浓缩的蛋白质组合物、它们的制备及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种产生包含可逆蛋白质络合物(RPC)的组合物的方法，所述方法包括使蛋白质与络合剂在缓冲溶液中接触的步骤，其中所述络合剂为硫酸葡聚糖或硫酸软骨素，并且其中所述蛋白质和所述络合剂在包含于所述缓冲溶液中时具有相反的净电荷；在所述缓冲溶液中使所述蛋白质与所述络合剂之间形成RPC；以及获得包含所述RPC的悬浮液。本文还提供了组合物，包括药物组合物/制剂，所述药物组合物/制剂包含本发明专利技术的可逆蛋白质络合物(RPC)，特别是通过本文提供的方法获得的可逆蛋白质络合物。本文提供的方法获得的可逆蛋白质络合物。本文提供的方法获得的可逆蛋白质络合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】Journal of Physical Chemistry,1952,56(1),64
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49)。
[0006]这一概念依赖于在特定理化条件(例如，pH、离子强度、摩尔
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电荷比)下混合带相反电荷的分子，使得经由静电相互作用形成复合物。由于电荷被中和和掩蔽，复合物不再可溶，并且沉淀物呈白色颗粒。重要的是，该络合可通过减少静电相互作用逆转，静电相互作用对周围pH和离子强度敏感。事实上，提高离子强度导致带相反电荷的分子之间的静电屏蔽(或屏蔽)，而改变pH结果会减少分子上的电荷分布，引起静电相互作用的减少以及随后两个分子的解离(Chamieh等人,In J Pharm,2019,559,228
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234；Matsuda等人,J Pharm Sci,2018,107(10),2713
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2719)。
[0007]这一概念已经用生物分子(包括酶、激素、肽和蛋白质)以及带相反电荷的聚合物针对蛋白质纯化进行了评估，其中将酶溶于有机溶剂中不会失去活性，并且还可以作为一种药物递送策略来增强生物利用度(Mimura等人,J Chem Phys,2019,150(6),064903；Chamieh等人,In J Pharm,2019,559,228
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234；Matsuda等人,J Pharm Sci,2018,107(10),2713
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2719；Ristroph和Prud
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homme,Nanoscale Advances,2019,1(11),4207
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4237)。事实上，大多数生物分子都是亲水的。利用RPC概念使这些生物分子具有疏水性并且提高其在已经建立的药物递送系统(包括胶束、脂质体和自乳化药物递送系统(SEDDS))中的掺入效率(Chamieh等人,In J Pharm,2019,559,228
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234)。RPC已被证明能够改善蛋白质对理化应激(包括热、搅拌和氧化)的稳定性(Matsuda等人,J Pharm Sci,2018,107(10),2713
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2719)。
[0008]据报道，为最大程度提高络合效率，应将缓冲液的pH调节为低于或高于蛋白质的等电点(pI)两个pH单位，以最大程度改善蛋白质上的电荷分布。虽然蛋白质在碱性pH下通常不稳定，因此有利于带正电荷的蛋白质的弱酸性pH更合适，并且带相反电荷的聚合物应带负电荷以形成复合物(Mimura等人,J Chem Phys,2019,150(6),064903；Matsuda等人,J Pharm Sci,2018,107(10),2713
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2719)。
[0009]还已经提到，除两种聚离子之间的静电相互作用以外，疏水性相互作用也参与稳定复合物。因此，选择络合剂(CA)时要考虑的另一个重要参数是疏水性。事实上，抗衡离子的疏水性结构域(诸如烷基尾或芳族基团)将用排除水的疏水性结构域覆盖蛋白质的表面区域(Mimura等人,J Chem Phys,2019,150(6),064903；Ristroph和Prud
