稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一株稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用。具体地，本发明专利技术利用重组克隆技术，将一段C38

【技术实现步骤摘要】
稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及一种稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用，属于分子生物学


技术介绍

[0002]日本脑炎病毒（Japanese encephalitis Virus，JEV）属于黄病毒科黄病毒属，为单股正链RNA病毒，其基因组长约11kb，5
′
端具有I型帽子结构m7G(5
′
)ppp(5
′
)A，3
′
端无poly(A)尾巴。病毒基因组含有一开放阅读框（ORF），可编码一大的多聚蛋白，多聚蛋白可被宿主或病毒的蛋白酶进一步切割成三种结构蛋白（C，PrM，E）和七种非结构蛋白（NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B，NS5）。JEV在自然界中主要通过蚊的子叮咬进行传播，可感染人、马、猪、禽等多种宿主，其中对人与猪具有更为严重的危害性。人主要是十岁以下儿童易感，临床症状表现为高热、抽搐、意识障碍、病理反射和脑膜刺激征，危重病例本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒的制备方法，其特征在于，包括步骤如下：（1）携带mCherry基因的全长感染性克隆的构建；在GI型日本脑炎病毒基因组5
′
非编码区UTR与C基因之间，插入一段C38
‑
mCherry
‑
T2A基因序列，C38
‑
mCherry
‑
T2A基因序列为SEQ ID NO.1，从而构建携带有荧光蛋白基因的重组病毒基因组；具体步骤：使用SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示引物扩增片段SEQ ID NO.4；使用SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示引物扩增片段SEQ ID NO.7；扩增出的DNA片段进行回收检测；SEQ ID NO.1基因片段由人工合成；相邻DNA片段间有20～30bp的同源序列；将SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.7片段与用Not I和Sac II酶处理的线性化感染性克隆载体TAR
‑
rGI进行等比例混合，并利用NEB Gibson Assembly重组酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晨曦，李燕华，陈萱，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：