一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法技术

本发明专利技术属于基因编辑技术领域，具体涉及一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法，该方法通过构建含有Cas9基因和FT基因的重组载体，以及含有sgRNA基因和FT基因的重组载体，转化菌株，按照pEAQ

【技术实现步骤摘要】
一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法


[0001]本专利技术属于基因编辑
，具体涉及一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法。

技术介绍

[0002]近几年，一系列的文章报道碳纳米管和纳米片及DNA纳米结构通过表面接枝或封装策略将DNA和RNA生物大分子能通过植物细胞壁递送植物细胞内，从而避免使用外力和组织损伤，这是植物遗传转化中重要的进展。将DNA纳米结构递送生物大分子到植物细胞内是继碳纳米管后又一重要进展。这些研究确定了利用碳纳米管或DNA纳米结构可将生物大分子递送到植物细胞内的可行性。以上实验证实了利用纳米材料为载体进行无组织培养的转基因及植物基因编辑在某种程度上是可行的。然而，如何将转基因或基因编辑能稳定遗传到下一代仍然是需要解决的问题。
[0003]烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默(TRV
‑
VIGS)，是目前应用最为广泛的一类基因沉默体系。该方法是将目的基因插入TRV病毒载体中，制备重组载体，然后转化农杆菌，再接种植物，之后该病毒可扩散到受体的根、茎、叶等器官本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因编辑系统，其特征在于，所述基因编辑系统包括表达载体，所述表达载体主要包括含有Cas9基因和FT基因的重组载体，以及含有sgRNA基因和FT基因的重组载体；优选的，所述含有Cas9基因和FT基因的重组载体，其所用空载体为pEAQ
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HT，可在植物体内完成瞬时表达，所述含有sgRNA基因和FT基因的重组载体，其所用空载体为TRV载体。2.一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法，其特征在于，构建权利要求1所述的基因编辑系统，转化菌株，接种到目的植株中，即可；优选的，所述转化菌株为农杆菌；优选的，所述目的植株为烟草。3.一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法，其特征在于，向目的植株中分别导入含有Cas9基因和FT基因的重组载体、含有sgRNA基因和FT基因的重组载体以及TRV1载体。4.根据权利要求2或3所述的一种病毒诱导的非转基因的基因编辑方法，其特征在于，包括如下具体步骤：步骤1，pEAQ
‑
HT
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Cas9
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FT重组载体的构建：首先分别扩增Cas9基因和FT基因，连接到pEAQ
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HT质粒上，经转化测序验证后提取，得重组载体pEAQ
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HT
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Cas9
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FT；步骤2，TRV
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sgRNA
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FT重组载体的构建：首先针对目的基因的靶点设计sgRNA序列，扩增后连接到TRV载体上，经转化测序验证后提取，得TRV
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sgRNA；再扩增FT基因，连接到TRV
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sgRNA，转化测序验证后提取得重组载体TRV
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sgRNA
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FT；步骤3，侵染烟草：将步骤1和步骤2得到的重组载体转染农杆菌，得含pEAQ
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HT
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Cas9
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FT的菌体与含TRV
...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翠翠，
申请(专利权)人：北京电子科技职业学院，
类型：发明
国别省市：