细粒棘球蚴及加拿大棘球蚴EG95/EC95蛋白组合的制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种细粒棘球蚴及加拿大棘球蚴EG95/EC95蛋白组合的制备及应用；所述重组蛋白组合包括dEG95和dEC95氨基酸序列；dEG95氨基酸序列为狭义细粒棘球绦虫的EG95删去N端的信号肽区域及C端的跨膜区，得到的修饰后的氨基酸序列；EG95基因序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；dEC95氨基酸序列为加拿大棘球绦虫的EC95删去N端的信号肽区域及C端的跨膜区，得到的修饰后的氨基酸序列；EC95基因序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。本发明专利技术的方法具备蛋白表达量高、工艺简单、生产成本低等优点。生产成本低等优点。生产成本低等优点。

【技术实现步骤摘要】
细粒棘球蚴及加拿大棘球蚴EG95/EC95蛋白组合的制备及应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及一种细粒棘球蚴及加拿大棘球蚴EG95/EC95蛋白组合的制备及应用；尤其涉及细粒棘球蚴及加拿大棘球蚴EG95/EC95蛋白质序列的修饰方法，以及用这种经过修饰后蛋白序列制备重组表达质粒、重组大肠杆菌工程菌，以及大肠杆菌工程菌诱导表达方法。

技术介绍

[0002]棘球蚴病(Echinococcosis)，是由棘球蚴属绦虫的幼虫——棘球蚴(hydatid cyst)寄生于人和动物的肺、肝等组织器官而引起的一种严重的人兽共患寄生虫病。棘球蚴病流行广，呈世界性分布，世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health；法语：Office international des
é
pizooties，OIE)将棘球蚴病归为全球通报的传染病，归属为多种动物共患病；世界卫生组织(World Health Organization，WHO)将棘球蚴病列为全球早期预警系统优先预测和应急处置的疾病之一。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白组合，其特征在于，所述重组蛋白组合包括dEG95氨基酸序列和dEC95氨基酸序列；所述dEG95氨基酸序列为狭义细粒棘球绦虫的EG95删去N端的信号肽区域及C端的跨膜区，得到的修饰后的氨基酸序列；所述EG95基因序列如SEQ ID NO.1所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述dEC95氨基酸序列为加拿大棘球绦虫的EC95删去N端的信号肽区域及C端的跨膜区，得到的修饰后的氨基酸序列；所述EC95基因序列如SEQ ID NO.4所示，氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。2.如权利要求1所述的重组蛋白组合，其特征在于，dEG95氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；dEC95氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。3.一种如权利要求1所述的重组蛋白组合的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、将dEG95和dEC95的编码基因克隆到原核表达载体，获得重组表达质粒；S2、以重组表达质粒转染原核表达菌株，筛选单克隆，发酵培养，诱导表达得到所述重组蛋白。4.根据权利要求3所述的重组蛋白组合的制备方法，其特征在于，步骤S1具体包括如下步骤：A1、分别基因合成密码子优化的适合大肠杆菌表达的dEG95、dEC95基因序列；dEG95氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，dEC95氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；或，两个dEG95氨基酸序列、两个dEC95氨基酸序列分别通过linker进行连接，形成2dEG95氨基酸序列、2dEC95氨基酸序列；分别基因合成密码子优化的适合大肠杆菌表达的2dEG95、2dEC95基因序列；或，dEG95氨基酸序列及dEC95氨基酸序列通过linker进行连接，形成dEG95
‑
dEC95氨基酸序列或dEC95
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dEG95氨基酸序列；分别基因合成密码子优化的适合大肠杆菌表达的dEG95
‑
dEC95或dEC95
‑
dEG95基因序列；A2、将dEG95及dEC95基因分别按不同顺序依次克隆到pETDuet
TM
‑
1质粒载体中，构建得到pETDuet
‑
dEG95
‑
dEC95或pETDuet
‑
dEC95
‑
dEG95质粒；或，将2dEG95及2dEC95基因分别按不同顺序依次克隆到pETDuet
TM
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1质粒载体中，构建得到pETDuet
‑
2dEG95
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2dEC95或pETDuet
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2dEC95
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2dEG95质粒；或，将dEG95<...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂东升，张震，王江辉，仲从浩，
申请(专利权)人：申联生物医药上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：