一种海藻糖合酶突变体及其制备和应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程和酶工程技术领域，公开了一种海藻糖合酶突变体,该海藻糖合酶突变体是将海藻糖合酶亲本第160、192、216、228或234位氨基酸中的一个进行点突变得到的；具体是通过设计定点突变的突变引物，以携带海藻糖合酶基因的载体为模板进行定点突变并构建含突变体的质粒载体，然后转化进宿主细胞得到；该海藻糖合酶突变体应用于海藻糖的生产。本发明专利技术海藻糖合酶突变体含有热稳定性提高的海藻糖合酶，用于生产海藻糖具有很好的工业化前景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种海藻糖合酶突变体及其制备和应用


[0001]本专利技术属于基因工程和酶工程
，特别是涉及一种海藻糖合酶突变体及其制备和应用。

技术介绍

[0002]海藻糖由两个葡萄糖分子以α
‑
1,1糖苷键连接而成，它是一种非还原性双糖，甜度约为蔗糖的45％，素有“生命之糖”的美誉，广泛存在于各种生物体中，包括细菌、酵母、真菌和藻类以及一些昆虫、无脊椎动物和植物中，尤其在酵母中含量较多，面包和啤酒等发酵食品及虾类等也含有海藻糖。
[0003]海藻糖的无还原性、高度安全性、自身结构的稳定性以及它对生物膜、蛋白质等生物大分子的非特异性保护作用，使海藻糖显示出广阔的应用前景，越来越受到研究者的关注。美国FDA在2000年将海藻糖列为安全食品，随后2001年欧洲European Regulation System也将海藻糖列为安全品，我国卫生部在2005年正式批准海藻糖为新资源食品。目前，海藻糖已经被广泛运用于食品、化妆品和医药行业。
[0004]海藻糖生产方法有酵母提取法、双酶法和单酶法。早期海藻糖是从酵母中提取的，这种工本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海藻糖合酶突变体，其特征在于，是将氨基酸序列为序列表SEQ NO.1的海藻糖合酶分别在第160、192、216、228或234位氨基酸中进行一个点突变得到的；其中，突变体R160L为第160位氨基酸由精氨酸变成异亮氨酸，突变体D192A为第192位氨基酸由天冬氨酸变成丙氨酸，突变体T216N为第216位氨基酸由苏氨酸变成天门冬酰胺，突变体E228V为第228位氨基酸由谷氨酸变成缬氨酸，突变体G234D为第234位氨基酸由谷氨酸变成天冬氨酸。2.如权利要求1所述的海藻糖合酶突变体制备方法，其特征在于：包括以下步骤：a.在序列表SEQ NO.1海藻糖合酶氨基酸序列的基础上确定第160、192、216、228或234位氨基酸为突变位点，并设计定点突变的突变引物：引入R160L突变的定点突变引物为：正向引物：5
’‑
AGGCCTACTACTGGCACCTCTTCTACTGGCA
‑3’
(下划线为突变碱基)反向引物：5
’‑
GGCTGGTGCCAGTAGAAGAGGCGGTGCCAGT
‑3’
(下划线为突变碱基)；引入D192A突变的定点突变引物为：正向引物：5
’‑
GGGCCGACCTGGGGGTGGCCGGCTTCCGCCT
‑3’
(下划线为突变碱基)反向引物：5
’‑
GCGTCCAGGCGGAAGCCGGCCACCCCCAGGT
‑3’
(下划线为突变碱基)；引入T216N突变的定点突变引物为：正向引物：5
’‑
GCGAGAACCTCCCCGAGAACATTGAGGCGGT
‑3’
(下划线为突变碱基)反向引物：5
’‑
CGCTTCACCGCCTCAATGTTCTCGGGGAGGT
‑3’
(下划线为突变碱基)；引入E228V突变的定点突变引物为：正向引物：5
’‑
GCCTGAGGAAGGCCCTGGTGGAGCGCTACGG
‑3’...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘伟杰，景栋，徐明，
申请(专利权)人：潍坊盛泰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：