一种MAPKAPK2分子及其用于帕金森病辅助诊断的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种MAPKAPK2分子及其用于帕金森病辅助诊断的应用。MAPKAPK2基因在MPP

【技术实现步骤摘要】
一种MAPKAPK2分子及其用于帕金森病辅助诊断的应用


[0001]本专利技术属于分子生物学和生物医药领域，涉及一种帕金森病潜在的生物标记物，MAPKAPK2基因在帕金森病临床诊断、治疗或科学研究中的应用。

技术介绍

[0002]帕金森病(Parkinson
’
s disease，PD)是仅次于阿尔兹海默症的第二大神经退行性疾病，其患病率在工业化国家60岁以上人群中达1％，80岁以上人群中达3％。我国65岁以上人群PD的患病率大约是1.7％。PD是一种常见而复杂的神经系统疾病，其运动症状包括静止性震颤、运动迟缓、肌强直、姿势异常和步态障碍等，同时还伴有非运动症状，如抑郁、便秘和睡眠障碍，给患者、家庭和社会带来了沉重的负担。PD的主要病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元进行性丢失，以及黑质中α
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突触核蛋白(α
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synuclein)的病理性聚集，后者是路易氏小体(Lewy body，LB)的主要成分。目前已知病理性的寡聚α
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突触核蛋白的积累和聚集会形成α
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突触核蛋白纤维，进一步积累形成路易氏小体。这三者都有神经毒性，通过导致线粒体异常、内质网
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高尔基体运输异常、抑制自噬
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蛋白酶体通路等途径引起多巴胺能神经元的死亡和PD的发生。
[0003]帕金森病的病因和发病机制尚未明确，目前一致认为遗传因素、环境因素、年龄老化、氧化应激等均是帕金森病的危险因素。帕金森病的发生发展是一个多因素、多基因参与的动态过程，因此，探索其动态发展的分子机制，寻找帕金森病相关分子标志物，以进一步明确其发病机制，并开发出可应用于临床早期诊断、治疗和预后评估的试剂或产品，对提高帕金森病的诊疗水平具有重要意义。
[0004]MAPKAPK2基因位于第1号染色体1q32位置，总长约49kb，由10个外显子组成，编码400个氨基酸的MAPKAPK2蛋白质。MAPKAPK2基因编码蛋白是一个多功能的蛋白激酶，是MAPK的重要效应底物。MAPK活化的蛋白激酶2参与各种细胞事件，如炎症，细胞周期，细胞迁移和凋亡等。它可通过调节抑癌蛋白tuberin，而调控细胞周期和细胞间粘连等功能；可影响肺上皮细胞的抗氧化功能；也可激活热休克蛋白HSP27、HSP25，抑制细胞凋亡和细胞运动；还可通过调节肿瘤坏死因子TNF等的分泌影响巨噬细胞和树突状细胞功能，调节机体对外源感染的抵抗力。在照射损伤的情况下，MAPKAPK2可调节DNA修复基因ATM或ATR启动的细胞周期检测点，影响机体细胞对DNA损伤的修复。
[0005]MAPKAPK2已显示参与了许多肿瘤的发生和发展，然而，在帕金森病方面的研究仅见极少量的报道。

