NADH依赖型7β-羟基类固醇脱氢酶突变体、编码序列、基因工程菌及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种NADH依赖型7β

【技术实现步骤摘要】
NADH依赖型7
β
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羟基类固醇脱氢酶突变体、编码序列、基因工程菌及应用


[0001]本专利技术属于基因工程及酶工程领域，具体涉及一种NADH依赖型7β
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羟基类固醇脱氢酶突变体、编码序列、重组表达载体、基因工程菌及它们在制备熊去氧胆酸、牛磺熊去氧胆酸、熊胆酸和12
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酮
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熊去氧胆酸中的应用。

技术介绍

[0002]熊去氧胆酸(UDCA)是名贵中药——“熊胆粉”的主要有效成分，目前已应用于治疗各种肝胆疾病，帕金森症甚至用于新冠的辅助治疗，具有明显的疗效。UDCA传统的制备方法是采用“活熊引流法”从熊的胆囊中插入导管提取，但这种方法手段过于残忍有违动物保护法且产物收率低，导致UDCA价格昂贵，无法大规模工业应用。
[0003]当前，工业上生产UDCA和T
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UDCA主要有化学和酶法合成，其中化学合成法是通过七步反应且需要使用大量有毒试剂合成的，这导致其成本高，“三废”严重和条件苛刻等；而酶法具有成本较低、工艺简单、绿色无污染及反应条件温和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种NADH依赖型7β
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羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体是在氨基酸序列SEQ ID NO.2所示的NADH依赖型7β
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羟基类固醇脱氢酶的第94位、第95位、第191位中的至少一个位点进行突变得到的。2.根据权利要求1所述的NADH依赖型7β
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羟基类固醇脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体为以下任一种：(a)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸突变成缬氨酸，该突变体命名为Cle7β
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1A；(b)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位的丙氨酸均突变成缬氨酸，该突变体命名为Cle7β
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1B；(c)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为Cle7β
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1C；(d)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸和第95位的丙氨酸均突变成缬氨酸，该突变体命名为Cle7β
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2A；(e)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸突变成缬氨酸和第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为Cle7β
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2B；(f)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第95位的丙氨酸突变成缬氨酸和第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为Cle7β
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2C；(g)将具有SEQ ID NO.2所示氨基酸序列第94位的异亮氨酸和第95位的丙氨酸均突变成缬氨酸，第191位的丙氨酸突变成苏氨酸，该突变体命名为Cle7β
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3。3.一种编码NADH依赖型7β
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羟基类固醇脱氢...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾伟民，黄斌，邱冠周，杨凯，刘学端，周洪波，刘阿娟，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：