一种雨生红球藻提取物的制备及其应用制造技术

一种雨生红球藻提取物的制备及其应用，涉及医药技术领域。雨生红球藻提取物的制备方法的制备方法如下：雨生红球藻粉乙醇浸提、破壁得到粗提物，进一步经高速逆流色谱

【技术实现步骤摘要】
一种雨生红球藻提取物的制备及其应用


[0001]本专利技术涉及医药
，尤其是涉及一种雨生红球藻提取物的制备及其以RXRα为靶点治疗阿尔兹海默症的应用。

技术介绍

[0002]阿尔兹海默病(Alzheimer
’
s disease,AD)，又称老年痴呆症，是一种神经退行性疾病。随着社会发展，老龄化速度加快，阿尔茨海默症的患病率逐年上升，有数据显示，全球AD死亡率居第三位，仅次于癌症和心脑血管疾病。该疾病以进行性记忆减退和认知功能障碍为主要临床特征，最主要的病理特征是神经元淀粉样蛋白(Aβ)在神经元胞外大量聚集形成淀粉样斑及tau蛋白在胞内过度神经纤维化缠结(Reitz C,Brayne C,Mayeux R..Nature Reviews Neurology,2011,7:137
‑
152)。长期以来，阿尔茨海默症的发病机制被认为与Aβ聚集有较大的相关性，该蛋白聚集形成斑块将会引起一系列反应包括促使神经细胞凋亡，激活神经小胶质细胞，释放细胞因子和炎症因子，引发炎症反应以及诱导Tau蛋白过度磷酸化，引起神经纤维缠结，因此减少Aβ的生成或增加其清除对于阿尔茨海默症有重要的意义。
[0003]载脂蛋白(APOE)是一种血浆蛋白其参与胆固醇类物质运输，是大脑内主要的脂质转运蛋白。APOE携带的脂质的量决定Aβ清除的速度和量。ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)是一种整合膜蛋白，该蛋白可促进胞内游离胆固醇和磷脂的流出，大脑中的APOE负责接收。有研究表明敲除小鼠的ABCA1基因会导致中枢神经系统中APOE吸收脂类的能力下降，进而加剧小鼠脑中淀粉样蛋白斑块的沉积。核受体RXRα是一种配体激活的核受体，在多个重要的生物过程中充当转录因子。研究表明治疗皮肤T细胞淋巴瘤的RXRα激动剂Bexarotene，可通过增强LXR/RXR、PPAR/RXR的所调控的靶蛋白ABCA1、APOE和其它参与脂质代谢的蛋白表达，增加Aβ清除，减少淀粉样蛋白斑块在APP小鼠脑中形成，改善小鼠的认知缺陷。同时近期临床数据表明RXRα激动剂Bexarotene对其它脑部疾病入帕金森疾病和精神疾病分裂症均有积极的治疗作用，且长期服用安全有效。因此，以RXRα为靶点寻找治疗AD的药物具有一定的开发前景。
[0004]雨生红球藻是天然虾青素的最佳来源，其中虾青素可清理大脑内的自由基；目前，雨生红球藻提取物具有抗老年痴呆药物因为靶向性不明，而无法作为候选药物应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一目的在于提供一种雨生红球藻提取物。该提取物可以通过与核受体RXRα相结合、上调ABCA1和APPE蛋白，以及促进可溶性Aβ的清除。
[0006]本专利技术的第二目的在于提供纯度较高的一种雨生红球藻提取物的制备方法。
[0007]本专利技术的第三目的在于提供该雨生红球藻提取物可靶向RXRα作为抗阿尔兹海默症候选药物的应用。该雨生红球藻提取物的作用靶点明确，可靶向RXRα发挥抗老年痴呆作用，可以作为RXRα为靶点的抗AD的药物。
[0008]所述雨生红球藻提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0009]1)破壁浸提：将雨生红球藻藻粉原料将放入容器中，加入2～4倍量无水乙醇破壁浸渍提取，沉淀后用过滤，得提取液，减压浓缩，得雨生红球藻粗提物；
[0010]在步骤1)中，所述提取可重复提取2次；沉淀的时间可为6～24h；所述过滤可用300目蚕丝布两层过滤；所述减压浓缩可将提取液使用旋转蒸发仪减压浓缩，期间注意避光处理，仪器参数设置可为转速40rpm，温度35℃。
[0011]2)将步骤1)得到的雨生红球藻粗提物经高速逆流色谱分离，采用乙酸乙酯
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乙醇
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水等混合溶剂体系溶剂，尾
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头洗脱(下相为固定相)模式，紫外检测器480nm处检测收样，浓缩得浓缩液；
