一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法，涉及生物技术领域。该培养方法包括将加工型辣椒不易出胚基因型与加工型辣椒花培DH系杂交，获得杂交一代，再将所述杂交一代的花药进行花药培养的步骤。本发明专利技术以加工型辣椒花培DH系作为桥梁，与加工型辣椒不易出胚基因型进行杂交，以其杂交一代为花药培养的供体亲本，可以明显地提高加工型辣椒不易出胚基因型花药培养的出胚率。本发明专利技术提供的加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法，步骤实用、效率高，特别适合加工型辣椒细胞工程领域方面的应用。特别适合加工型辣椒细胞工程领域方面的应用。特别适合加工型辣椒细胞工程领域方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法。

技术介绍

[0002]辣椒(Capsicum annuum L.)是世界上一种重要的经济作物，可作为蔬菜、香料、食用色素和医药用途。2020年全球用于干制的辣椒种植面积已达161.5万公顷，产量达415.7万吨(http://www.fao.org/faostat/zh/#data/QC)。目前，便利的交通和经济的迅猛发展，加速了全球人口流动，导致嗜辣地区和人群越来越多。随着辣椒育种工作的深入开展，自然资源中辣椒种质已显现出匮乏和急剧衰退的趋势。因此，加快种质资源的创新效率是当前加工型辣椒育种工作者面临的亟待解决的问题。
[0003]花药培养能从细胞水平上快速创制单倍体植株，单倍体能在植株上较充分地呈现重组的配子类型，创制出新基因型植株，经秋水仙素加倍后可获得双单倍体纯系(Doubled Haploid,DH)。因此，通过花药培养可获得性状优良的、符合育种目标的DH系，根据育种目标进入常规育种程序，可直接作为育种的中间材料或亲本之一育成杂交品种。花药培养与南繁结合可以在1
‑
2年内快速获得DH系，较传统方法缩短3
‑
4年的时间，显著提高育种的效率。
[0004]有关辣椒花药培养的大量研究表明，供体植株的基因型对花药培养胚状体诱导的影响极为重要，不仅影响胚状体诱导率，而且也影响胚状体质量和成苗率(戈伟等,江苏农业科学,2011,39(5):27
‑
28、张芳等,西北农业学报,2009,18(5):341
‑
345、李健欣等,植物生理学通讯,2009,45(8):794
‑
796)。申请号为200610042616.0的中国专利技术专利申请中公开了一种辣椒小孢子诱导获得胚状体的培养方法，主要涉及实行液固双层培养系统，采用麦芽糖作为碳源，低温处理，连续黑暗培养，以此方法提高胚状体的诱导效率。加工型辣椒花药培养近年来也取得了一定的成就，李怡斐等(分子植物育种,2020,18(19):6467
‑
6473)、李怡斐等(分子植物育种，2017,15(06):2317
‑
2321)、李怡斐等(中国园艺学会2018年学术年会会议论文集)通过辣椒花药培养创制了一些优异的DH系。但是由于加工型辣椒花药培养胚状体诱导率低，对不易出胚基因型效果更不理想，这极大地限制了加工型辣椒花药培养技术在育种上的应用。因此，寻找一种提高加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术提供的培养方法可以有效提高加工型辣椒不易出胚基因型花药培养的出胚率。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法，包
括将加工型辣椒不易出胚基因型与加工型辣椒花培DH系杂交，获得杂交一代，再将所述杂交一代的花药进行花药培养的步骤。
[0008]进一步地，所述辣椒花培DH系为渝辣选7
‑
1或渝辣选3
‑
2。
[0009]进一步地，所述杂交一代的花药进行花药培养的步骤包括：将所述花药接种于1
#
培养基或2
#
培养基进行培养；
[0010]所述1
#
培养基为MS培养基+0.50mg/L 6
‑
BA+4mg/LAgNO3+4g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.50mg/L 2,4
‑
D+10g/L椰子汁，pH＝5.8；
[0011]所述2
#
培养基为MS培养基+0.50mg/L 6
‑
