一种奶山羊Zfy基因干扰片段与一种表达载体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种奶山羊Zfy基因干扰片段与一种表达载体及其应用，属于动物繁殖学技术领域。本发明专利技术提供了一种奶山羊Zfy基因干扰片段，所述奶山羊Zfy基因干扰片段的序列如SEQ ID NO.1～2所示。利用本发明专利技术的Zfy基因干扰片段，对奶山羊Zfy基因的表达进行人为干扰，使Y精子的生成和发育受阻，活力下降，但是对X精子的发育和活力没有影响，从而为X精子创造更多的受精机会，使子一代的母羔比例增加。而且成本低廉、使用方便。为奶山羊的进一步应用提供理论基础。基础。基础。

【技术实现步骤摘要】
一种奶山羊Zfy基因干扰片段与一种表达载体及其应用


[0001]本专利技术涉及动物繁殖学
，尤其涉及一种奶山羊Zfy基因干扰片段与一种表达载体及其应用。

技术介绍

[0002]动物的性别控制(sex control)是指通过对动物的正常生殖过程进行人为干预，使成年雌性动物产出人们期望性别后代的一门生物技术。动物性别控制的意义重大，主要在于：(1)提高畜牧业生产效益；(2)生产具有利用价值的性别的动物(一般雌性动物的利用价值要高于雄性动物)；(3)避免胚胎移植过程中异性胚胎导致的孪生不育；(4)提高选种强度；(5)预防伴性遗传病的发生等。
[0003]对动物性别控制的相关研究早在多年前就已经开始。目前国内外家畜进行性别控制的方法主要有三种:(1)分离X精子与Y精子。通过X、Y精子微弱的生物学差异，分离出含两种不同染色体的精子，目前主要采用物理分离法，如采用流式细胞分离仪分离精子的准确率可达到90％，但其分离速度太慢(18mil
‑
lion/h)，且精液价格昂贵，分离后精液不耐冷冻，精子死亡率较高，因而在生产应用上受到限制；(2)胚胎的性别鉴定。胚胎性别鉴定主要是通过鉴定胚胎的性别，从而人工干预出生的性别比例。早期胚胎性别鉴定方法主要有细胞学方法、免疫学方法、分子生物学方法、PCR扩增法、雄性特异性DNA探针法等，但从胚胎上切取部分细胞而后经冷冻、解冻会对胚胎造成一定的损害使胚胎移植的成功率下降，同时劣质胚胎的性别鉴定成功率更低，这就制约了提供预知性别家畜胚胎的商业化进程；(3)控制家畜受精的外部环境。家畜外部环境中的某些因素也是性别决定机制的重要条件，主要包括营养、体液酸碱度、温度、输精时间、年龄胎次、激素水平等。但决定动物性别的因素主要是动物体的内部因素，采用控制外部环境的方法来控制出生动物性别，随机性大，不稳定，且不易控制。如今，随着科学技术水平的发展，从基因水平研究性别控制已经成为一种新的方向，同时随着基因技术的日趋成熟，基因技术的成本也大幅下降，使其在生产应用中大规模推广成为了一种可能。
[0004]RNA干扰(RNAInterference)是一种转录后水平的基因沉默现象，是通过体外人工合成双链RNA或体内的双链RNA在细胞内特异性降解其同源mRNA，使相应的基因沉默，达到阻止基因表达的目的，并非转基因，且具有特异、高效、易于操作等优点。
[0005]Zfy基因位于哺乳动物Y染色体上，负责编码一个大的酸性链锌指蛋白上的12～13个转录因子的特异性基因。Zfy基因具有特定的核定位信号区域和DNA结合位点，能够特异性的与靶基因结合，定向引导靶基因穿过核膜，定位于精子细胞核内，其编码蛋白作为转录调控因子，与Y精子的发育相关。通过RNA干扰技术，沉默Zfy基因是实现性别控制的可行途径。但是现有技术通过沉默Zfy基因能够实现性别控制的动物并不包括奶山羊。因此为了提高奶山羊的利用效率研究一种利用沉默Zfy基因实现控制奶山羊性别的方法势在必行。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种奶山羊Zfy基因干扰片段与一种表达载体及其应用。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了一种奶山羊Zfy基因干扰片段，所述奶山羊Zfy基因干扰片段的序列如SEQ ID NO.1～2所示。