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homme,Nanoscale Advances,2019,1(11),4207
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4237)。
[0010]虽然在各种条件下使用各种络合剂能够有效地实现蛋白质的络合，但随后的蛋白质络合物的解离仍然具有挑战性。特别是，蛋白质的(部分)降解或不可逆络合物的形成会对解离效率产生负面影响。尤其是经皮下施用于患者时，含有蛋白质络合物的组合物在生理条件下不能有效解离，可能在耐受性和免疫原性风险方面造成严重威胁。
[0011]因此，本领域需要包含以下蛋白质络合物的高度浓缩的组合物，这些蛋白质络合物在生理条件下有效地解离成天然、功能性治疗性蛋白质。
[0012]因此，本专利技术的一个目的是提供产生包含在生理条件下有效解离的可逆蛋白质络合物的组合物的方法。
[0013]本专利技术的另一个目的是提供包含在生理条件下有效解离的可逆蛋白质络合物的组合物。
[0014]本专利技术的另一个目的是提供包含可逆蛋白质络合物的药物制剂，其用作药物，特别是其中可逆蛋白质络合物包含治疗性蛋白质并且/或者其中药物制剂经皮下施用。

技术实现思路

[0015]该技术问题通过本文所提供并且特征体现于权利要求中的实施例得到解决。即，本专利技术特别涉及以下项：
[0016]1.一种用于产生包含可逆蛋白质络合物(RPC)的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0017]a)使蛋白质与络合剂在缓冲溶液中接触，
[0018]其中所述络合剂为硫酸葡聚糖或硫酸软骨素，并且
[0019]其中所述蛋白质和所述络合剂在包含于所述缓冲溶液中时具有相反的净电荷；
[0020]b)在所述缓冲溶液中使所述蛋白质与所述络合剂之间形成RPC；以及
[0021]c)获得包含在步骤(b)中形成的所述RPC的悬浮液。
[0022]2.根据项1所述的方法，其中络合剂为硫酸葡聚糖，特别是分子量为40kDa的硫酸葡聚糖。
[0023]3.根据项1或2所述的方法，其中将缓冲溶液的pH调节为低于蛋白质的等电点。
[0024]4.根据项1至3中任一项所述的方法，其中将缓冲溶液的pH调节为低于蛋白质的等电点2至5个pH单位，特别是低于蛋白质的等电点3个pH单位。
[0025]5.根据项1或2所述的方法，其中将缓冲溶液具有在1至6范围内的pH，特别是其中缓冲溶液具有在3至6范围内的pH，特别是缓冲溶液具有在4.5至5.5范围内的pH。
[0026]6.根据项1至5中任一项所述的方法，其中缓冲溶液具有在20mM至50mM范围内的离子强度，特别是其中缓冲溶液具有在20mM至30mM范围内的离子强度。
[0027]7.根据项1至6中任一项所述的方法，其中缓冲溶液包含作为缓冲剂的组氨酸或柠檬酸盐。
[0028]8.根据项1至7中任一项所述的方法，其中包含蛋白质和络合剂的缓冲溶液通过混合包含蛋白质的第一溶液与包含络合剂的第二溶液获得。
[0029]9.根据项8所述的方法，其中包含蛋白质的第一溶液和/或包含络合剂的第二溶液包含缓冲剂。
[0030]10.根据项1至9中任一项所述的方法，其中蛋白质与络合剂以1:0.2至1:2范围内的摩尔
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电荷比接触，特别是其中蛋白质与络合剂以1:0.2至1:1范围内的摩尔
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电荷比接触。
[0031]11.根据项1至10中任一项所述的方法，其中蛋白质与络合剂在缓冲溶液中以在1mg/mL至40mg/mL范围内、特别是在1mg/mL至5mg/mL范围内的蛋白质浓度接触。
[0032]12.根据项1至11中任一项所述的方法，其中蛋白质为抗体、生长因子、激素、细胞因子、酶或前述任一者的片段和/或融合蛋白。
[0033]13.根据项12所述的方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于产生包含可逆蛋白质络合物(RPC)的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：a)使蛋白质与络合剂在缓冲溶液中接触，其中所述络合剂为硫酸葡聚糖或硫酸软骨素，并且其中所述蛋白质和所述络合剂在包含于所述缓冲溶液中时具有相反的净电荷；b)在所述缓冲溶液中使所述蛋白质与所述络合剂之间形成RPC；以及c)获得包含在步骤(b)中形成的所述RPC的悬浮液。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述络合剂为硫酸葡聚糖，特别是分子量为40kDa的硫酸葡聚糖。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中将所述缓冲溶液的pH调节至低于所述蛋白质的等电点。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中将所述缓冲溶液的pH调节至低于所述蛋白质的等电点2至5个pH单位，特别是低于所述蛋白质的等电点3个pH单位。