一种用于海水鱼类肌肉干细胞快速分化的分化诱导培养基制造技术

本发明专利技术提供一种海水鱼类肌肉干细胞的分化诱导培养基，该分化培养基是在L

【技术实现步骤摘要】
一种用于海水鱼类肌肉干细胞快速分化的分化诱导培养基


[0001]本专利技术属于干细胞和动物细胞培养肉
，具体涉及一种用于诱导海水鱼类肌肉干细胞快速分化的分化培养基及其使用方法。

技术介绍

[0002]近年来，由于肉制品消耗快速增长，加重了传统畜牧业和水产养殖业的负担，同时养殖业的快速发展也带来了环境污染问题。而细胞培养肉(cell culture meat)，又称为培育肉(lab
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grown meat)、试管肉或无屠宰肉，因其来源可追溯、绿色安全、口感更接近传统肉类等特性引起了广泛的社会关注，成为一种非常有应用前景的未来食品。而且，随着人口增长，人均鱼肉消费量增加，世界范围内的鱼肉消费量也在增加。但世界各地的过度捕捞对生态系统造成了巨大的破坏。因此迫切需要确保可持续的渔业资源，以满足对鱼类日益增长的需求。细胞培养鱼肉的成功研发，可为渔业资源的可持续发展，满足日益增长的鱼肉需求提供一条新的技术途径。
[0003]由于肌肉干细胞的存在，肌肉具有显著的再生能力，在肌肉受到损伤时，肌肉干细胞可被激活，并分化形成增殖性成肌细胞，产生新的肌纤维，最终完成肌肉的再生过程。因为这一特性，肌肉干细胞被广泛选为细胞培养肉种子细胞的首选来源。目前，诱导体外培养肌肉干细胞分化的常用的分化培养基配方是在DMEM基础培养基中加入2％马血清和1％双抗。研究表明，该分化培养基非常适用于哺乳动物肌肉干细胞的体外分化诱导，但是并不适用于鱼类肌肉干细胞的体外分化诱导。
[0004]因此，亟需研发一种可用于诱导鱼类肌肉干细胞快速分化的分化诱导培养基，这对于细胞培养鱼肉的发展是非常必要的。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种海水鱼类肌肉干细胞的分化诱导培养基，以用于快速有效地诱导体外培养海水鱼类肌肉干细胞的分化。
[0006]本专利技术首先提供一种用于海水鱼类肌肉干细胞体外分化的分化诱导培养基，该分化培养基是添加有2％间充质干细胞专用胎牛血清、维生素C、维生素D和胰岛素的L
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15基础培养基。
[0007]进一步的，所述海水鱼类肌肉干细胞分化诱导培养基中，维生素C浓度为100
‑
400μmol/L。
[0008]进一步的，所述海水鱼类肌肉干细胞分化诱导培养基中，维生素D浓度为50
‑
300nmol/L。
[0009]进一步的，所述海水鱼类肌肉干细胞分化诱导培养基中，胰岛素浓度为0.1
‑
10μg/mL。
[0010]进一步的，所述的分化诱导培养基中还添加有抗生素，作为实施例的一种具体记载，是添加1.0
×
105IU/L青霉素钠和100mg/L链霉素。
[0011]作为实施例的一种具体记载，所述的分化诱导培养基，是添加有终浓度为2％间充质干细胞专用胎牛血清、终浓度为200μmol/L的维生素C、终浓度为100nmol/L的维生素D和终浓度为10μg/mL的胰岛素的L
‑
15基础培养基。
[0012]进一步的，所述分化诱导培养基能够快速有效地诱导海水鱼类肌肉干细胞的分化。具体的，能够诱导海水鱼类肌肉干细胞在1
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3天内完成体外分化过程。
[0013]进一步的，所述分化诱导培养基能够促进海水鱼类肌肉干细胞中纤维状肌动蛋白的合成。
[0014]另一方面，本专利技术还提供了前述的用于诱导海水鱼类肌肉干细胞快速分化的分化诱导培养基的使用方法，包括以下几个步骤：
[0015]S1：分离得到海水鱼类肌肉干细胞。
[0016]S2：将海水鱼类肌肉干细胞接种到细胞培养板中，于鱼类肌肉干细胞培养基中培养，将海水鱼类肌肉干细胞培养至密度达到90％以上。
[0017]S3：吸去海水鱼类肌肉干细胞培养基，用PBS润洗一遍，加入所述的分化诱导培养基，继续培养，诱导海水鱼类肌肉干细胞的分化。
[0018]S4：每隔2天，用所述的分化诱导培养基对海水鱼类肌肉干细胞进行换液，继续培养，直至海水鱼类肌肉干细胞分化为成肌细胞，并相互融合形成肌管以及分化形成肌纤维。
[0019]进一步的，前述海水鱼类肌肉干细胞培养的环境条件为在28℃生化培养箱中进行培养。
