一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法技术

本发明专利技术公开了一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法，该方法包括以下步骤：将含有系列浓度标志蛋白的样品与适配体孵育，将所得产物与Cas12a蛋白、crRNA和拉曼探针孵育，孵育产物使用激光激发，检测其拉曼信号，识别4ATP的拉曼特征峰并分析其强度，得出标志蛋白浓度与4ATP的拉曼特征峰强度的标准曲线；将含有未知浓度标志蛋白的样品进行同样的分析，依据标准曲线计算样品中的标志蛋白浓度。与现有ELISA方法相比，本发明专利技术方法具有更高灵敏度，催化效率更高。催化效率更高。催化效率更高。

【技术实现步骤摘要】
一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法


[0001]本专利技术涉及一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法。

技术介绍

[0002]成簇的规则间隔短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats,CRISPR)相关(Cas)系统最早在古细菌和细菌中被发现，是一组适应性的免疫系统，天然的保护这些生物体免受侵入性遗传成分(如病毒和具有感染能力的质粒等)的侵入。与一种或多种Cas蛋白结合使用后，CRISPR RNA(crRNA)能够识别特异性的核酸序列，激活Cas蛋白发挥核酸内切酶功能，对靶标核酸分子进行剪切。
[0003]除了特异性核酸内切酶活性(靶向切割)外，CRISPR类型中的III、V和VI RNA引导的核酸酶(Cas12、Cas13和Cas14)还具有侧链靶向激活的非特异性单链核酸水解酶活性(侧链切割)，这使它成为核酸的重要检测工具。由于具有高特异性，以及引导RNA的设计较为简单，CRISPR/Ca本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表面增强拉曼效应与CRISPR/Cas12a联用的蛋白检测方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将含有系列浓度标志蛋白的样品与适配体在缓冲液中至少孵育30分钟，得到标志蛋白结合适配体的样品，将所得样品与Cas12a蛋白、crRNA和拉曼探针至少孵育20分钟，孵育产物使用激光激发，检测其拉曼信号，识别4ATP的拉曼特征峰并分析其强度，得出标志蛋白浓度与4ATP的拉曼特征峰强度的标准曲线；(2)将含有未知浓度标志蛋白的样品按步骤(1)的操作进行分析，得出其4ATP的拉曼特征峰强度，依据标准曲线计算样品中的标志蛋白浓度；所述的适配体是一小段寡核苷酸序列，能够与标志蛋白特异性结合；所述crRNA的序列与适配体互补。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述的标志蛋白可以是前列腺特异抗原、S...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐勇，梁家杰，滕佩君，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：