一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及干细胞培养技术领域，具体涉及一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用。将原代脐带间充质干细胞进行传代培养，将传代培养后的脐带间充质干细胞进行3D细胞培养，获得3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液；取人体枕部毛发制备原代毛囊干细胞，将原代毛囊干细胞进行传代培养，然后进行细胞裂解，获得毛囊干细胞裂解物溶液；将3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液、毛囊干细胞裂解物溶液、生姜发酵液和迷迭香发酵液按照质量比10～20:10～15:1～3:2～4混合均匀。本发明专利技术提供的外泌体复合制剂能够提高毛囊活性，刺激毛囊再生，增强毛囊细胞的分化能力，使毛囊进入生长期，从而能够显著改善脱发问题。从而能够显著改善脱发问题。从而能够显著改善脱发问题。

【技术实现步骤摘要】
一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及干细胞培养
，具体涉及一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]毛发脱落最关键的器官是毛囊，脱发的直接原因在于毛囊的退化，处于休止期，毛囊萎缩，毛囊细胞逐渐凋亡，导致头发脱落。因此，恢复毛囊活性，刺激毛囊再生尤为关键。目前治理脱发中医治疗如中医中的针灸治疗，但是中医治理较慢，过程麻烦，导致副作用累积。西医可以快速治疗，但是西医很多方面受到限制，如药物依赖性强，停药容易导致脱发复发。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用，本专利技术提供的外泌体复合制剂能够提高毛囊活性，刺激毛囊再生，增强毛囊细胞的分化能力，使毛囊进入生长期，从而能够显著改善脱发问题。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0006]一方面，一种用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0007]3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液的制备：将原代脐带间充质干细胞进行传代培养，将传代培养后的脐带间充质干细胞进行3D细胞培养，获得3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液；
[0008]毛囊干细胞裂解物溶液的制备：取人体枕部毛发制备原代毛囊干细胞，将原代毛囊干细胞进行传代培养，然后进行细胞裂解，获得毛囊干细胞裂解物溶液；
[0009]将3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液、毛囊干细胞裂解物溶液、生姜发酵液和迷迭香发酵液按照质量比10～20:10～15:1～3:2～4混合均匀。
[0010]另一方面，一种用于改善脱发的外泌体复合制剂，由上述制备方法获得。
[0011]第三方面，一种上述用于改善脱发的外泌体复合制剂在制备防脱发的产品中的应用。
[0012]本专利技术的有益效果是：
[0013]本专利技术外泌体复合制剂中采用本专利技术制备的3D培养脐带间充质干细胞外泌体和毛囊干细胞裂解物及胶原蛋白，既能够为生长期毛囊细胞提供营养物质，又能够促进毛囊干细胞的分化，提高毛囊活跃度，刺激退行期及休止期的毛囊向生长期转化，再添加刺激头皮血管，增强局部血液循环的生姜发酵液，富含大量的抗氧化剂，对抗自由基的迷迭香发酵液以及氨基酸与多种维生素，从而促进头皮毛囊周围血管的循环和形成，进而达到更好的
生发固发效果。
附图说明
[0014]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0015]图1为本专利技术实施例实施例4组小鼠相对于空白对照和对比例1～3组小鼠的毛囊形态图，a为空白组，b为实施例4组，c为对比例1组，d为对比例2组，e为对比例3组。
具体实施方式
[0016]应该指出，以下详细说明都是示例性的，旨在对本专利技术提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属
的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0017]需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本专利技术的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。
[0018]鉴于现有药物难以改善脱发问题，本专利技术提出了一种用于改善脱发的外泌体复合制剂及其制备方法与应用。
[0019]本专利技术的一种典型实施方式，提供了一种用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，包括如下步骤：
[0020]3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液的制备：将原代脐带间充质干细胞进行传代培养，将传代培养后的脐带间充质干细胞进行3D细胞培养，获得3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液；
[0021]毛囊干细胞裂解物溶液的制备：取人体枕部毛发制备原代毛囊干细胞，将原代毛囊干细胞进行传代培养，然后进行细胞裂解，获得毛囊干细胞裂解物溶液；
