本发明专利技术公开了一种抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法，其中，所述检测试剂盒采用Snapshot分型技术检测抗组胺药物的代谢标志物选自下列基因位点组合的一组或两组：HSH2D基因位点rs4321304、ZNF804B基因位点rs1524127和/或NOTCH1基因位点rs3125003组；及FAH基因位点rs1370275和/或NR1I3基因位点rs2502815组。本发明专利技术选择抗组胺药物疗效相关的遗传位点开发个体化诊断试剂盒，使之产品化、临床化、便携化、将指导临床医生合理用药、改善患者生活质量提供新的诊疗手段，有利于在临床推广抗组胺药物的个体化用药。临床推广抗组胺药物的个体化用药。临床推广抗组胺药物的个体化用药。
【技术实现步骤摘要】
一种抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法
[0001]本专利技术涉及一种抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法，属于基因检测领域。
技术介绍
[0002]荨麻疹是一种常见的、以风团伴不同程度瘙痒为主要表现的免疫相关性皮肤疾病，因人种遗传背景的不同，累及15％
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30％的普通人群。其中，慢性荨麻疹的病程超过6周，11％
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14％可达5年以上，需长期用药干预。不仅如此，慢性荨麻疹还降低学习工作效率，其对生活质量损害的严重程度相当于缺血性心脏病。因此，国际诊疗指南将慢性荨麻疹归类为严重的过敏性疾病。流行病学资料显示：近10年来，荨麻疹等过敏性疾病的发病率较前增长7倍，给全球带来了负面的社会经济影响，该类疾病正逐渐引起全世界研究者的关注。
[0003]慢性自发性荨麻疹(CSU)是慢性荨麻疹中最常见临床类型，作为一种与遗传、免疫、环境等多种因素相关的遗传异质性疾病，CSU的发病机制仍不明确，但学术界公认CSU是由于肥大细胞和嗜碱性粒细胞的活化导致其脱颗粒，引起组胺、5
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HT、TGF
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b等炎性因子释放，进而引起风团、瘙痒等临床表现。目前，以包括地氯雷他定、左西替利嗪等多种药物在内的第二代抗组胺药是荨麻疹的一线治疗药物，几乎占据国内抗组胺药的全部市场。尽管目前第二代抗组胺药物是慢性荨麻疹的首选治疗方案，然而，临床发现患者对二代抗组胺药物的反应存在显著的个体差异。例如，某些患者使用某种抗组胺药物(如哌啶类)无效，更换为另一种抗组胺药(如吡咯胺类)后可获得满意疗效；某些患者长期服用某种抗组胺药无任何不良反应，而换用另外一种则出现嗜睡、头昏、体重增加等不良反应。另外，约40％患者对该类药物无效，需要加倍剂量甚至二线、三线药物治疗(如副作用较大的免疫抑制剂或者价格昂贵的生物制剂)。对于急需控制症状的荨麻疹患者，应该首选哪种抗组胺药才能最为有效地控制风团与瘙痒、阻止患者再次发生眼睑、口唇等组织肿胀；哪些患者需要更换治疗药物；药物疗效个体差异的原因是什么；如何在减少药物不良反应的同时获得最佳疗效。这些都是长期以来困扰皮肤科医生的重要临床问题。
[0004]国外已有研究发现，携带有CRTH2
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466TT基因型的患者使用氯雷他定的剂量要显著高于
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466CC基因型组(P＝0.025)。其他研究则指出CYP2D6基因多态性与氯雷他定的药代动力学相关，且CYP2D6*10基因突变与马来酸氯苯那敏产生的嗜睡具有一定的相关性(P＝0.045)。而专利技术人在前期研究中也发现了在中国南方汉族人群中，携带FCER1Ars2298805位点不同基因型患者血浆IgE水平存在差异，并且使用第二代非镇静类抗组胺药物的患者有效组与无效组之间其rs2298805位点的A等位基因及G等位基因存在统计学差异(p＝0.015,OR＝8.328)；ORAI1基因rs3741595与地氯雷他定的疗效相关。关于补体受体C5AR1基因多态性的研究也表明，C5AR1 rs11673309T>G与地氯雷他定的疗效相关。这为日后的慢性荨麻疹实现个体化治疗提供了理论依据，同时也为有针对性地提高患者的用药疗效奠定了基础。结合这些已有的科研成果，并基于已有的荨麻疹患者病例，开发一款针对中国南方人群的抗组胺药物个性化检测试剂盒，对于指导临床医生合理用药、改善患者生活质量具有重要
的意义。
技术实现思路
[0005]针对现有技术存在的上述问题，本专利技术的目的是获得一种抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒及其检测方法。
[0006]为实现上述专利技术目的之一，本专利技术采用的抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒的技术方案如下：
