一种磁珠磁损率的测定方法技术

本发明专利技术涉及磁微粒化学发光免疫检测技术领域，具体公开一种磁珠磁损率的测定方法。所述测定方法包括以下步骤：构建具有磁珠浓度梯度的标准液；测定每种磁珠浓度下的标准液的光密度，并绘制磁珠浓度

【技术实现步骤摘要】
一种磁珠磁损率的测定方法


[0001]本专利技术涉及磁微粒化学发光免疫检测
，尤其涉及一种磁珠磁损率的测定方法。

技术介绍

[0002]化学发光免疫分析法(Chemiluminescence immunoassay,简称：CLIA)领域中，磁微粒化学发光免疫分析法因其具有高灵敏和高特异性等特点，在兽医、医学及食品分析检测和科学研究的痕量或者超痕量的非同位素免疫检测具有广泛的应用。磁微粒(或者磁珠)是磁微粒化学发光免疫分析法中核心的反应元件，用于包被抗原或者抗体，每个测试反应中需使用固定含量的磁微粒或者磁珠，通常的用量在5μg/test～50μg/test。
[0003]在磁微粒化学发光免疫分析过程中，需进行至少一次磁微粒分离清洗，以去除多余的反应物或者杂质。但是，在清洗过程中往往会有磁微粒的损失，磁微粒的损失会导致有效反应降低，造成检测结果不可靠。现有技术通过流式细胞仪或颗粒计数器来检测每个磁微粒化学发光免疫分析过程中的磁损率(反应前后磁微粒损失的百分比)，通过磁损率的测定，来辅助判断检测结果的可靠性。但是，无论是流式细胞仪检测还是颗粒计数器检测，都存在以下缺陷：
[0004](1)检测过程繁琐、效率低下。具体表现为，一方面，流式细胞仪或者颗粒计数器的通量和自动化程度较低，每次都只能测一个样本，且需要对磁珠进行逐个计数；另一方面，需要对磁微粒进行稀释以避免直接上机检测时磁微粒聚集而导致测量精度下降。
[0005](2)成本高。流式细胞仪或者颗粒计数器价格昂贵，设备的投入会使得检测成本较高。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种磁珠磁损率的测定方法，以解决现有的检测方法繁琐、效率不高以及成本高昂等问题。
[0007]为实现上述技术目标，采用如下的技术方案：
[0008]一种磁珠磁损率的测定方法，包括以下步骤：
[0009]构建具有磁珠浓度梯度的标准液；
[0010]测定每种磁珠浓度下的所述标准液的光密度；
[0011]根据所述磁珠浓度和所述光密度，绘制磁珠浓度
‑
光密度标准曲线；
[0012]对待测样本进行磁分离洗涤，并测定经所述磁分离洗涤后的所述待测样本的光密度；
[0013]将所述待测样本的光密度代入所述磁珠浓度
‑
光密度标准曲线，得到所述待测样本的磁珠浓度；
[0014]由所述待测样本的磁珠浓度计算得到所述待测样本的磁珠量；
[0015]将所述待测样本的磁珠量与所述待测样本在磁分离洗涤前加入的磁珠总量进行
比较，得到磁损率；
[0016]其中，所述待测样本中含有的磁珠种类与所述磁珠浓度
‑
光密度标准曲线的磁珠种类相同。
[0017]优选地，所述磁分离洗涤包括将所述待测样本置于洗液中进行洗涤，所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠和吐温20；
[0018]或者，所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠、吐温20和聚乙二醇辛基苯基醚。
[0019]优选地，当所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠和吐温20时，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10mM～20mM、所述氯化钠的质量分数为0.8％～1.0％、所述吐温20的质量分数为0.04％～0.08％，且所述洗液的pH值为7.1～7.3；
[0020]当所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠、吐温20和聚乙二醇辛基苯基醚时，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10mM～20mM、所述氯化钠的质量分数为0.8％～1.0％、所述吐温20的质量分数为0.04％～0.08％、所述聚乙二醇辛基苯基醚的质量分数为0.08％～0.12％，且所述洗液的pH值为7.1～7.3。
[0021]优选地，所述磁分离洗涤次数为1次至3次；
[0022]和/或，每次所述磁分离洗涤的时间为60s至120s。
[0023]优选地，所述标准液的光密度的测定步骤包括：
[0024]将每种磁珠浓度下的所述标准液转移至酶免板上，使用酶标仪测定每种磁珠浓度下的所述标准液的光密度。
[0025]优选地，将每种磁珠浓度的所述标准液转移至所述酶免板的至少三个反应孔上，使用酶标仪测定每个反应孔中所述标准液的光密度，并取平均值。
[0026]优选地，所述待测样本的光密度的测定步骤包括：
[0027]将经过所述磁分离洗涤的所述待测样本转移至酶免板上，使用酶标仪测定所述待测样本的光密度。
[0028]优选地，将所述待测样本转移至所述酶免板的至少三个反应孔上，使用酶标仪测定每个反应孔中的相应磁珠浓度下的所述待测样本的光密度，并取平均值。
