一种高地芽孢杆菌YLB2-1及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物学技术领域，具体涉及的是一种高地芽孢杆菌YLB2

【技术实现步骤摘要】
一种高地芽孢杆菌YLB2
‑
1及其应用


[0001]本专利技术属于微生物学
，具体涉及一种高地芽孢杆菌YLB2
‑
1及其应用。

技术介绍

[0002]硒在自然界中主要以四种形态存在，分别是硒化物(Se2‑
)、单质硒(Se0)、亚硒酸盐(SeO
32
‑
)和硒酸盐(SeO
42
‑
)，而各种形态之间的价态的转化都与微生物息息相关。土壤中的硒安全值范围为0.1
‑
3.0μg/g，小于或大于此值都会导致动物和人体出现明显的缺硒病或硒中毒病。近年来，硒污染问题全球屡见不鲜，硒污染地区的环境修复成为了研究的热点。
[0003]高硒环境是耐硒微生物菌种的潜在来源，研究表明高硒环境胁迫下细菌产生应激反应，将毒性较高的无机硒转化为毒性较低的硒单质。彭祚全等与王明义等曾经从湖北恩施富硒土壤中筛选出耐硒菌株，并能在含硒培养基中将无机硒还原为红色单质硒，在治理环境硒污染方面具有重要意义。
[0004]目前，国内对硒的研究主要集中于硒在土壤中的行为、植物富硒以及纳米硒材料，而对富硒土壤中的微生物研究较少，为此专利技术人从广西富硒地区采集土壤样品，对耐硒菌株进行鉴定，并进行耐硒菌株对硒的转化率测定，以期从微生物方向为硒资源的开发利用提供菌种资源。
[0005]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种高地芽孢杆菌YLB2
‑
1及其应用。
[0007]本专利技术提供的高地芽孢杆菌YLB2
‑
1是从广西玉林市寒山土壤中分离得来，经形态学和分子生物学鉴定为高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)，于2022年6月8日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，(简称GDMCC，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，邮编：510070)，保藏号为GDMCC No.62524。
[0008]另外，本专利技术提供的高地芽孢杆菌YLB2
‑
1的16S rRNA序列如SEQ ID No.1所示。
[0009]本专利技术还提供了所述的高地芽孢杆菌YLB2
‑
1在转化环境中硒的用途。
[0010]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：
[0011]本专利技术利用稀释平板法进行耐硒菌株筛选，通过形态学观察及16S rRNA序列测序对耐硒菌株进行鉴定，并进行耐硒菌株对硒的转化率测定。获得的YLB2
‑
1鉴定为芽孢杆菌属(Bacillus)；对硒的转化率研究中，YLB2
‑
1菌株于4μg/mL硒浓度下，对环境中硒的转化率达到最高为81.53％。该结果可为硒污染地区生物修复提供菌种资源，为硒资源的开发利用提供参考。
[0012]保藏信息说明
[0013]Bacillus altitudinis YLB2
‑
1，保藏编号为GDMCC No.62524，保藏日期为2022年6月8日，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址为广州市先烈中路100
号大院59号楼5楼。
附图说明
[0014]图1为本专利技术耐硒菌株YLB2
‑
1形态；
[0015]图2为本专利技术耐硒菌株YLB2
‑
1革兰氏染色镜检；
[0016]图3为本专利技术分离出的部分菌落PCR产物凝胶电泳图；
[0017]图4为本专利技术耐硒菌株YLB2
‑
1的16S rRNA基因序列系统发育树；
[0018]图5为本专利技术耐硒菌株YLB2
‑
1的生长曲线图；
[0019]图6为本专利技术耐硒菌株YLB2
‑
1在不同硒浓度下的硒转化率；
[0020]有关附图标记的说明：
[0021]图3中，Marker：Marker DL2000；1
‑
3：部分菌株的PCR产物，其中3为菌株YLB2
‑
1的PCR产物。
具体实施方式
[0022]下面结合具体的实施例对本专利技术做进一步的详细说明，所述是对本专利技术的解释而不是限定。
[0023]下述实施例中所用的材料和试剂，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0024]实施例
[0025]1.材料与方法
[0026]1.1材料
[0027]1.1.1筛菌土壤
[0028]筛菌土壤采自广西玉林市寒山富硒土壤样品。供试土壤采用五点混合法采集0
‑
20cm地表土，去除表面杂质后放入无菌自封袋中置于冰盒保存，当天带回实验室放入4℃冰箱保存备用，土壤理化性质如表1所示。
[0029]表1玉林富硒土壤理化性质和硒含量
[0030][0031]1.1.2培养基
[0032]液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1L，pH 7.4
‑
7.6。
[0033]固体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1L，琼脂15g，pH 7.4
‑
7.6。
[0034]1.1.3硒溶液的配置
[0035]称取22.35g亚硒酸钠，用去离子水定容至100mL，即得到的溶液硒浓度为100mg/mL，使用0.22μm的无菌滤头进行过滤备用。
[0036]1.2土壤微生物的分离纯化
[0037]称取10g土壤放入装有10颗玻璃珠以及90mL的无菌水的三角瓶中。30℃，200r/
min，震荡30min，静置5min收集土壤悬液于5000r/min离心15min，沉淀用10mL无菌水悬浮。取2mL悬液加入到100mL含硒浓度为100μg/mL的液体培养基中，30℃，200r/min震荡培养2d筛选，然后用梯度稀释法制备成10
‑2‑
10
‑6的稀释液，取100μL的稀释液分别涂布到固体培养基中，于30℃进行培养，细菌培养1d。挑取颜色、形态、大小、光泽不同的单个菌落，采用平板划线法进行3次重复分离纯化，获得菌株纯培养物并用甘油进行保藏。
[0038]1.3耐硒菌株的筛选
[0039]将分离纯化得到的菌株接种到液体培养基中，培养24h后，取5μL培养液接种到不同含硒浓度的固体培养基中。细菌的含硒固体培养基中的硒浓度以1000μg/mL的梯度递增进行筛选，经耐硒平板筛选，获得一株耐硒浓度达11000μg/mL的菌株。
[0040]1.4耐硒菌株形态观察
[0041]对耐硒菌株的单菌落进行显微观察拍照，并且对菌落的形态结构进行描述。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种高地芽孢杆菌YLB2
‑
1，其分类学名高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)，于2022年6月8日保藏于广东省微生...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖青，梁潘霞，邢颖，黄太庆，江泽普，刘永贤，潘丽萍，陈锦平，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：