用于得到体内存留性和治疗活性的NKT细胞亚群以及其繁殖制造技术

本发明专利技术的发明专利技术名称为用于得到体内存留性和治疗活性的NKT细胞亚群以及其繁殖。本公开的实施例包括用于制造有效用于免疫疗法的NKT细胞的方法和组合物以及用于向需要免疫疗法的个体提供有效量的NKT细胞的方法和组合物。在具体实施例中，NKT细胞是CD62L+，并且已经暴露于一种或多种共刺激剂中以维持CD62L表达。在一些情况下，NKT细胞可以经过修饰以并有嵌合抗原受体。合抗原受体。合抗原受体。

【技术实现步骤摘要】
人类两者中，NKT在CD4+CD8+(双阳性，double positive，DP)胸腺细 胞的阶段与T细胞不同。不同于由胸腺上皮细胞正选择的T细胞，NKT 由CD1d表达性DP胸腺细胞选择(Gapin等人,2001)。紧接在正选择之 后的前髓细胞性白血病锌指状物转录因子(PLZF)表达使得能够进行NKT 的胸腺内扩增和效应细胞/记忆细胞样分化(Savage等人,2008)。外周NKT 是长期存活的淋巴细胞，并且其胸腺后维持很大程度上取决于IL
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15介导 的缓慢内稳定增殖(Matsuda等人,2002；Baev等人,2004)。在人类外周 血液中，基于CD4表达将NKT分成两个主要功能亚群：CD4+和CD4
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(大 多是CD8/CD4双阴性，DN)(Lee等人,2002)。CD4+亚群在新生NKT中 高度富集，并且与成人中的CD4
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亚群相比较经历较少内稳定分裂(Baev 等人,2004)，表明CD4+NKT可以有助于过继转移的治疗性NKT在某些 条件下的长期存留性。然而，人类NKT响应于抗原刺激(例如用α
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半乳 糖基神经酰胺，αGalactosylceramide，αGalCer刺激)的离体扩增产生类似 数目的CD4+和DN NKT(28)。NKT还在获取CD161和接着CD56表达 的情况下展现NK样线性分化。如在T细胞中，CD56的表达与终末分化 和增殖潜力损失相关联(Loza等人,2002)。
[0008]相比于具有从原初细胞到中央记忆细胞到效应记忆细胞到终末效应 细胞的非常确实的发育分级的外周T细胞(Sallusto等人,2004)，NKT广 泛地描述为具有不具原初状态的“活化/记忆细胞”表型的细胞(D'Andrea 等人,2000；Kronenberg和Gapin,2002)。在脐带血中，大多数NKT是CD4+， 并且与CD62L和CCR7一起共表达CD45RO而无直接效应功能(Baev等 人,2004；D'Andrea等人,2000；Eger等人,2006)，因此类似于中央记忆 CD4 T细胞。在成人外周血液中，NKT在CD4+与CD4
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亚群之间等分(即 使具有显著个体间可变性)。成人NKT在“记忆细胞”状态与“效应细 胞”状态之间缺乏明确分界，这是由于其可变地表达记忆细胞标记物并且 具有直接效应功能，如细胞因子产生和细胞毒性(Baev等人,2004；Eger 等人,2006)。即使在老年人中，大多数成人NKT仍表达CD28(DelaRosa 等人,2002)，使得其与终末分化T效应细胞不同(Okada等人,2008)。
[0009]最近报告已经展现，CD62L+中央记忆T细胞在细胞疗法产物中具有 干细胞特性和优越治疗活性(Graef等人,2014；Wang等人,2012； Sommermeyer等人,2015)。CD62L表达在NKT中的功能重要性仍是未知 的。在本公开中，NKT细胞离体扩增和体内存留性需要CD62L+亚群。重 要的是，当经过工程改造以表达CD19特异性CAR(CAR.CD19)时， CD62L+而非CD62L
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CAR.CD19 NKT在NSG小鼠中的B细胞淋巴瘤模型 中产生持续的肿瘤消退。当具有某些共刺激性配位体时，CD62L+NKT在 离体扩增期间可以得到维持。使用这一知识，可以对共刺激性人工抗原呈 递细胞(aAPC)进行工程改造，所述aAPC可以例如用于产生在患有癌症 的患者中具有优越治疗活性的NKT和CAR
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NKT。

