一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基及其制剂和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基及其制剂和应用，属于生物技术领域。培养基包括以下组分，以质量份数计，大米：20份

【技术实现步骤摘要】
一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基及其制剂和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体地说，涉及一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基及其制剂和应用，确切地说是一种促进莱氏绿僵菌产孢的培养方法，应用于草地贪夜蛾等鳞翅目害虫的防控。

技术介绍

[0002]现阶段，害虫对作物的危害是造成农业减产的重大因素之一。化学农药的长期大量使用在杀灭害虫的同时也带来了农产品药残超标，害虫抗性水平逐年上升，污染环境等一系列的副作用。鉴于此，生物防治被人们日益重视，利用昆虫病原微生物防治害虫是害虫生物防治的重要手段之一。与其他杀虫微生物相比，杀虫真菌具有易流行，对环境友好，不易产生抗药性等优点，在害虫的生物防治中占有重要地位。
[0003]莱氏绿僵菌(Metarhizium rileyi)是一种在我国分布广泛的昆虫病原真菌，可侵染多种鳞翅目害虫，尤其对草地贪夜蛾、甜菜夜蛾、大豆夜蛾、斜纹夜蛾等夜蛾科害虫的侵染力极高，具有较高的开发利用价值。
[0004]产孢量、产孢时间等是影响莱氏绿僵菌菌株应用的重要因素。目前莱氏绿僵菌发酵基质中，多采用廉价的麦麸、玉米粉、大米粉等农副产品为营养物质，以获得最大孢子产量。优化基质组合过程中，几乎没有把缩短产孢时间作为指标来考量，仅仅以孢子产量为目标。
[0005]实验室中培养莱氏绿僵菌最常用的培养基为萨斯麦芽糖
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酵母培养基和马铃薯培养基，但仍存在产孢率低、孢子萌发率低、产孢周期长和成本高等问题。目前关于无机盐金属离子、虫体组织对莱氏绿僵菌产孢量、产孢时间的研究报道较少。
[0006]莱氏绿僵菌Mr006由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所生物防治团队从太和玉米种植区调查发现田间感染虫生真菌的草地贪夜蛾僵虫中分离鉴定获得。具体测序结果如下(540bp)：
[0007][0008][0009]试验发现本实验室分离获得的对草地贪夜蛾、玉米螟等都有较好的效果。基于此，
通过添加无机盐金属离子、虫体组织等，进行了莱氏绿僵菌Mr006不同组分培养基固体发酵产孢试验，以求简化生产工艺，缩短产孢时间，同时提高孢子产量，降低生产成本，获得一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养方法。