技术实现思路

[0006]为了解决现有技术中所存在的不足，本专利技术的目的在于提供MAPKAPK2分子在制备帕金森病生物标记物辅助诊断中的应用。本专利技术的另一个目的在于提供上述MAPKAPK2分子在帕金森病发病机制及α
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突触核蛋白靶向治疗的应用。本专利技术成功鉴定出MAPKAPK2基因在帕金森病患者外周血、黑质、前额叶中高表达，其可作为帕金森病潜在的分子标志物或靶
点，应用于帕金森病临床早期诊断或靶向治疗，并有利于进一步阐明帕金森病的发生发展机理、信号通路等，极具应用前景和理论价值。
[0007]本专利技术技术方案如下。
[0008]构建帕金森病的α
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突触核蛋白病理性聚集细胞模型，鉴定MAPKAPK2基因作为α
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突触核蛋白病理性聚集的核心基因；
[0009]通过数据库样本鉴定MAPKAPK2基因在帕金森病患者外周血、黑质、前额叶中均高表达。
[0010]MAPKAPK2基因作为DNB核心基因的筛选与鉴定，所述鉴定的方法为：利用动态网络生物标志物(Dynamic network biomarker，DNB)的分析方法，分析α
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突触核蛋白(α
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synuclein)在正常状态向病理性聚集的关键期中剧烈变化的关键分子。
[0011]MAPKAPK2基因在帕金森病患者外周血中高表达的鉴定，所述鉴定的方法为：通过数据库分析PD患者外周血样本与健康对照的基因表达量差异。
[0012]MAPKAPK2基因在帕金森病患者黑质中高表达的鉴定，所述鉴定的方法为：通过数据库分析PD患者黑质样本与健康对照的基因表达量差异。
[0013]MAPKAPK2基因在帕金森病患者前额叶中高表达的鉴定，所述鉴定的方法为：通过数据库分析PD患者前额叶样本与健康对照的基因表达量差异。
[0014]MAPKAPK2基因在路易体痴呆患者中高表达的鉴定，所述鉴定的方法为：通过数据库分析路易体痴呆患者与健康对照的基因表达量差异。
[0015]MAPKAPK2基因，用于检测MAPKAPK2的试剂包括用于扩增MAPKAPK2基因的特异性引物对；
[0016]所述用于扩增MAPKAPK2分子的特异性引物对，序列如下所示：
[0017]F：5'
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CCCACCCAGAGAATGACCATC
‑
3'；
[0018]R：5'
‑
ACAGAATCCTCTGCTCACAACC
‑
3'。
[0019]所述MAPKAPK2基因用于帕金森病辅助诊断的试剂盒。
[0020]进一步地，用于帕金森病辅助诊断或预后评估。
[0021]进一步地，所述试剂盒，其特征在于，包括如下步骤：
[0022](1)设计并合成MAPKAPK2基因分子及内参基因引物对；
[0023](2)提取样品总RNA；
[0024](3)制备样品cDNA；
[0025](4)qPCR反应液。
[0026]上述方法中，步骤(2)具体为：细胞裂解液裂解SH
‑
SY5Y细胞，快速使用TransZol Up Plus RNA Kit试剂盒从细胞样本中提取总RNA。
[0027]上述方法中，步骤(3)具体为：将步骤(2)的RNA使用超微量分光光度计测定浓度，并快速使用HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCR试剂盒将RNA逆转录成cDNA并保存在
‑
20℃冰箱中。
[0028]上述方法中，步骤(4)具体为：使用(3)所提取的cDNA作为模板，β
‑
actin作为内参，在避光条件下将SYBR Green荧光染料加入反应体系中，轻微离心后放入qPCR仪器中，设置程序，制得帕金森病辅助诊断的试剂盒。
[0029]与现有技术相比，本专利技术成功诱导α
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突触核蛋白病理性聚集细胞模型，鉴定
MAPKAPK2基因在此模型及帕金森病患者的外周血、黑质和前额叶中均高表达，可作为帕金森病潜在的分子标志物，应用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MAPKAPK2分子，其特征在于，用于检测MAPKAPK2分子试剂，包括用于扩增MAPKAPK2分子的特异性引物对；所述用于扩增MAPKAPK2分子的特异性引物对，序列如下所示：F：5'
‑
CCCACCCAGAGAATGACCATC
‑
3'；R：5'
‑
ACAGAATCCTCTGCTCACAACC
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3'。2.根据权利要求1所述MAPKAPK2分子应用于帕金森病辅助诊断的试剂盒。3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，试剂盒的制备方法，包括如下步骤：(1)设计并合成MAPKAPK2基因分子及内参基因引物对；(2)提取样品总RNA；(3)制备样品cDNA；(4)qPCR反应液，最后得到帕金森病辅助诊断的试剂盒。4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤(2)具体为：细胞裂解液裂解SH
‑
SY5Y细胞，快速使用TransZol Up Plus RNA Kit试剂盒从细胞样本中提取总RNA。5.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤(3)具体为：将步骤(2)的RNA使用超微量分光光度计测定浓度，并快速使用HiScript II Q Select RT SuperMix for qPCR试剂盒将RNA逆转录成cDNA并保存在
‑
20℃冰箱中。6.根据权利要求2所述应用，其特征在于，步骤(4)具体为：使用(3)所提取的cDNA作为模板，β
‑
actin作为内参，在避光条件下将SYBR Green荧光染...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌飞，李嘉宝，张玉虎，钟正刚，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：