一种PCV2Cap蛋白病毒样颗粒的制备方法技术

本发明专利技术属于分子生物学技术领域，提供了一种PCV2 Cap蛋白病毒样颗粒的制备方法：（1）人工合成密码子优化后的PCV2 Cap蛋白的编码基因；（2）对含有密码子优化后的PCV2 Cap蛋白基因的大肠杆菌进行诱导表达并裂解，离心后获得裂解液；（3）将裂解液纯化获得PCV2 Cap蛋白溶液；（4）将PCV2 Cap蛋白溶液进行透析以组装VLP。所述PCV2 Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术提供的方法能够提高Cap蛋白在大肠杆菌原核表达系统中的表达水平，体外组装获得的病毒样颗粒与自然存在PCV2粒子大小大致相同；且其对PCV2特异性抗体具有良好的免疫活性。疫活性。疫活性。

【技术实现步骤摘要】
一种PCV2 Cap蛋白病毒样颗粒的制备方法


[0001]本专利技术属于分子生物学
，具体涉及一种PCV2 Cap蛋白病毒样颗粒的制备方法。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2, PCV2）是作为猪圆环病毒病（PCVAD）的主要病原能够引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）等多种传染病。PCV2是一种单股环状DNA病毒，属于圆环病毒科圆环病毒属，PCV2粒子为二十面体结构，直径约为17nm，其最外层的衣壳结构由60个Cap蛋白组成。PCV2能够感染多种抗原递呈细胞（APC）并在其中繁殖复制，降低APC的抗原递呈作用从而引起猪的免疫抑制。在生产中PCV2通常与其他病原如PRRSV、PRV等混合感染使猪只出现明显的临床症状和组织病变。该病目前没有特异性的治疗措施，疫苗免疫是当前最有效的防控措施。
[0003]PCV2 Cap VLPs是不包含病毒核酸的由基因工程技术表达的PCV2衣壳蛋白，其有与天然病毒相似的结构但无法复制，拥有几乎与全病毒灭活疫苗相同数量的抗原表位和更高的生物安本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种PCV2 Cap蛋白病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）人工合成密码子优化后的PCV2 Cap蛋白的编码基因；（2）对含有密码子优化后的PCV2 Cap蛋白编码基因的大肠杆菌进行诱导表达并裂解，离心后获得裂解液；（3）将裂解液纯化获得PCV2 Cap蛋白溶液；（4）将PCV2 Cap蛋白溶液进行透析以组装VLP；步骤（4）中，透析的缓冲液配方为：Tris 50mM，NaCl 500mM，EDTA 5mM，NaH2PO
4 50 mM，Na2HPO
4 50 mM，L
‑
精氨酸300 mM，谷胱甘肽1.23 g/L，氧化型谷胱甘肽0.245 g/L，β
‑
巯基乙醇781.3 mg/L，聚乙二醇0.03%，甘油5%，Tween 80 0.03%，调节pH至8.0。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，PCV2 Cap蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，PCV2 Cap蛋白基因的编码基因如SEQ ID NO: 2所示。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，诱导表达的条件为：以浓度为0.2
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1.2 mM的IPTG在20
‑
37℃下诱导3
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：时建立，李俊，张成鑫，李琛，刘畅，刘玉伟，吴晓燕，徐绍建，韩红，
申请(专利权)人：山东省农业科学院畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：