[0029]优选地，所述将所述待测样本的磁珠量与所述待测样本在磁分离洗涤前加入的磁珠总量进行比较，得到磁损率的步骤包括：
[0030]根据所述待测样本的磁珠浓度和所述待测样本的体积，计算得到所述待测样本的磁珠量；
[0031]计算所述待测样本的磁珠量与所述待测样本在磁分离洗涤前加入的磁珠总量的差值；
[0032]计算所述差值与所述待测样本在磁分离洗涤前加入的磁珠总量的百分比，得到所述磁损率；
[0033]和/或，所述对待测样本进行磁分离洗涤后，及在测定所述待测样本的光密度值的步骤前，还包括：
[0034]将磁分离洗涤后的所述待测样本进行悬浮，后将所述待测样本转移至酶免板上，使用酶标仪测定所述待测样本的光密度。
[0035]优选地，所述磁珠种类相同包括所述磁珠粒径、构成所述磁珠的材料以及所述磁珠表面携带的功能基团种类均相同。
[0036]与现有技术相比，本专利技术实施例提供的磁珠磁损率的测定方法，对于同种磁珠磁损率，只需要绘制一次磁珠浓度
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光密度标准曲线，即可快速获得磁珠种类与磁珠浓度
‑
光密度标准曲线的磁珠种类相同的待测样本的磁损率，采用本测定方法可以获取批量的磁珠磁损率数据，有效简化了磁珠磁损率的检测过程，使得磁珠磁损率的检测效率以及检测通量得到大幅度提高，而且磁损率较小，同时磁珠磁损率的检测精度不再受待测样本浓度的影响，磁珠磁损率精度的可靠性得到有效提高，从而可有效辅助判断磁微粒化学发光免疫分析检测结果的可靠性；此外，还有效降低了磁珠磁损率检测的设备投入成本。
【附图说明】
[0037]图1为本专利技术实施例提供的磁珠磁损率的测定方法的简化流程示意图；
[0038]图2为本专利技术实施例一提供的磁珠磁损率的测定方法得到磁珠浓度
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光密度标准曲线；
[0039]图3为本专利技术实施例七提供的磁珠磁损率的测定方法得到磁珠浓度
‑
光密度标准曲线。
【具体实施方式】
[0040]下面结合附图和实施方式对本专利技术作进一步说明。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁珠磁损率的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：构建具有磁珠浓度梯度的标准液；测定每种磁珠浓度下的所述标准液的光密度；根据所述磁珠浓度和所述光密度，绘制磁珠浓度
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光密度标准曲线；对待测样本进行磁分离洗涤，并测定经所述磁分离洗涤后的所述待测样本的光密度；将所述待测样本的光密度代入所述磁珠浓度
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光密度标准曲线，得到所述待测样本的磁珠浓度；由所述待测样本的磁珠浓度计算得到所述待测样本的磁珠量；将所述待测样本的磁珠量与所述待测样本在磁分离洗涤前加入的磁珠总量进行比较，得到磁损率；其中，所述待测样本中含有的磁珠种类与所述磁珠浓度
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光密度标准曲线的磁珠种类相同。2.如权利要求1所述的磁珠磁损率的测定方法，其特征在于，所述磁分离洗涤包括将所述待测样本置于洗液中进行洗涤，所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠和吐温20；或者，所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠、吐温20和聚乙二醇辛基苯基醚。3.如权利要求2所述的磁珠磁损率的测定方法，其特征在于，当所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠和吐温20时，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10mM～20mM、所述氯化钠的质量分数为0.8％～1.0％、所述吐温20的质量分数为0.04％～0.08％，且所述洗液的pH值为7.1～7.3；当所述洗液含有磷酸盐缓冲液、氯化钠、吐温20和聚乙二醇辛基苯基醚时，所述磷酸盐缓冲液的浓度为10mM～20mM、所述氯化钠的质量分数为0.8％～1.0％、所述吐温20的质量分数为0.04％～0.08％、所述聚乙二醇辛基苯基醚的质量分数为0.08％～0.12％，且所述洗液的pH值为7.1～7.3。4.如权利要求1至3任一项所述的磁珠磁损率的测定方法，其特征在于，所述磁分离洗涤次数为1次至3次；和/或，每次所述磁...

【专利技术属性】
技术研发人员：邝俊韬，王欢，王婉珍，刘彦，
申请(专利权)人：深圳市瑞图生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：