大豆孢囊线虫基因Hg-ocr-2、其编码蛋白及其dsRNA在线虫防治中的应用制造技术

大豆孢囊线虫基因Hg

【技术实现步骤摘要】
大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2、其编码蛋白及其dsRNA在线虫防治中的应用


[0001]本专利技术分子生物学领域，尤其涉及一种大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2、其编码蛋白及其dsRNA在线虫防治中的应用。

技术介绍

[0002]大豆是重要的粮食和油料作物，而大豆孢囊线虫病是严重制约大豆产量的重要因素之一。大豆孢囊线虫病在我国大豆产区都有发生，估计每年由此造成的经济损失高达6亿元。大豆孢囊线虫(Soybean cyst nematode，SCN)属于植物定居型内寄生线虫，主要寄生于大豆等豆科植物的根部，侵入根系后易造成寄主根部发育迟缓，叶部变黄，一般减产30
‑
50％，严重时导致绝产。此外，大豆孢囊线虫侵染还会加剧其它病害的发生程度，例如大豆疫霉、大豆茎褐腐病等。
[0003]当前对大豆孢囊线虫的防治以化学防治法为主，在线虫侵染而又无抗病品种的地区，应用化学药剂防治大豆胞囊线虫确有效果。目前常用的有8％甲多种衣剂，药种比例为1∶75进行种子包衣处理；另外，还有5％甲基异硫磷等都能有效地防治大豆胞囊线虫病。但是农药存在对环境污染及对人畜有害的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术是要解决现有大豆孢囊线虫的化学防治方法存在环境污染及对人畜有害的问题，提供大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2、其编码蛋白及其dsRNA在线虫防治中的应用。
[0005]本专利技术提供大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
[0006]本专利技术提供大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的编码蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ IDNO：2所示。
[0007]本专利技术大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA序列如序列表中SEQ ID NO：3所示。
[0008]本专利技术以大豆孢囊线虫瞬时感受器电位香草素TRPV通道基因Hg
‑
ocr
‑
2为模板，设计特异性引物，通过MEGAscript RNAi试剂盒合成基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA片段。
[0009]本专利技术还提供大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA在防治线虫中的应用。
[0010]具体方法为：用含有大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA的处理液浸泡大豆孢囊线虫二龄幼虫，室温下暗处震荡孵育48h。
[0011]本专利技术的有益效果：
[0012]本专利技术的基因Hg
‑
ocr
‑
2来源于大豆孢囊线虫瞬时感受器电位香草素TRPV通道，该基因在线虫的尾感器中表达，是调控酸碱的化感基因，在大豆孢囊线虫的预寄生期二龄幼虫中表达最高。试验显示基因Hg
‑
ocr
‑
2参与调控大豆孢囊线虫对酸碱的趋化性及其对寄主的侵染和繁殖，可作为大豆孢囊线虫防治药物开发的靶标基因。这个基因的鉴定及其功能研究也是首次在植物寄生线虫中进行报道。
[0013]本专利技术针对TRPV通道基因Hg
‑
ocr
‑
2的碱基序列，筛选特定的功能区域合成dsRNA，通过体外干扰的方法测定dsRNA处理后的线虫对酸碱的趋化反应、对植物根部的侵染能力以及雌虫指数的影响，验证基因Hg
‑
ocr
‑
2在线虫预寄生和寄生过程中的作用。本专利技术TRPV通道基因Hg
‑
ocr
‑
2，经过双链RNA片段dsRNA
‑
Hg
‑
ocr
‑
2单独处理后，线虫对酸性pH(5.25)的趋化性降低8.4％，但对碱性pH(8.6)的趋化性提高12.3％；侵染至根内的二龄幼虫数量及侵染35天后根表雌虫数量分别下降45％和39.9％。结果表明基因Hg
‑
ocr
‑
2在调控大豆孢囊线虫对酸碱化感物质的趋化性及在侵染寄主及发育过程中发挥关键作用，可以作为杀线剂开发的靶标基因。
[0014]本专利技术对于大豆孢囊线虫致病机制的研究以及线虫防治具有重大理论和应用价值。
附图说明
[0015]图1为RT
‑
PCR克隆大豆孢囊线虫TRPV通道基因Hg
‑
ocr
‑
2；
[0016]图2为原位杂交显示Hg
‑
ocr
‑
2在SCN尾感器细胞的定位；
[0017]图3为外源dsRNA处理对二龄幼虫中Hg
‑
ocr
‑
2表达量的影响；
[0018]图4为dsRNA处理和未处理二龄幼虫J2对酸(pH 5.25)和碱(pH 8.6)的趋化指数；
[0019]图5为dsRNA处理和未处理二龄幼虫J2侵染大豆根部36h后根内的J2数目；
[0020]图6为dsRNA处理和未处理二龄幼虫接种大豆35天后根表和土壤内孢囊数量。
具体实施方式
[0021]本专利技术技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。
[0022]具体实施方式一：本实施方式大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2，其核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。
[0023]具体实施方式二：本实施方式大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的编码蛋白，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
[0024]具体实施方式三：本实施方式大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA序列如序列表中SEQ ID NO：3所示。
[0025]本实施方式以大豆孢囊线虫瞬时感受器电位香草素TRPV通道基因Hg
‑
ocr
‑
2为模板，设计特异性引物，通过MEGAscript RNAi试剂盒合成基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA片段。
[0026]具体实施方式四：本实施方式大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA在防治线虫中的应用。
[0027]具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四不同的是：大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA防治线虫的具体方法为：用含有大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA的处理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2，其特征在于该基因的核苷酸序列如序列表中SEQ IDNO：1所示。2.如权利要求1所述大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的编码蛋白，其特征在于其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。3.如权利要求1所述大豆孢囊线虫基因Hg
‑
ocr
‑
2的dsRNA序列如序列表中S...

【专利技术属性】
技术研发人员：王从丽，姜野，李春杰，黄铭慧，秦瑞峰，蒋丹，常豆豆，谢倚帆，赵亚男，
申请(专利权)人：中国科学院东北地理与农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：