5.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述缓冲溶液具有在1至6的范围内的pH，特别是其中所述缓冲溶液具有在3至6的范围内的pH，特别是其中所述缓冲溶液具有在4.5至5.5的范围内的pH。6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液具有在20mM至50mM的范围内的离子强度，特别是其中所述缓冲溶液具有在20mM至30mM的范围内的离子强度。7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液包含作为缓冲剂的组氨酸或柠檬酸盐。8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中包含所述蛋白质和所述络合剂的所述缓冲溶液通过混合包含所述蛋白质的第一溶液与包含所述络合剂的第二溶液获得。9.根据权利要求8所述的方法，其中包含所述蛋白质的所述第一溶液和/或包含所述络合剂的所述第二溶液包含缓冲剂。10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述蛋白质与所述络合剂以1:0.2至1:2的范围内的摩尔
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电荷比接触，特别是其中所述蛋白质与所述络合剂以1:0.2至1:1的范围内的摩尔
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电荷比接触。11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述蛋白质与所述络合剂在所述缓冲溶液中以在1mg/mL至40mg/mL、特别是1mg/mL至5mg/mL的范围内的蛋白质浓度接触。12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述蛋白质为抗体、生长因子、激素、细胞因子、酶或前述任一者的片段和/或融合蛋白。13.根据权利要求12所述的方法，其中所述抗体为抗体，特别是其中所述抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、多特异性抗体、抗体融合蛋白、抗体
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药物缀合物或抗体片段。14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述络合剂在包含于所述缓冲溶液中时具有负净电荷。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述络合剂包含疏水部分。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中包含所述RPC的所述组合物包含至少一种赋形剂。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述至少一种赋形剂在所述RPC的所述形成之前
和/或之后添加至所述组合物。18.根据权利要求17或18所述的方法，其中所述至少一种赋形剂为稳定剂和/或表面活性剂。19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下进一步的步骤：交换包含所述RPC的所述悬浮液的液体级分。20.根据权利要求19所述的方法，其中包含所述RPC的所述悬浮液的所述液体级分通过离心包含所述RPC的所述悬浮液并且将沉降的RPC重悬于缓冲溶液或水中来交换。21.根据权利要求19所述的方法，其中包含所述RPC的所述悬浮液的所述液体级分通过相对于缓冲溶液或水透析包含所述RPC的所述悬浮液来交换。22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下进一步的步骤：富集所述悬浮液中的所述RPC以获得富集的RPC悬浮液。23.根据权利要求22所述的方法，其中富集所述悬浮液中的所述RPC包括以下步骤：a)离心包含所述RPC的所述悬浮液，以获得包含富集的RPC悬浮液的上清液和沉淀物；以及b)从所述沉淀物中去除所述上清液，以获得富集的RPC悬浮液。24.根据权利要求22或23所述的方法，其中所述富集的RPC悬浮液的液体级分在富集步骤期间至少部分地被替换为非水溶剂。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述非水溶剂为三乙酸甘油酯、二乙二醇单乙醚或油酸乙酯。26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下进一步的步骤：冻干包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液以获得冻干物。27.根据权利要求26所述的方法，其中在冻干步骤之前，将至少一种冷冻保护剂添加至包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液。