一种植物组织切片复染方法技术

本发明专利技术公开了一种植物组织切片复染方法，涉及生物技术领域。包括以下步骤：(1)准备植物组织切片；(2)对植物组织切片进行木质素自发荧光的观察；(3)将步骤(2)观察结束后的植物组织切片进行纤维素的荧光染色观察；(4)将步骤(3)观察结束后的植物组织切片使用明场染料进行染色观察。本发明专利技术根据染料本身是否可洗除的特点进行合理排序使用，通过对同一样本的多次染色，简便快捷的同时避免了由样本的不同带来的误差干扰。的误差干扰。的误差干扰。

【技术实现步骤摘要】
一种植物组织切片复染方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种植物组织切片复染方法。

技术介绍

[0002]切片染色是广泛应用于分子生化研究中的重要技术，利用染料与细胞内的化学成分或结构发生作用，呈现出不同的颜色。通过细胞染色，可直观地观察全面的细胞组织构造，或者对目标代谢产物的位置与含量进行分析。
[0003]在传统的细胞染色方法中，对于同一目标物质或细胞结构使用不同的染料时，一般在不同的样本切片上进行染色，当需要进行多种染色时，需要准备较多样本。除此之外，即使是植物的同一组织也可能具有不同的发育程度，且不同发育程度的界限往往难以判别。即使切片位置相近，其发育程度及代谢情况都可能是不同的，易造成染色结果的误差。
[0004]因此，如何提供一种快速高效准确的植物同一细胞切片染色方法，是本领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种植物组织切片复染方法
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种植物组织切片复染方法，包括以下步骤：
[0008](1)准备植物组织石蜡切片，并对石蜡切片进行脱蜡复水处理；
[0009](2)对脱蜡复水后的植物组织切片进行木质素自发荧光的观察；
[0010](3)将步骤(2)观察结束后的植物组织切片进行纤维素的荧光染料染色观察；
[0011](4)将步骤(3)观察结束后的植物组织切片进行明场染料染色观察。
[0012]进一步的，步骤(1)所述脱蜡复水处理包括：取37℃放置过夜的石蜡切片，置于80℃的烤片机上加热脱蜡12小时，直至切片上的石蜡基本被去除；将切片迅速投入到准备好的二甲苯中，静置20min，更换一次新的二甲苯，静置10min；将切片从二甲苯中取出，在吸水纸上垂直静置10s，除去玻片上残留的二甲苯后，将切片投入准备好的无水乙醇中，静置5min，重复两次，之后依次将切片投入95％乙醇，75％乙醇，50％乙醇，30％乙醇和纯水中，每一个梯度静置3min。
[0013]进一步的，步骤(2)所述观察包括：使用50％甘油压片，制成植物组织切片玻片，直接在荧光显微镜下用蓝光作为激发光源，观察荧光信号，观察结束后用蒸馏水冲洗。
[0014]进一步的，步骤(3)荧光染料染色观察包括：可清洗荧光染料染色观察、不可清洗荧光染料染色观察；当两种染色方式都使用时，顺序为先进行可清洗荧光染料染色观察，再进行不可清洗荧光染料染色观察。
[0015]进一步的，步骤(4)明场染料染色观察包括：可清洗明场染料染色观察、不可清洗明场染料染色观察；当两种染色方式都使用时，顺序为先进行可清洗明场染料染色观察，再进行不可清洗明场染料染色观察。
[0016]进一步的，所述可清洗的荧光染料包括荧光增白剂；
[0017]所述不可清洗的荧光染料包括刚果红；
[0018]所述可清洗的明场染料包括间苯三酚、番红、氯碘化锌；
[0019]所述不可清洗的明场染料包括甲苯胺蓝。
[0020]进一步的，步骤(3)所述可清洗荧光染料染色观察包括：将荧光增白剂原液稀释20
‑
50倍后，滴加80μl荧光增白剂稀释液及2滴10％KOH溶液于步骤(2)清洗后的载玻片上，染色3
‑
5min；蒸馏水冲洗所述玻片，使用50％甘油溶液压片后于紫外光下观察，观察结束后用蒸馏水冲洗；
[0021]所述不可清洗荧光染料染色观察包括：将浓度为0.5％的刚果红染色液80μL滴加在清洗后的载玻片上，染色3
‑
5min；使用蒸馏水轻轻冲洗玻片后，使用50％甘油溶液压片于蓝色荧光下观察刚果红与纤维素结合后发出的红色荧光，观察结束后用蒸馏水冲洗，将玻片投入至无水乙醇和冰醋酸按照3:1的比例混合的脱色液中脱色30min至切片彻底无色。
[0022]进一步的，步骤(4)所述可清洗明场染料染色观察包括：使用3％的间苯三酚酒精溶液与浓盐酸以2:1的比例配置的间苯三酚盐酸溶液80μL滴加在脱色后的载玻片上，立即压片；待染色1
‑