[0020]应用本专利技术所提供的分化诱导培养基，能够成功地诱导海水鱼类肌肉干细胞的体外分化，解决了海水鱼类肌肉干细胞没有合适的体外诱导分化培养基的问题。与哺乳动物肌肉干细胞的分化相比，采用本专利技术所提供的分化诱导培养基，能够在更短的时间内诱导海水鱼类肌肉干细胞分化形成更多的多核肌管，更长更粗的肌纤维，表达更多的纤维状肌动蛋白，提高了海水鱼类肌肉干细胞的分化效率和分化能力。在3D培养条件下，该分化诱导培养基用于诱导海水鱼类肌肉干细胞生产细胞培养鱼肉时，能够生出品质更高的细胞培养鱼肉。
附图说明
[0021]图1：褐点石斑鱼肌肉干细胞的最佳分化诱导培养基的筛选结果图，其中，干细胞分别培养于8种分化培养基中，并分别分化1、2和3天。
[0022]图2：褐点石斑鱼肌肉干细胞在8种分化培养基中分别分化培养3天后的纤维状肌动蛋白(F
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actin)表达结果图，其中图A1
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H1是F
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actin荧光染色检测结果，图A2
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H2是DAPI染色结果，图A3
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H3是Merged结果。
[0023]图3：褐点石斑鱼肌肉干细胞在8种分化培养基中分别分化培养3天后的纤维状肌动蛋白表达结果的柱状图。其中，所有数据来源于图2中图版A1
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H1中的细胞内荧光强度的统计结果，以图2
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A1中的荧光强度作为对照。三个星号(***)代表极显著差异，ρ<0.001。ns代表无显著性差异。
具体实施方式
[0024]本专利技术首先提供一种用于海水鱼类肌肉干细胞体外分化的分化诱导培养基，该分
化培养基是添加有2％胎牛血清(间充质干细胞专用)、维生素C、维生素D和胰岛素的L
‑
15基础培养基；其中维生素C浓度为100
‑
400μmol/L，维生素D浓度为50
‑
300nmol/L，胰岛素浓度为0.1
‑
10μg/mL。
[0025]进一步的，所述的分化诱导培养基中还添加有抗生素，作为实施例的一种具体记载，是添加1.0
×
105IU/L青霉素钠和100mg/L链霉素。
[0026]另一方面，本专利技术还提供了前述的用于诱导海水鱼类肌肉干细胞快速分化的分化诱导培养基的使用方法，包括以下几个步骤：
[0027]S1：分离得到海水鱼类肌肉干细胞。
[0028]S2：将海水鱼类肌肉干细胞接种到细胞培养板中，于鱼类肌肉干细胞培养基中培养，将海水鱼类肌肉干细胞培养至密度达到90％以上。
[0029]S3：吸去海水鱼类肌肉干细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于海水鱼类肌肉干细胞体外分化的分化诱导培养基，其特征在于，所述的分化培养基是添加有2％间充质干细胞专用胎牛血清、维生素C、维生素D和胰岛素的L
‑
15基础培养基。2.如权利要求1所述的分化诱导培养基，其特征在于，所述的维生素C浓度为100
‑
400μmol/L。3.如权利要求1所述的分化诱导培养基，其特征在于，所述的维生素D浓度为50
‑
300nmol/L。4.如权利要求1所述的分化诱导培养基，其特征在于，所述的胰岛素浓度为0.1
‑
10μg/mL。5.如权利要求1所述的分化诱导培养基，其特征在于，所述的分化诱导培养基中还添加有抗生素。6.如权利要求5所述的分化诱导培养基，其特征在于，所述的添加有抗生素，是添加1.0
×
105IU/L青霉素钠和100mg/L链霉素。7.如权利要求1所述的分化诱导培养基，其特征在于，所述的分化诱导培养基是添加有终浓度为2％间充质干细胞专用胎牛血清、终浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭华荣，薛霆，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
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