[0009]本专利技术还提供了所述的奶山羊Zfy基因干扰片段在制备用于沉默奶山羊精子细胞中的Zfy基因的制剂中的应用。
[0010]本专利技术还提供了所述的奶山羊Zfy基因干扰片段在制备用于控制奶山羊性别的药剂中的应用。
[0011]本专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体包括所述的奶山羊Zfy基因干扰片段以及空载载体。
[0012]作为优选，所述空载载体为pGPU6/GFP/Neo。
[0013]本专利技术还提供了所述的表达载体在制备用于沉默奶山羊精子细胞中的Zfy基因的制剂中的应用。
[0014]本专利技术还提供了所述的表达载体在制备用于控制奶山羊性别的药剂中的应用。
[0015]本专利技术提供了一种奶山羊Zfy基因干扰片段与一种表达载体及其应用。本专利技术提供的RNA干扰片段，对奶山羊Zfy基因的表达进行人为干扰，使Y精子的生成和发育受阻，活力下降，但是对X精子的发育和活力没有影响，从而为X精子创造更多的受精机会，使子一代的母羔比例增加。本专利技术在受精前有效控制了后代性别，达到了控制后代奶山羊性别的目的，而且成本低廉、使用方便。为奶山羊的进一步应用提供理论基础。
附图说明
[0016]图1为pGPU6/GFP/Neo空载载体图谱。
[0017]图2为生精细胞中Zfy/Zfx基因mRNA表达水平。
具体实施方式
[0018]本专利技术提供了一种奶山羊Zfy基因干扰片段，所述奶山羊Zfy基因干扰片段的序列如SEQ ID NO.1～2所示。
[0019]在本专利技术中，所述奶山羊Zfy基因干扰片段的正义链的序列如SEQ ID NO.1所示，具体为5'
‑
CACCGTGCTCAGATATCTTAGAATTCAAGAGATTCTAAGATATCTGAGCACTTTTTTG
‑
3'；反义链的序列如SEQ ID NO.2所示，具体为5'
‑
GATCCAAAAAAGTGCTCAGATATCTTAGAATCTCTTGAATTCTAAGATATCTGAGCAC
‑
3'。
[0020]在本专利技术中，所述奶山羊Zfy基因干扰片段为一个短发夹RNA(shRNA)，shRNA的DNA模板中的loop结构的核苷酸序列为TTCAAGAGA以避免形成终止信号，shRNA的转录终止序列采用T6结构。正义链模板的5
’
端的核苷酸序列为CACC，与BbsI酶切后形成的粘端互补；反义链模板的5
’
端的核苷酸序列为GATC，与BamHI酶切后形成的粘端互补。
[0021]在本专利技术中，所述shRNA是在siRNA片段的基础上进行构建得到的。如果siRNA的第一个碱基不是G，则在CACC后补加一个G。对每个siRNA片段的5
’
和3
’
添加酶切位点，loop环及终止序列。
[0022]本专利技术还提供了所述的奶山羊Zfy基因干扰片段在制备用于沉默奶山羊精子细胞中的Zfy基因的制剂中的应用。
[0023]本专利技术还提供了所述的奶山羊Zfy基因干扰片段在制备用于控制奶山羊性别的药剂中的应用。
[0024]本专利技术还提供了一种表达载体，所述表达载体包括所述的奶山羊Zfy基因干扰片段以及空载载体。
[0025]在本专利技术中，所述空载载体为pGPU6/GFP/Neo。
[0026]本专利技术还提供了所述的表达载体在制备用于沉默奶山羊精子细胞中的Zfy基因的制剂中的应用。
[0027]本专利技术还提供了所述的表达载体在制备用于控制奶山羊性别的药剂中的应用。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种奶山羊Zfy基因干扰片段，其特征在于，所述奶山羊Zfy基因干扰片段的序列如SEQ ID NO.1～2所示。2.权利要求1所述的奶山羊Zfy基因干扰片段在制备用于沉默奶山羊精子细胞中的Zfy基因的制剂中的应用。3.权利要求1所述的奶山羊Zfy基因干扰片段在制备用于控制奶山羊性别的药剂中的应用。4.一种表达载体，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾斌，吕毅航，高哈尔，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：