BA+4mg/LAgNO3+4g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.30mg/L 2,4
‑
D，pH＝5.8。
[0012]进一步地，所述花药的培养条件包括：先在35℃条件下黑暗培养5天，然后在28
±
0.5℃条件下黑暗培养30
‑
40天。
[0013]进一步地，所述杂交一代的花药进行花药培养的步骤包括：先将所述花药接种于1
#
培养基进行培养，再转接于2
#
培养基继续进行培养；
[0014]所述1
#
培养基为MS培养基+0.50mg/L 6
‑
BA+4mg/LAgNO3+4g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.50mg/L 2,4
‑
D+10g/L椰子汁，pH＝5.8；
[0015]所述2
#
培养基为MS培养基+0.50mg/L 6
‑
BA+4mg/LAgNO3+4g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.30mg/L 2,4
‑
D，pH＝5.8。
[0016]进一步地，所述花药先在1
#
培养基中培养15天，再转接于2
#
培养基。
[0017]进一步地，所述花药在所述1
#
培养基中，先在35℃条件下黑暗培养5天，然后在28
±
0.5℃条件下黑暗培养10天。
[0018]进一步地，所述花药在所述2
#
培养基中的培养条件包括：28
±
0.5℃条件下黑暗培养20
‑
30天。
[0019]本专利技术公开了以下技术效果：
[0020]本专利技术以加工型辣椒花培DH系作为桥梁，与加工型辣椒不易出胚基因型进行杂交，以其杂交一代为花药培养的供体亲本，可以明显地提高加工型辣椒不易出胚基因型的出胚率。本专利技术推测来自花药培养诱导出的胚状体获得的花培DH系携带易出胚基因，以加工型辣椒花培DH系与加工型辣椒不易出胚基因型的杂交一代为供体亲本进行花药培养，提高了加工型辣椒不易出胚基因型的出胚率，打破了基因型的限制。
[0021]本专利技术发现，接种花药后，先35℃黑暗处理5天，然后转至28
±
0.5℃的组织培养室黑暗培养10天，随后于超净工作台，将已培养的花药更换至2,4
‑
D浓度稍低的2
#
培养基，继续于组织培养室黑暗培养，可以极大地提高胚状体的诱导效率，最高达19.33％，且胚状体发育正常，成苗率高(93.10％)。
[0022]本专利技术提供的加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法，步骤实用、效率高，特别适合加工型辣椒细胞工程领域方面的应用。
附图说明
[0023]为了更清楚地说本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种加工型辣椒不易出胚基因型花药培养获得胚状体的培养方法，其特征在于，包括将加工型辣椒不易出胚基因型与加工型辣椒花培DH系杂交，获得杂交一代，再将所述杂交一代的花药进行花药培养的步骤。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述加工型辣椒花培DH系为渝辣选7
‑
1或渝辣选3
‑
2。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述杂交一代的花药进行花药培养的步骤包括：将所述花药接种于1
#
培养基或2
#
培养基进行培养；所述1
#
培养基为MS培养基+0.50mg/L6
‑
BA+4mg/LAgNO3+4g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.50mg/L2,4
‑
D+10g/L椰子汁，pH＝5.8；所述2
#
培养基为MS培养基+0.50mg/L6
‑
BA+4mg/LAgNO3+4g/L活性炭+30g/L蔗糖+7g/L琼脂+0.30mg/L2,4
‑
D，pH＝5.8。4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述花药的培养条件包括：先在35℃条件下黑暗培养5天，然后在28
±
0.5℃条件下黑暗培养30
‑
40天。5.根据权利要求1所述的培养方...

【专利技术属性】
技术研发人员：李怡斐，张世才，杨小苗，蒋晓英，王春萍，段敏杰，黄启中，黄任中，
申请(专利权)人：重庆市农业科学院，
类型：发明
国别省市：