化合物下拉靶点蛋白的方法技术

本发明专利技术提供了一种化合物下拉靶点蛋白的方法，包括利用裂解液处理细胞得到细胞总蛋白，其中裂解液包括蛋白酶抑制剂；利用蛋白G/A磁珠对细胞总蛋白进行预处理，得到待测细胞总蛋白，以去除细胞总蛋白中非特异结合的蛋白；在含有牛血清蛋白的下拉缓冲液中利用生物素标记化合物对亲和素磁珠进行预处理，得到结合有生物素标记化合物的亲和素磁珠体；将预处理后得到的亲和素磁珠体加至待测细胞总蛋白中进行孵育处理，得到捕获有特异性靶点蛋白的亲和素磁珠体；利用生物素或未被生物素标记的化合物对孵育处理后得到的亲和素磁珠体进行处理，得到目标下拉靶点蛋白。得到目标下拉靶点蛋白。得到目标下拉靶点蛋白。

【技术实现步骤摘要】
化合物下拉靶点蛋白的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种化合物下拉靶点蛋白的方法。

技术介绍

[0002]蛋白质是组成人体一切细胞、组织的重要成分，是细胞功能的主要行使者，其调节转录、翻译、细胞周期、DNA复制等功能，对维持正常的细胞功能、控制细胞之间的通讯并允许细胞适应环境的变化具有重要意义。外源化合物影响机体的重要作用途径，是通过与蛋白质等大分子相互作用，扰动生物分子间相互作用网络动态调整机制，随之触发后续的细胞信号传导等一系列级联响应和细胞、组织、器官等多层次的关键事件而产生的。外源化合物蛋白作用靶点的研究能够为其作用机理提供突破口。
[0003]在日益突出的环境问题中，污染物在生物体内潜在蛋白靶点的甄别，远远落后于对其毒性效应的检测；在新药研发中，寻找未知蛋白靶点是药物研发中药理和毒理解释不可或缺的环节。生物素—亲和素系统是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统，由于其优越的灵敏度、特异性、稳定性等在外源化合物靶点蛋白的探索中显示出巨大的潜力。然而，此系统在化合物—靶点蛋白相互作用中的应用还很局限，尤本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化合物下拉靶点蛋白的方法，包括以下步骤：利用裂解液处理细胞得到细胞总蛋白，其中所述裂解液包括蛋白酶抑制剂；利用蛋白G/A磁珠对所述细胞总蛋白进行预处理，得到待测细胞总蛋白，以去除所述细胞总蛋白中非特异结合的蛋白；在含有牛血清蛋白的下拉缓冲液中利用生物素标记化合物对亲和素磁珠进行预处理，得到结合有所述生物素标记化合物的亲和素磁珠体，其中，所述生物素标记化合物为生物素标记的所述化合物；将预处理后得到的所述亲和素磁珠体加至所述待测细胞总蛋白中进行孵育处理，得到捕获有特异性靶点蛋白的亲和素磁珠体；利用所述生物素或未被生物素标记的所述化合物对孵育处理后得到的所述亲和素磁珠体进行处理，得到目标下拉靶点蛋白。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用裂解液处理细胞得到细胞总蛋白的步骤包括：利用低温离心的方法对培养后的所述细胞进行收集，其中，所述细胞的培养密度优选为≥3.8
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105个细胞/cm2，所述细胞包括哺乳动物细胞，优选为，人多能诱导干细胞；将收集的所述细胞利用所述裂解液进行裂解，得到所述细胞总蛋白，所述裂解的时间为10～30分钟。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用蛋白G/A磁珠对所述细胞总蛋白进行预处理，得到待测细胞总蛋白包括：利用下拉缓冲液对所述细胞总蛋白进行稀释，得到所述细胞总蛋白的稀释液；将所述细胞总蛋白的稀释液加入经清洗后的蛋白G/A磁珠中，在低温环境中进行孵育，所述孵育时间为2～8小时，所述低温环境的温度范围为4～8℃。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述在含有牛血清蛋白的下拉缓冲液中利用生物素标记化合物对亲和素磁珠进行预处理，得到结合有所述生物素标记化合物的亲和素磁珠体，包括：将所述亲和素磁珠和生物素标记化合物置于含有牛血清蛋白的下拉缓冲溶液中在低温条件下进行孵育处理，以便将所述生物素标记化合物包被至所述亲和素磁珠体表面的同时，封闭所述亲和素磁珠体的潜在非特异性蛋白结合位点，得到结合有所述生物素标记化合物的亲和素磁珠体，其中，所述牛血清蛋白的含量百分比为0.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵苗苗，杨仁君，殷诺雅，费凡，
申请(专利权)人：中国科学院生态环境研究中心，
类型：发明
国别省市：