[0007]本专利技术的1.所述检测试剂盒采用Snapshot分型技术检测抗组胺药物的代谢标志物选自下列基因位点组合的一组或两组：HSH2D基因位点rs4321304、ZNF804B基因位点rs1524127和/或NOTCH1基因位点rs3125003组；及FAH基因位点rs1370275和/或NR1I3基因位点rs2502815组。
[0008]换言之，反应可以选择其中一组或两组同时进行，但两组基因位点不可替换或加减，以免影响反应结果。但每组内的基因位点可以自行选择全测或部分检测。全测的评估结果会更加的全面，但针对个别药物的代谢反应具体做出各别基因位点的检测也是可行的。具体各基因位点与各药物的代谢关系可以参考公知常识或本专利技术的具体实施方式部分。
[0009]所述检测试剂盒采用Snapshot分型技术检测抗组胺药物的代谢标志物选自下列基因位点组合的一组或两组：
[0010]HSH2D基因位点rs4321304、ZNF804B基因位点rs1524127和/或NOTCH1基因位点rs3125003组；及
[0011]FAH基因位点rs1370275和/或NR1I3基因位点rs2502815组。
[0012]优选的，根据上述位点的基因多态性，设计特异性的扩增引物和单碱基延伸引物，用于Snapshot分型。基因多态性序列以Genebank内的公开序列为准。PCR扩增及Snapshot PCR扩增引物如下表所示。
[0013][0014]作为一种优选的实施方式，抗组胺药物代谢标志物的检测基因组为仅检测ZNF804B rs1524127、HSH2D rs4321304和NOTCH1 rs3125003组。
[0015]作为另一种优选的实施方式，抗组胺药物代谢标志物的检测基因组为仅检测NR1I3 rs2502815和FAH rs1370275组。
[0016]作为一种优选的实施方式，抗组胺药物代谢标志物的检测基因组为分组同时检测ZNF804B rs1524127、HSH2D rs4321304和NOTCH1 rs3125003组和NR1I3 rs2502815和FAH rs1370275组。
[0017]在此有必要提出的是，本专利技术可以选择的基因标志物组合不仅局限于上述两种，任何基因标志物的单独或组合检测，或在本专利技术基础上增加其他相关基因标志物或生化指标的检测均应认为落入本专利技术的保护范围之中。
[0018]本专利技术还提供了一种采用上述检测试剂盒的检测方法，所述检测方法包括如下步骤：
[0019]a)取待测样本及质控品，进行PCR扩增及产物纯化；
[0020]b)向纯化后的PCR扩增产物中加入单碱基延伸反应体系，选择一组或两组进行
SNaPshot PCR扩增；
[0021]c)将SNaPshot PCR扩增产物进行纯化，电泳测序。
[0022]优选的，步骤a)具体为：
[0023]准备样本数
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3的PCR反应管，每个样本需分3个反应体系，分别配制扩增引物和单碱基延伸引物，引物干粉稀释至10μM浓度后，按比例分别配制成3
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2种扩增引物与延伸引物混合物，向分装好的3种PCR反应管中分别加入2.0μLDN本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒采用Snapshot分型技术检测抗组胺药物的代谢标志物选自下列基因位点组合的一组或两组：HSH2D基因位点rs4321304、ZNF804B基因位点rs1524127和/或NOTCH1基因位点rs3125003组；及FAH基因位点rs1370275和/或NR1I3基因位点rs2502815组。2.根据权利要求1所述的抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述rs1524127位点的特异性扩增引物如序列表SEQ ID NO:1～2所示，单碱基延伸引物序列如序列表SEQ ID NO:3所示。3.根据权利要求1所述的抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述rs4321304位点的特异性扩增引物如序列表SEQ ID NO:4～5所示，单碱基延伸引物序列如序列表SEQ ID NO:6所示。4.根据权利要求1所述的抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述rs3125003位点的特异性扩增引物如序列表SEQ ID NO:7～8所示，单碱基延伸引物序列如序列表SEQ ID NO:9所示。5.根据权利要求1所述的抗组胺药物代谢标志物的检测试剂盒，其特征在于，所述rs2502815位点的特异性扩增引物如序列表SEQ ID NO:11～11所示，单碱基延伸引物序列如序列表SEQ ID NO:12所示。...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈翔，李捷，彭聪，刘利辉，陈旺青，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：
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