28.根据权利要求27所述的方法，其中所述至少一种冷冻保护剂选自由以下项组成的组：糖、氨基酸、甲胺、易溶盐、多元醇、丙二醇、聚乙二醇和普郎尼克类。29.根据权利要求26至28中任一项所述的方法，其中在所述冻干步骤之前，将包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液的蛋白质浓度调节至10mg/mL至100mg/mL，特别是调节至40mg/mL至80mg/mL。30.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下进一步的步骤：喷雾干燥包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液以获得喷雾干燥的粉末。31.根据权利要求30所述的方法，其中在喷雾干燥步骤之前，将包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液的蛋白质浓度调节至1mg/mL至10mg/mL，特别是调节至1mg/mL至5mg/mL。32.根据权利要求30或31所述的方法，其中在所述喷雾干燥步骤之前交换包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液的所述液体级分。33.根据权利要求32所述的方法，其中交换包含所述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液的所述液体级分降低所述悬浮液中的至少一种缓冲剂、络合剂和/或赋形剂的浓度。34.根据权利要求33所述的方法，其中在交换所述悬浮液的所述液体级分之后，包含所
述RPC的所述悬浮液或所述富集的RPC悬浮液基本上不含缓冲剂。35.根据权利要求33或34所述的方法，其中在所述喷雾干燥步骤之前交换所述悬浮液的所述液体级分，以获得在1:0.2至1:1之间、特别是在1:0.4至1:0.8之间的所述蛋白质与所述络合剂之间的摩尔
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电荷比。36.根据权利要求30至35中任一项所述的方法，其中喷雾干燥在115℃的入口温度和/或48℃的出口温度进行。37.根据权利要求30至36中任一项所述的方法，其中喷雾干燥以17mL/min的进料速率进行。38.根据权利要求30至37中任一项所述的方法，其中所述方法包括以下进一步的步骤：将所述喷雾干燥的粉末重悬于非水溶剂(NAS)中以获得RPC
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NAS悬浮液。39.根据权利要求38所述的方法，其中所述非水溶剂为选自由以下项组成的组的至少一者：二乙二醇单乙醚、油酸乙酯、三乙酸甘油酯、异山梨醇二甲醚和四氢呋喃聚乙二醇醚。40.根据权利要求39所述的方法，其中将所述喷雾干燥的粉末重悬，以获得蛋白质浓度在50mg/mL至300mg/mL的范围内、特别是在100mg/mL至250mg/mL的范围内的RPC
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NAS悬浮液。41.一种包含可逆蛋白质络合物(RPC)的组合物，其中所述组合物通过根据权利要求1至40中任一项所述的方法获得。42.一种包含可逆蛋白质络合物(RPC)的组合物，其中所述RPC包含蛋白质和络合剂，并且其中所述络合剂为硫酸葡聚糖或硫酸软骨素。43.根据权利要求42所述的组合物，其中所述络合剂为硫酸葡聚糖，特别是分子量为40kDa的硫酸葡聚糖。44.根据权利要求42或43所述的组合物，其中所述蛋白质在包含于所述RPC中时具有正净电荷。45.根据权利要求44所述的组合物，其中所述蛋白质为抗体、生长因子、激素、细胞因子、酶或前述任一者的片段和/或融合蛋白。46.根据权利要求45所述的组合物，其中所述抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、多特异性抗体、抗体融合蛋白、抗体
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药物缀合物或抗体片段。47.根据权利要求42至46中任一项所述的组合物，其中所述络合剂在包含于所述RPC中时具有负电荷。48.根据权利要求42至47中任一项所述的组合物，其中所述络合剂包含疏水部分。49.根据权利要求42至48中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含至少一种赋形剂。50.根据权利要求49所述的组合物，其中所述至少一种赋形剂为稳定剂和/或表面活性剂。51.根据权利要求42至50中任一项所述的组合物，其中所述蛋白质在包含于所述RPC中时与未络合的蛋白质相比具有更高的解链温度。52.根据权利要求42至51中任一项所述的组合物，其中包含所述蛋白质和所述络合剂的所述RPC在生理...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：豪夫迈，
类型：发明
国别省市：