一种含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸制造技术

本发明专利技术记载了一种含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其经一个或多个双三氟甲基苯核苷酸插入和/或置换，和/或反义寡核苷酸末端连接修饰一个或多个三氟甲基苯核苷酸。由于采用了三氟甲基苯核苷酸对反义寡核苷酸进行插入、置换或修饰技术，最终达到了增强核酸对与血浆蛋白之间的结合、改善核酸稳定性、改善核酸成药性及药物半衰期的目的。酸成药性及药物半衰期的目的。酸成药性及药物半衰期的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸


[0001]本专利技术涉及靶向给药领域，尤其涉及一种反义寡核苷酸。

技术介绍

[0002]核酸类药物又称核苷酸类药物，是各种具有不同功能的寡聚核糖核苷酸(RNA)或寡聚脱氧核糖核苷酸(DNA)，主要在基因水平上发挥作用。由某些动物、微生物的细胞内提取出的核酸(包括核苷酸和脱氧核苷酸)，或者用人工合成法制备的具有核酸结构(包括核苷酸和脱氧核苷酸结构同时又具有一定药理作用的物质，称为核酸药物或核酸类生化药物、广义的核酸药物可包括核苷酸药物、核酸药物及含有不同碱基化合物的药物。核酸药物具有多种药理作用，按其作用特点可分为:(1)抗病毒剂(2)抗肿瘤剂(3)干扰素诱导剂(4)免疫增强剂(5)功能剂等。一般认为，核酸药物包括核酸适体(Aptamer)、抗基因(Antigene)、核酶(Ribozyme)、反义核酸(Antisencenucleic acid)、RNA干扰剂。短链的DNA或RNA被称为寡聚核苷酸，其可以通过固相合成技术大规模合成。当前有多种寡聚核苷酸类药物被开发用于疾病的治疗，如siRNA，microRNA，mRNA，反义寡核苷酸(ASO)，核酸适体药物等。
[0003]其中，反义寡核苷酸(ASO)药物近年来发展迅猛。反义寡核苷酸(ASO)是一类通过序列特异地与靶基因DNA或mRNA结合而抑制该基因表达,在基因水平调控的分子药物。在合成这一类反义寡核苷酸中,常常需要对合成产物的长度,纯度等进行准确测定,以免影响后一步的活性实验和使用效果。毛细管凝胶或流动胶电泳方法已被广泛应用于单链或双链寡核苷酸的分离研究。目前，已市面上有几款反义寡核苷酸药物被美国食品药品管理局(FDA)批准用于相关疾病的治疗(福米韦生，用于治疗巨细胞病毒性视网膜炎；Kynamro，用于治疗家族性高胆固醇血症)。其主要通过与靶基因的DNA或mRNA特异结合而抑制基因的表达来发挥功能。
[0004]但是，在临床试验及实践中，反义寡核苷酸药物常存在血液凝固异常，血小板减少以及肾脏损害等风险。此外，反义寡核苷酸的较多药物稳定性低，具有一定程度的脱靶性，它们的脱靶往往会导致内源正常mRNA在翻译前水平的非正常降解，因此，其靶向药物活性较低，肾清除率较高，最终导致该药物在体内的半衰期短，需要较频繁地进行给药。由此可见，传统反义寡核苷酸疗法的发展并非一帆风顺。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题至少之一，本专利技术提供一种经过三氟甲基碱基类似物修饰改性的反义寡核苷酸，它克服了寡核苷酸在血清中易被核酸酶降解的特性。
[0006]上述的一种含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸经一个或多个双三氟甲基苯核苷酸插入和/或置换，和/或反义寡核苷酸末端连接修饰一个或多个双三氟甲基苯核苷酸。
[0007]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，末端连接修饰一个或多个双三氟
甲基苯核苷酸。
[0008]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，所述反义寡核苷酸末端连接修饰两个双三氟甲基苯核苷酸。
[0009]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，所述反义寡核苷酸为ASO
‑
KRAS，其序列如SEQ ID No.:1所示。
[0010]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，所述反义寡核苷酸为ASO
‑
EGFR，其序列如SEQ ID No.:2所示。
[0011]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，所述反义寡核苷酸经药物碱基修饰；优选地，所述药物碱基为5
‑
FU(5
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氟尿嘧啶)、吉西他滨(Gems)、阿霉素、顺铂，优选地，所述药物碱基为5
‑
FU(5
‑
氟尿嘧啶)、吉西他滨(Gems)。
[0012]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，所述药物碱基替换所述反义寡核苷酸ASO