技术实现思路

[0010]1、要解决的问题
[0011]针对上述现有技术存在的问题，目的在于提供一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养方法，以便为后期发酵生产提供支持。
[0012]上述目的通过以下方案实现：
[0013]一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养方法，其特征在于：包括以下步骤：
[0014](1)按重量份称取下述组分混匀：大米40、稻壳15、麦芽糖3、黄粉12、酵母粉5、水25、草地贪夜蛾虫体冻干粉1.5、磷酸锌0.15、硫酸亚铁0.1、水23.5；
[0015](2)将混匀后原料静置浸泡4小时后，装袋121℃高压灭菌50分钟，待温度降到30℃后接入莱氏绿僵菌Mr006液体种子菌液，接种量10％，搅拌混匀后，先
[0016]28℃光照培养箱培养(16L/8D，光暗交替)，培养3d后；调整温度为24℃，光照(23L/1D，光暗交替)，继续培养，培养14d后，停止发酵，期间定时取样检查。
[0017]2、技术方案
[0018]为解决上述问题，本专利技术采用如下的技术方案。
[0019]一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基，所述培养基包括以下组分，以质量份数计，
[0020][0021]所述虫体冻干粉为草地贪夜蛾虫体冻干粉。
[0022]所述培养基，所述培养基包括以下组分，以质量份数计，
[0023][0024]所述虫体冻干粉为草地贪夜蛾虫体冻干粉。
[0025]所述培养基，所述培养基包括以下组分，以质量份数计，
[0026][0027]所述虫体冻干粉为草地贪夜蛾虫体冻干粉。
[0028]任一项所述培养基，所述莱氏绿僵菌metarhizium rileyi Mr006的保藏号为CGMCC NO.40171，2022年5月9日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0029]一种莱氏绿僵菌Mr006制剂，由任一项培养基培养并辅以助剂制得，所述制剂的剂型是混悬液。
[0030]一种如任一项所述培养基在促进产孢上的应用。
[0031]一种如所述莱氏绿僵菌Mr006制剂在促进产孢上的应用。
[0032]3、有益效果
[0033]相比于现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0034]莱氏绿僵菌是一种对夜蛾科幼虫有很强致病力的昆虫病原真菌，在自然界常常引发高强度的昆虫流行病。大部分真菌的研究工作都需要对真菌进行室内人工培养，且不同真菌对培养基的养分组成要求差异较大。培养莱氏绿僵菌一般采用萨氏麦芽糖酵母琼脂培
养基(Sabo uraud maltose agar supplementedyeast extract，SMAY)，该种培养基在真菌的菌丝生长、产孢量、产孢速度等方面较为均衡，但生长周期较长，产孢量较低。不同的菌株亦可能对培养组分有不同的反应，因此，针对不同的菌株，其最优培养基的组成成分有所不同。鉴于此，为了更好地开展对莱氏绿僵菌的相关研究，针对一株来源于玉米田间草地贪夜蛾僵虫中分离的菌株Mr006进行了培养基的组分筛选、培养条件优化设计，以寻找出一种更好促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养方法，为莱氏绿僵菌Mr006应用提供支持。
[0035]为了获得更好促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养方法，本文在优化实验室培养基及培养条件的的基础上，尝试筛选中试发酵组分，放大培养，分析对产孢开始时间、产孢量的影响。
[0036]本专利技术提供促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养方法：
[0037](1)按重量(kg)比例称取下述原料混匀：大米40、稻壳15、麦芽糖3、黄粉12、酵母粉5、水25、草地贪夜蛾虫体冻干粉1.5、磷酸锌0.15、硫酸亚铁0.1、水23.5；
[0038](2)将混匀后原料静置浸泡4小时后，装袋121℃高压灭菌50分钟，待温度降到30℃后接入莱氏绿僵菌Mr006液体种子菌液，接种量10％，搅拌混匀后，先
[0039]28℃光照培养箱培养(16L/8D，光暗交替)，培养3d后；调整温度为24℃，光照(23L/1D，光暗交替)，继续培养，培养14d后，停止发酵，期间定时取样检查。
[0040](3)用吐温
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80溶液将固体发酵培养基上收集的分生孢子洗下，得到分生孢子液，按10倍稀释法制成合适浓度稀释液，采用细胞计数法在显微镜下观察并计算孢子量。
具体实施方式
[0041]下面结合具体实施例对本专利技术进一步进行描述。
[0042]一、材料与方法
[0043]材料
[0044]莱氏绿僵菌Mr006，由本试验室分离自草地贪夜蛾僵虫，并保存。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进莱氏绿僵菌Mr006产孢的培养基，其特征在于：所述培养基包括以下组分，以质量份数计，大米20份
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60份；稻壳10份
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20份；麦芽糖2份
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4份；黄粉8份
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16份；酵母粉2份
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8份；水30份
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60份；虫体冻干粉1份
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2份；磷酸锌0.1份
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0.2份；硫酸亚铁0.05份
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0.15份；所述虫体冻干粉为草地贪夜蛾虫体冻干粉。2.权利要求1所述培养基，其特征在于：所述培养基包括以下组分，以质量份数计，大米30份
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50份；稻壳12份
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18份；麦芽糖2份
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4份；黄粉9份
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14份；酵母粉2份
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8份；水35份
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55份；虫体冻干粉1份
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2份；磷酸锌0.1份

【专利技术属性】
技术研发人员：胡飞，欧阳承，胡秀娟，徐丽娜，胡本进，苏贤岩，徐婷婷，毕思佳，朱可旭，任学祥，陈浩梁，戚仁德，张勇，李瑞雪，周荣，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所，
类型：发明
国别省市：