[0012]3)将步骤2)得到的浓缩液进行快速中压制备色谱分离，中压柱加入硅胶，使用溶剂浸泡，用流动相平衡至硅胶压实，得雨生红球藻提取物。
[0013]虾青素含量测定：
[0014]色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。以色谱乙腈为流动相A，水为色谱相B，检测波长为480nm，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为480nm。理论板数按虾青素峰计算应不低于6000。
[0015]液相色谱分析条件
[0016][0017]对照品溶液的制备：精密称取虾青素标准品2.7mg，加200μL二氯甲烷，用色谱甲醇定容至10mL棕色容量瓶中；超声10min，放冷，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。
[0018]供试品溶液制备，取供试品0.1g于50ml棕色容量瓶中，加200μL二氯甲烷，用色谱甲醇溶解并定容，超声20min，放冷，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。
[0019]将对照品及供试品溶液吸取20μL注入液相色谱仪，流速1.0mL/min，柱温30℃，测定，即得。
[0020]按照上述方法，对测试样品进行分析，计算虾青素含量。本专利技术所制备的雨生红球藻提取物中虾青素含量＞20％。
[0021]本专利技术还提供一种雨生红球藻提取物可靶向RXRα作为抗阿尔兹海默症候选药物的应用。
[0022]所述雨生红球藻提取物可在制备以RXRα为靶点药物中的应用。
[0023]所述雨生红球藻提取物可在制备抗阿尔兹海默症(AD)药物中的应用。
[0024]抗老年痴呆活性评价结果显示，本专利技术制备的雨生红球藻提取物可靶向核受体RXRα，上调ABCA1和APPE蛋白，促进可溶性Aβ的清除，对抗阿尔兹海默症药物的开发具有重要意义。
[0025]与现有技术相比，本专利技术的创新点和突出技术效果在于：
[0026]本专利技术通过联用高速逆流色谱及中压硅胶柱色谱，得到纯度较高的雨生红球藻提取物，其所含虾青素的纯度可高于20％。进一步的实验研究的结果显示，该提取物可以通过
与核受体RXRα相结合、上调ABCA1和APPE蛋白，以及促进可溶性Aβ的清除。由于该提取物的作用靶点明确，促进阿尔兹海默症疾病相关的蛋白产生明显的正向调节作用及病灶蛋白清除作用，显示本专利技术得到的雨生红球藻提取物可以通过靶向核受体RXRα而发挥抗阿尔兹海默症的作用，从而为该提取物作为治疗阿尔兹海默症的候选药物提供条件。
附图说明
[0027]图1为雨生红球藻提取物(1μΜ)不同作用时间对BV2细胞中ABCA1和APOE蛋白表达的影响。
[0028]图2为雨生红球藻提取物不同作用浓度对BV2细胞中ABCA1和APOE蛋白表达的影响。其中，*为p<0.05,vs Con组；**为p<0.01,vs Con组。
[0029]图3为雨生红球藻提取物与粗提物的活性对比。其中，*为p<0.05,vs Con组；**为p<0.01,vs Con组；#为p<0.05本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)破壁浸提：将雨生红球藻藻粉原料将放入容器中，加入2～4倍量无水乙醇破壁浸渍提取，沉淀后用过滤，得提取液，减压浓缩，得雨生红球藻粗提物；2)将步骤1)得到的雨生红球藻粗提物经高速逆流色谱分离，采用乙酸乙酯
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乙醇
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水等混合溶剂体系溶剂，尾
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头洗脱模式，下相为固定相；紫外检测器480nm处检测收样，浓缩得浓缩液；3)将步骤2)得到的浓缩液进行快速中压制备色谱分离，中压柱加入硅胶，使用溶剂浸泡，用流动相平衡至硅胶压实，得雨生红球藻提取物。2.如权利要求1的所述一种雨生红球藻提取物的制备方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海峰，蔡明刚，田文静，杨任靖，高玥，许倩楠，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：