3min后，通过显微镜明场直接观察间苯三酚盐酸溶液与G型木质素结合后显示出的紫红色信号，观察结束后用蒸馏水冲洗，将玻片投入至无水乙醇和冰醋酸按照3:1的比例混合的脱色液中脱色5min至切片彻底无色；
[0023]所述不可清洗明场染料染色观察包括：使用蒸馏水稀释1％甲苯胺蓝至工作浓度为0.5％，吸取80μL滴加于脱色后的载玻片上，染色1
‑
3min，至条带肉眼可见变为紫黑色时停止染色；蒸馏水冲洗玻片两到三次至无明显多余的染液残留，滴加蒸馏水压上盖玻片于明场中观察。
[0024]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0025]本专利技术根据染料本身特性以及是否可洗除的特点进行合理排序使用，将荧光染料染色排在明场染料染色之前，将可清洗染料染色排在不可清洗染料染色之前，前一步的染色结果对后续染色观察不会造成明显干扰，达到同一份样品多次染色观察的优秀效果。通过对同一样本的多次染色观察，简便快捷，既能避免了由样本的不同带来的误差干扰，也能在样品稀少的时候达到多次观察的目标。
附图说明
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0027]图1为本专利技术实施例1木质素自发荧光染色结果；
[0028]图2为本专利技术实施例1纤维素荧光增白剂染色结果；
[0029]图3为本专利技术实施例1甲苯胺蓝染色结果；
[0030]图4本专利技术实施例2木质素自发荧光染色结果；
[0031]图5为本专利技术实施例2纤维素荧光增白剂染色结果；
[0032]图6为本专利技术实施例2纤维素刚果红染色结果；
[0033]图7为本专利技术实施例2间苯三酚染色结果；
[0034]图8为本专利技术实施例2甲苯胺蓝染色结果；
[0035]图9为本专利技术对比例1甲苯胺蓝染色结果；
[0036]图10为本专利技术对比例1甲苯胺蓝染色+番红染色结果；
[0037]图11为本专利技术对比例2番红染色结果；
具体实施方式
[0038]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0039]实施例1
[0040](1)石蜡切片脱蜡复水：取37℃放置过夜的石蜡切片，置于80℃的烤片机上高温脱蜡12小时，直至切片上的石蜡基本被去除。将切片迅速投入到准备好的二甲本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种植物组织切片复染方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)准备植物组织石蜡切片，并对石蜡切片进行脱蜡复水处理；(2)对脱蜡复水后的植物组织切片进行木质素自发荧光的观察；(3)将步骤(2)观察结束后的植物组织切片进行纤维素的荧光染料染色观察；(4)将步骤(3)观察结束后的植物组织切片进行明场染料染色观察。2.根据权利要求1所述的一种植物组织切片复染方法，其特征在于，步骤(1)所述脱蜡复水处理包括：取37℃放置过夜的石蜡切片，置于80℃的烤片机上加热脱蜡12小时，直至切片上的石蜡去除；将切片迅速投入到准备好的二甲苯中，静置20min，更换一次新的二甲苯，静置10min；将切片从二甲苯中取出，在吸水纸上垂直静置10s，除去玻片上残留的二甲苯后，将切片投入准备好的无水乙醇中，静置5min，共重复两次，之后依次将切片投入95％乙醇，75％乙醇，50％乙醇，30％乙醇和纯水中，每一个梯度静置3min。3.根据权利要求1所述的一种植物组织切片复染方法，其特征在于，步骤(2)所述观察包括：使用50％甘油压片，制成植物组织切片玻片，直接在荧光显微镜下用蓝光作为激发光源，观察荧光信号，观察结束后用蒸馏水冲洗。4.根据权利要求1所述的一种植物组织切片复染方法，其特征在于，步骤(3)荧光染料染色观察包括：可清洗荧光染料染色观察、不可清洗荧光染料染色观察；当两种染色方式都使用时，顺序为先进行可清洗荧光染料染色观察，再进行不可清洗荧光染料染色观察。5.根据权利要求1所述的一种植物组织切片复染方法，其特征在于，步骤(4)明场染料染色观察包括：可清洗明场染料染色观察、不可清洗明场染料染色观察；当两种染色方式都使用时，顺序为先进行可清洗明场染料染色观察，再进行不可清洗明场染料染色观察。6.根据权利要求4和5所述的一种植物组织切片复染方法，其特征在于，所述可清洗的荧光染料包括荧光增白剂；所述不可清洗的...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚春梅，李佳阳，任洁洁，类兴宇，珠拉太，白娟，张锐，敬栋，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：