZJD29a质粒为模板，以SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5所示序列为引物，PCR扩增得到庆大霉素抗性基因，经抗生素筛选标记替换，获得具有庆大霉素抗性的表达载体pGenPt334O。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述质粒pBRT334O
‑
CouBA的构建是以沼泽红假单胞菌基因组为模板，分别以SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9所示的序列为引物，经PCR扩增得到CouB基因和CouA基因，再将两基因克隆至表达载体pBRPt334O，获得质粒pBRT334O
‑
CouBA。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述质粒pGenT334O
‑
ADH2的构建是以酿酒酵母基因组为模板，以SEQ ID NO：...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁吉锋，张阳，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：