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KRAS的第14位(胸腺嘧啶)、第15位(胞嘧啶)中的一个或多个；所述药物碱基替换所述反义寡核苷酸ASO
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EGFR的第3位(胸腺嘧啶)、第7位(胸腺嘧啶)、第19位(胞嘧啶)中的一个或多个。
[0013]上述含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸中，所述反义寡核苷酸经荧光分子化合物修饰，优选地，所述反义寡核苷酸经Cy5(Cyanine5)修饰。
[0014]本专利技术还涉及一种药物组合物，其包括前述的含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，以及医学和/或药学上可接受的赋形剂。所述药物组合物用作靶向给药。
[0015]本专利技术的优点和有益效果在于：
[0016]本专利技术提供了一种含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，采用三氟甲基苯核苷酸对反义寡核苷酸进行插入、置换或修饰，最终达到了增强核酸对与血浆蛋白之间的结合、改善核酸稳定性、改善核酸成药性及药物半衰期的目的。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1是本专利技术实施例1反义寡核苷酸血清稳定性测试结果示意图；
[0019]图2是本专利技术实施例1反义寡核苷酸干扰效果测试结果示意图；
[0020]图3是本专利技术实施例1反义寡核苷酸在标靶部位浓度测试结果示意图；
[0021]图4是本专利技术实施例1反义寡核苷酸在标靶部位浓度测试结果示意图；
[0022]图5是本专利技术实施例1反义寡核苷酸细胞毒性测试结果示意图；
[0023]图6是本专利技术实施例2反义寡核苷酸血清稳定性测试结果示意图；
[0024]图7是本专利技术实施例2反义寡核苷酸干扰效果测试结果示意图；
[0025]图8是本专利技术实施例2反义寡核苷酸在标靶部位浓度测试结果示意图；
[0026]图9是本专利技术实施例2反义寡核苷酸在标靶部位浓度测试结果示意图；
[0027]图10是本专利技术实施例2反义寡核苷酸细胞毒性测试结果示意图。
具体实施方式
[0028]下面结合附图和实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。
[0029]反义寡核苷酸
[0030]本专利技术记载了一种含有三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，此种反义寡核苷酸可将一个或多个双三氟甲基苯核苷酸插入其序列中或者将其置换。在一种实施例中，可将反义寡核苷酸末端连接修饰一个或多个双三氟甲基苯核苷酸，其中，本领域操作人员可根据实际需求决定插入或替换的双三氟甲基苯核苷酸基团数量。
[0031]例如，可将一个或多个双三氟甲基苯核苷酸插入所述反义寡核苷酸的中间位置或末端位置，作为一种优选方案可将其连接修饰于反义寡核苷酸末端。本专利技术所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸经一个或多个双三氟甲基苯核苷酸插入和/或置换，和/或反义寡核苷酸末端连接修饰一个或多个双三氟甲基苯核苷酸。2.如权利要求1所述的含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸末端连接修饰一个或多个双三氟甲基苯核苷酸。3.如权利要求1所述的含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸末端连接修饰两个双三氟甲基苯核苷酸。4.如权利要求3所述的含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸为ASO
‑
KRAS，其序列如SEQ ID No.:1所示。5.如权利要求3所述的含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸为ASO
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EGFR，其序列如SEQ ID No.:2所示。6.如权利要求1
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4任一项所述的含三氟甲基碱基类似物的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸经药物碱基修饰；优选地，所述药物碱基为5
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FU(5...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，王若文，孙洋，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：