一种通用型CAR-T细胞及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种通用型CAR

【技术实现步骤摘要】
一种通用型CAR
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T细胞及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种免基因编辑的通用型CAR
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T细胞及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]肿瘤治疗是困扰人类的最大难题之一，常规治疗手段都各有局限。随着科技的进步，随着肿瘤免疫学理论和技术的发展，肿瘤免疫治疗正逐渐成为肿瘤治疗的发展方向，被称为第四大肿瘤治疗技术。作为肿瘤免疫治疗领域的新宠，免疫细胞治疗技术在近年来迅猛发展，研究发现，T淋巴细胞是肿瘤细胞的天敌，在肿瘤免疫应答中起主要作用，对肿瘤细胞有极强的杀伤作用。
[0003]CAR
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T细胞(嵌合抗原受体T细胞)技术是利用病人自身的免疫细胞来清除癌细胞免疫细胞疗法，嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor，CAR)是一种由抗原识别域、铰链区、跨膜区和胞内信号域依次组成的模拟TCR功能的人工受体，其中，抗原识别域通常为特异性结合靶点的单链抗体。嵌合抗原受体T细胞(CAR
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T细胞)是通过将外源性人工设计的CAR基因导入T细胞内进行基因修饰改造后得到的表达有CAR的T细胞。由于肿瘤免疫疗法在治愈肿瘤的同时又没有传统放疗、化疗的治疗毒性，所以免疫细胞疗法在肿瘤的治疗中具有广阔的前景。
[0004]CAR
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T免疫疗法在治疗血液肿瘤方面取得了前所未有的成功，诺华与吉利德(收购Kite Pharma)分别研发的Kymriah和Yescarta两款CAR
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T产品在2017年相继被FDA批准上市，给全球成千上万癌症病人带来希望。截至目前，已有5款针对血液瘤的CAR
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T药物获得FDA批准。
[0005]然而，目前标准的CAR
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T疗法需要从患者自身获得足量的用于转化CAR
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T的自体T细胞，既费时费力，又价格不菲。对于新生儿和老人，以及一些自身免疫功能较差的病患，甚至很难获得足量且合格的用于后续转化CAR
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T的T细胞。为了使CAR
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T疗法更易于实现，迫切需要开发一种人源通用型CAR
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T，即用于转化CAR
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T的T细胞来源于健康的个体，但生产出来的CAR
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T却可通用于不同的病患，健康供体外周血T细胞数量多、活率高，用以制备CAR
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T和细胞扩增相对比较容易；如果能用于替代肿瘤患者自体CAR
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T细胞来治疗，将极大降低CAR
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T细胞制备的周期和治疗的费用。
[0006]同种异体CAR
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T细胞用于肿瘤治疗面临的主要障碍在于免疫排异问题，一种称为宿主抗原移植物排异的过程，而这大大限制了同种异体CAR
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T细胞的抗肿瘤功能。另一种的表现为，同种异体CAR
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T细胞可能将宿主组织识别为外来物，导致移植物抗宿主病(GvHD)，这可能会导致严重的组织损伤和死亡。目前，同种异体CAR
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T细胞技术主要依赖于基因编辑平台，在基因组的特定位置(如TCR、HLA)产生位点特异性双链断裂，然后通过非同源末端连接(Non
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homologous endjoining，NHEJ)或同源定向重组修复(Homology directed recombination repair，HDR)的方式进行修复，从而实现靶向敲除来自健康人血液中T细胞的基因(TCR及HLA分子等)，以减弱或消除其引发的移植物抗宿主病(GvHD)。目前成熟的基
因编辑技术有三种：锌指核酸酶(zinc finger nucleases,ZFNs),转录激活子样效应因子核酸酶(transcriptionactivator
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like effector
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based nucleases，TALENs)和规律性间隔的短回文序列重复簇(Clustered regularly interspaced short palindromic repeat，CRISPR)。然而，这些技术无一例外需要对T细胞进行基因编辑，而上述基因编辑技术因为所需的基因编辑酶片段均较大，因此这些基因编辑技术只能通过电击转导来进行使用，电击会造成T细胞损伤，并且基因编辑工具含有潜在的脱靶风险，以及存在基因编辑效率等等其他不可避免的问题。
[0007]因此，本领域迫切需要开发一种免基因编辑的通用型CAR
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T细胞，以解决目前存在的问题。

技术实现思路

[0008]本专利技术的第一目的在于获得免基因编辑的通用型CAR
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T细胞。
[0009]本专利技术的第二目的在于获得一种免基因编辑的通用型CAR
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T细胞的制备方法。
[0010]本专利技术的第三目的在于提供一种含有免基因编辑的通用型CAR
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T细胞的的药物组合物。
[0011]本专利技术的第四目的在于获得一种含有免基因编辑的通用型CAR
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T细胞的的药物组合物。
[0012]本专利技术的第一方面提供一种通用型CAR
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T细胞，所述通用型CAR
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T细胞中表达针对靶细胞表面抗原的嵌合抗原受体和人源TCR抑制因子，其中，所述人源TCR抑制因子源于人源CD3ζ基因，且所述人源TCR抑制因子的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0013]在本专利技术的一个优选实施方式中，其中，所述嵌合抗原受体和TCR抑制因子由剪切蛋白连接。
[0014]在本专利技术的一个优选实施方式中，其中，所述剪切蛋白为T2A或P2A中的任意一个，核苷酸序列各自如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。
[0015]进一步地，所述剪切蛋白优选为P2A，核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。
[0016]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述通用型CAR
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T细胞为免基因编辑的通用型CAR
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T细胞。
[0017]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述通用型CAR
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T细胞同时表达针对靶细胞表面抗原的嵌合抗原受体和所述人源TCR抑制因子。
[0018]优选地，所述同时表达是指所述嵌合抗原受体和TCR抑制因子由同一启动子启动转录。
[0019]更优选地，所述同一启动子可为CMV和EF1a启动子的一个，最优选为EF1a启动子。
[0020]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述TCR抑制因子干扰所述通用型CAR
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T细胞中的CD3
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TCR复合体的形成。
[0021]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和信号传导结构域。
[0022]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通用型CAR
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T细胞，通用型CAR
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T细胞中表达针对靶细胞表面抗原的嵌合抗原受体和人源TCR抑制因子，其特征在于：所述人源TCR抑制因子源于人源CD3ζ基因，且所述人源TCR抑制因子的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示。2.根据权利要求1所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述嵌合抗原受体和TCR抑制因子由剪切蛋白连接。3.根据权利要求2所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述剪切蛋白为T2A或P2A中的任意一个，核苷酸序列各自如SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.9所示。4.根据权利要求1所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述通用型CAR
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T细胞为免基因编辑的通用型CAR
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T细胞。5.根据权利要求1或2所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述通用型CAR
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T细胞同时表达针对靶细胞表面抗原的嵌合抗原受体和所述人源TCR抑制因子。6.根据权利要求1或2所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述TCR抑制因子干扰所述通用型CAR
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T细胞中的CD3
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TCR复合体的形成。7.根据权利要求1或2所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述嵌合抗原受体包括信号肽、抗原结合结构域、跨膜结构域、共刺激结构域和信号传导结构域。8.根据权利要求1或2所述的通用型CAR
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T细胞，其特征在于：所述CAR
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T细胞表面嵌合抗原受体所针对的肿瘤表面抗原为CD19、CD20、BCMA、CD22、CD30、CD123、CD5、CD7...

【专利技术属性】
技术研发人员：田晓丽，刘国迪，顾章杰，
申请(专利权)人：上海怡豪生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：