技术实现思路

[0010]本公开的方法和组合物关注用于有需要的个体的免疫疗法。在一些实 施例中，个体需要例如靶向携有特定抗原的破坏性细胞(如癌症)的疗法。 本公开一般基于对产生NKT细胞临床适用量和功效的方法进行的改进来 提供NKT细胞用于免疫疗法的用途。
[0011]本公开的实施例提供具有优越体内存留性和抗肿瘤活性的CD62L+ NKT细胞。本公开的实施例允许使NKT细胞有效扩增以使得其可以用于 治疗应用。本公开的NKT具有与CD62L表达相关联的存活率提高和扩增 增强。CD62L表达存在于NKT细胞中，并且因为对NKT
细胞的共刺激而 于所述细胞中维持。本公开的实施例包括通过任何维持CD62L表达的方 法来对NKT细胞进行共刺激。使用一种或多种方法使NKT细胞暴露于共 刺激中，如在暴露于一种或多种细胞因子(包括至少IL
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21)中之后，暴 露于一种或多种结合于共刺激性受体的促效性抗体中，和/或暴露于例如表 达CD1d和一种或多种共刺激性受体配位体的人工抗原呈递细胞中。因此， 在具体实施例中，可以利用人工抗原呈递细胞来产生用于有效癌症免疫疗 法的CD62L富集的NKT。
[0012]在一个实施例中，存在一种制备自然杀手T(natural killer T；NKT) 细胞以用于免疫疗法中的方法，包含使NKT细胞群体中的CD62L阳性 NKT细胞富集的步骤。在一个具体实施例中，通过T细胞受体刺激和共 刺激性受体和/或细胞因子共刺激来使CD62L阳性NKT细胞活化。在一些 情况下，所述方法进一步包含将治疗有效量的细胞递送到需要疗法的个体 中的步骤。在某些方面，细胞经过修饰以表达一种或多种嵌合抗原受体、 T细胞受体、一种或多种细胞因子、一种或多种细胞因子受体、一种或多 种嵌合细胞因子受体或其组合。
[0013]在某一实施例中，存在一种使用免疫疗法治疗个体的医学病状的方 法，包含以下步骤：a)使NKT细胞群体中的CD62L阳性NKT细胞富集 或获得富集有CD62L阳性NKT细胞的NKT细胞群体；和b)向所述个体 提供治疗有效量的所述CD62L阳性NKT细胞。
[0014]在一个实施例中，存在一种使用免疫疗法治疗个体的医学病状的方 法，包含以下步骤：通过使CD62L+NKT细胞和CD62L
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NKT细胞的群 体混合物暴露于一种或多种共刺激剂中来使来自所述群体混合物中的 CD62L+NKT细胞扩增以富集和制造经过共刺激的CD62L+NKT细胞； 和向所述个体提供治疗有效量的所述经过共刺激的CD62L+NKT细胞。在 具体实施例中，刺激剂和共刺激剂包含a)一种或多种细胞因子；b)包含 用于T细胞受体的促效性抗体或配位体(例如OKT3 mAb、6B11 mAb或 具有结合的促效性糖脂(如α
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半乳糖基神经酰胺)的重组型人类CD1d) 和一种或多种靶向共刺激性受体的促效性抗体的衬底；或c)包含CD1d 表达并且包含一种或多种共刺激性受体中一种或多种配位体的表达的抗 原呈递细胞。在某些实施例中，细胞因子选自由以下组成的群组：IL
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21、 IL
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2、IL
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7、IL
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15、IL
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12、TNFα以及其组合。衬底可以是珠粒、板或凝 胶。在一个具体实施例中，用一种或多种多核苷酸对抗原呈递细胞进行转 导以表达一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种制备自然杀手T(NKT)细胞以用于免疫疗法中的方法，包含使NKT细胞群体中的CD62L阳性NKT细胞富集的步骤。2.一种使用免疫疗法治疗个体的医学病状的方法，包含以下步骤：a)使NKT细胞群体中的CD62L阳性NKT细胞富集或获得富集有CD62L阳性NKT细胞的NKT细胞群体；和b)向所述个体提供治疗有效量的所述CD62L阳性NKT细胞。3.一种使用免疫疗法治疗个体的医学病状的方法，包含以下步骤：通过使CD62L+NKT细胞和CD62L
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NKT细胞的群体混合物暴露于一种或多种共刺激剂中来使来自所述群体混合物中...

【专利技术属性】
技术研发人员：L，
申请(专利权)人：贝勒医学院，
类型：发明
国别省市：