[0022]将3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液、毛囊干细胞裂解物溶液、生姜发酵液和迷迭香发酵液按照质量比10～20:10～15:1～3:2～4混合均匀。
[0023]在一些实施例中，采用无血清培养基对原代脐带间充质干细胞重悬并进行培养，然后消化细胞并进行传代培养。当细胞融合度达到80～90％时，消化细胞并进行传代培养。无血清培养基优选为αMEM或DMEM/F12，包含氨基酸、维生素、葡萄糖、核苷、无机盐等。
[0024]在一些实施例中，收集第3代及以上脐带间充质干细胞，加入微载片进行3D细胞培养。所述加入微载体的数量按45～50万细胞/片进行投放。
[0025]在一些实施例中，3D细胞培养过程中，培养当天进行间隔启动模式进行培养，第二天开始改用恒速模式进行培养。间隔启动模式中，先在30～40rpm的转速条件下培养4～6min，然后在0rpm的转速条件下培养55～65min，进行若干次循环。恒速模式进行培养中，转速为35～45rpm。
[0026]在一些实施例中，将3D细胞培养的上清液进行离心处理，将离心处理获得的清液进行超速离心法提取3D培养脐带间充质干细胞外泌体。
[0027]在一些实施例中，采用DPBS重悬3D培养脐带间充质干细胞外泌体沉淀获得3D培养
脐带间充质干细胞外泌体溶液。3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液的浓度优选为8～18mg/mL。
[0028]3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液的制备，优选过程如下：
[0029](a)获取健康供者新鲜脐带，剥离华通氏胶，切成大小均一的组织块，加培养基，得到原代脐带间充质干细胞；
[0030](b)采用无血清培养基对原代脐带间充质干细胞重悬并进行培养，待细胞融合度达到80％
‑
90％后，消化细胞进行传代培养；
[0031](c)收集第3代脐带间充质干细胞悬液计数，加入微载片，进行3D动态培养，当天计为Day0；
[0032](d)3D动态培养Day0选用间隔启动模式，Day1改用恒速模式；
[0033](e)收集Day4的3D培养上清液，离心去除3D微载体和细胞碎片，获得的上清液采用超速离心法提取脐带间充质干细胞外泌体；
[0034](f)采用DPBS重悬3D培养脐带间充质干细胞外泌体沉淀，获得所述3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液。
[0035]在一些实施例中，将人体枕部毛发的毛囊组织进行消化、离心，获得原代毛囊干细胞。
[0036]在一些实施例中，采用无血清培养基对原代毛囊干细胞进行培养，然后消化细胞并进行传代培养。当本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，其特征是，包括如下步骤：3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液的制备：将原代脐带间充质干细胞进行传代培养，将传代培养后的脐带间充质干细胞进行3D细胞培养，获得3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液；毛囊干细胞裂解物溶液的制备：取人体枕部毛发制备原代毛囊干细胞，将原代毛囊干细胞进行传代培养，然后进行细胞裂解，获得毛囊干细胞裂解物溶液；将3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液、毛囊干细胞裂解物溶液、生姜发酵液和迷迭香发酵液按照质量比10～20:10～15:1～3:2～4混合均匀。2.如权利要求1所述的用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，其特征是，采用无血清培养基对原代脐带间充质干细胞重悬并进行培养，然后消化细胞并进行传代培养；优选地，细胞融合度达到80～90％，消化细胞并进行传代培养；无血清培养基优选为αMEM或DMEM/F12。3.如权利要求1所述的用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，其特征是，3D细胞培养过程中，培养当天进行间隔启动模式进行培养，第二天开始改用恒速模式进行培养；优选地，间隔启动模式中，先在30～40rpm的转速条件下培养4～6min，然后在0rpm的转速条件下培养55～65min，进行若干次循环；优选地，恒速模式进行培养中，转速为35～45rpm。4.如权利要求1所述的用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，其特征是，将3D细胞培养的上清液进行离心处理，将离心处理获得的清液进行超速离心法提取3D培养脐带间充质干细胞外泌体；或，采用DPBS重悬3D培养脐带间充质干细胞外泌体沉淀获得3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液；优选地，3D培养脐带间充质干细胞外泌体溶液的浓度优选为8～18mg/mL。5.如权利要求1所述的用于改善脱发的外泌体复合制剂的制备方法，其特征是，采用无血清培养基对原代毛囊干细胞进行培养，然后消化细胞并进行传代培养；优选地，细胞融合度达80～90％时，消化细胞进行传代培养。6.如权利要求1所述的用于改善脱发的外泌体复合制剂的...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢来田，于娜，邢艳秋，邹姣蕊，张文华，冯军超，孟震晓，王彩人，杨冬霞，郜玉霞，邵石丽，
申请(专利权)人：山东京济生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：