本发明专利技术公开了一组不结球白菜的KASP分子标记及其在种质资源鉴定中的应用。所述KASP分子标记基于不结球白菜基因组和重测序KASP技术，开发了一组不结球白菜的KASP引物，根据所开发的SNP位点以及设计的引物可以构建所选群体的DNA指纹图谱、品种鉴定、以及种子纯度鉴定等实验，实现对不结球白菜种质资源和种子纯度的快速、准确、有效地鉴定。有效地鉴定。有效地鉴定。
【技术实现步骤摘要】
不结球白菜KASP分子标记及其在种质资源鉴定中的应用
[0001]本专利技术属于分子标记
，具体涉及一组不结球白菜的KASP分子标记及其在种质资源鉴定中的应用。
技术介绍
[0002]不结球白菜在长江中下游栽培面积广泛。不结球白菜生长周期短、周转快、适应性强、播种期不限定并且有耐寒和耐热的品种，能做到周年供应。目前不结球白菜的栽培面积不断地扩大，逐渐成为一种全球性的蔬菜。随着市场需求不断地扩大，育种学家开展了大量的不结球白菜研究，培育出很多不结球白菜的优良品种。随着不结球白菜品种不断增多，栽培面积的不断扩大在市场上同名异物及同物异名的情况时有发生，甚至一些不合格种子混入市场带来巨大的经济损失，因此对不结球白菜品种进行快速准确鉴定对于假种辨别和解决产权纠纷具有重要作用。
[0003]近年来，随着分子标记技术的迅速发展，使品种鉴定以及种子纯度鉴定进入了DNA水平，因其具有较高的准确性、稳定性和重复性，为作物品种纯度分析提供了更为准确、可靠的结果。RFLP标记在于呈现共显性，能够区分纯合型和杂合型，在基因组中应用范围广泛但其DNA模板量需求过大，在操作过程技术难度高，多态性的灵敏程度不高且检测时必须用到放射性元素对环境污染高，实验成本高。SSR标记在于其是共显性标记可以鉴别纯合型和杂合型，所需的DNA样品量少，对DNA的要求不高，操作简单，可靠性强，具有大量的等位差异性避免了RFLP的放射性同位素的应用，但必须明确重复基序两端的DNA序列，如果不能直接在DNA数据库中查找到则需要再次进行测序成本高。SNP分子标记应用领域越来越多，与第一代和第二代DNA分子标记相比，因其具备数量丰富、密度高、遗传相对稳定、高精确性、效率更高、在基因组中分布范围广以及易于实行自动化、规模化的分析等优势，KASP
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SNP标记是由KASP技术转化后用于作物的遗传育种的一种SNP标记。KASP技术是基于引物末端碱基的特异匹配来对SNP分型以及检测InDels插入和缺失，采用2个荧光探针、2个通用淬灭探针再加多个位点特异探针来检测多个SNP位点，采用全自动荧光定量PCR平台，读取数据，进行基因分型。准确性KASP的特异性引物片段长度通常为24～26bp，相比较一般采取8～12bp长度的Taqman探针会有更高的特异性，SNP的准确性也会更高。在进行配置KASP反应体系时，只需要加入非常少量的样本DNA，100ng/μL的样本DNA在配置10μL的反应体系时只需要加入1μL，从而减少试剂的消耗极大的减少成本，而且反应不需要进行常规的凝胶分型，在试验结束时就可以观察到基因的分型情况。KASP检测平台也可以同时检测大量位点少量样本或者少量位点大量样本等低、中、高通量研究以及单个实验。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是提供一组用于不结球白菜鉴定的引物组，可实现不结球白菜种质资源和种子纯度能够快速、准确、有效地鉴定。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0006]一组不结球白菜的KASP引物，包括以下引物对：
[0007]SNP01 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTcaatctgtttgggagaaggtggttA
[0008]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTcaatctgtttgggagaaggtggttC
[0009]R:catcctccagtatccaaagattaaaacgg
[0010]SNP02 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTtacatcaactcttgccttaggtacG
[0011]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTtacatcaactcttgccttaggtacT
[0012]R:gcatactcggtgttctctaagttcagata
[0013]SNP03 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTcagacctctagagagcttcctaaaC
[0014]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTcagacctctagagagcttcctaaaG
[0015]R:ggatcatgtttcgatgaagagagaattcg
[0016]SNP04 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTctaagcacatcccttcaacgaaatG
[0017]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTctaagcacatcccttcaacgaaatT
[0018]R:caaagtgtggctgaagtaagtgatgatg
[0019]SNP05 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTtcaagtttttcgggtagggtttggG
[0020]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTtcaagtttttcgggtagggtttggA
[0021]R:gcgtcatcttcttattcttagattgggtc
[0022]SNP06 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTcatctcagaagaagattgcaagggA
[0023]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTcatctcagaagaagattgcaagggG
[0024]R:catcttgtcaagaacgtttgcagagatag
[0025]SNP07 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTtatcacgagtacttacacctgaccA
[0026]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTtatcacgagtacttacacctgaccC
[0027]R:tacttgttcttgctcagtctctgttatgg
[0028]SNP08 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTtgaatctcacccttctgtcaacctT
[0029]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTtgaatctcacccttctgtcaacctC
[0030]R:gataatctttttggagatgctcttagcctg
[0031]SNP09 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTctaatgggggtgctcttagatgtgG
[0032]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTctaatgggggtgctcttagatgtgT
[0033]R:gcttctgatcatgtctctcattattgtgc
[0034]SNP10 F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTttgatttctctgttctggtggcagA
[0035]F2:GAAGGTCGGAGTCAACGGATTttgatttctctgttctggtggcagC
[0036]R:ttgtgtagatatctgcagagatggagaa本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一组不结球白菜的KASP引物组，其特征在于：包括以下引物对的一对或几对的组合：
2.权利要求1所述的引物组在构建不结球白菜种质资源指纹图谱中的应用。3.权利要求1所述的引物组在鉴定不结球白菜品种中的应用。4.权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：张昌伟，李琳，肖栋，侯喜林，刘同坤，李英，胡春梅，王建军，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：
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